Identifizierung und Charakterisierung von neuen Genen für die ...
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λ-Phagen-PCR-Screen ................................................................................................................................. 170<br />
Vorbehandlung der Wirtsbakterien ...........................................................................................................................170<br />
Durchführung des λ-Phagen-PCR-Screens ...............................................................................................................170<br />
Ausplattieren der Phagenbibliothek ..........................................................................................................................171<br />
Aufreinigen positiver Phagen <strong>und</strong> Anlegen eines Phagenstocks ...............................................................................171<br />
DNA-Isolierung aus λ -Phagen .................................................................................................................................171<br />
Aufbereitung der KO-Konstrukt-DNA <strong>für</strong> ES-Zell-Elektroporation........................................................... 172<br />
RT-PCR ....................................................................................................................................................... 172<br />
PCR.............................................................................................................................................................. 173<br />
Isolation genomischer DNA ........................................................................................................................ 173<br />
Verdau <strong>von</strong> DNA mit Restriktionsendonukleasen....................................................................................... 173<br />
Klonierung <strong>von</strong> DNA-Fragmenten .............................................................................................................. 173<br />
Vektorpräparation .....................................................................................................................................................173<br />
Präparation <strong>von</strong> Restriktionsfragmenten ...................................................................................................................174<br />
Präparation <strong>von</strong> PCR-Fragmenten.............................................................................................................................174<br />
Blunt end-Klonierung................................................................................................................................................174<br />
Ligation.....................................................................................................................................................................174<br />
Agarose-Gelelektrophorese ......................................................................................................................... 175<br />
Isolation <strong>von</strong> DNA aus dem Agarosegel ..................................................................................................... 175<br />
Sequenzierung.............................................................................................................................................. 175<br />
Southern-Blot............................................................................................................................................... 176<br />
Radioaktives Labeln <strong>von</strong> Hybridisierungssonden........................................................................................ 176<br />
RNA-Techniken ............................................................................................................................................... 177<br />
Isolierung <strong>von</strong> Gesamt-RNA mit TRIzol..................................................................................................... 177<br />
Isolierung <strong>von</strong> Gesamt-RNA mit RNeasy Total RNA Isolation Kit............................................................ 177<br />
Aufreinigung <strong>von</strong> poly-A + RNA aus Gesamt-RNA..................................................................................... 177<br />
Northern-Blot-Analyse ................................................................................................................................ 177<br />
Protein-Techniken ............................................................................................................................................ 178<br />
Yeast-Two-Hybrid-Screen............................................................................................................................ 178<br />
GST-Pulldown-Essay................................................................................................................................... 180<br />
Affinitätsaufreinigung eines rekombinant exprimierten GST-Fusionsproteins............................................ 180<br />
Bradford-Assay zur Proteinkonzentrationsbestimmung ..............................................................................181<br />
In-vitro-Transkription <strong>und</strong> Translation ........................................................................................................ 181<br />
SDS-PAGE................................................................................................................................................... 181<br />
Histologie ......................................................................................................................................................... 182<br />
Anfertigung <strong>von</strong> Cryo-Schnitten.................................................................................................................. 182<br />
Anfertigung <strong>von</strong> Paraffinschnitten............................................................................................................... 182<br />
Hämatoxylin-Eosin-Färbung ....................................................................................................................... 182<br />
β-Galactosidase-Enzymhistochemie (lacZ-Färbung) .................................................................................. 183<br />
Protokoll <strong>für</strong> Cryo-Schnitte.......................................................................................................................................184<br />
Protokoll <strong>für</strong> Doppelfärbung lacZ + Immunhistochemie...........................................................................................184<br />
Protokoll <strong>für</strong> Whole-Mount-Embryonen oder Gehirne .............................................................................................184<br />
Immunhistochemische Färbungen ............................................................................................................... 185<br />
Protokoll <strong>für</strong> Cryo-Schnitte.......................................................................................................................................185<br />
Protokoll <strong>für</strong> Paraffinschnitte ohne Antigen-Unmasking ..........................................................................................185<br />
Protokoll <strong>für</strong> Paraffinschnitte mit Antigen-Unmasking.............................................................................................186<br />
Protokoll <strong>für</strong> Whole-Mount-Immunfärbungen..........................................................................................................186<br />
Tunnel Staining gegen Apoptose .................................................................................................................186<br />
In-situ-Hybridisierung <strong>von</strong> RNA-Sonden.................................................................................................... 187<br />
Herstellung <strong>von</strong> Digoxigenin markierten RNA-Sonden............................................................................................187<br />
Protokoll <strong>für</strong> ISH auf Cryo-Schnitten........................................................................................................................188<br />
ANHANG ................................................................................................................................................. 189<br />
LITERATURVERZEICHNIS ............................................................................................................... 189<br />
PUBLIKATIONEN................................................................................................................................. 195<br />
AKADEMISCHE LEHRER .................................................................................................................. 196<br />
LEBENSLAUF ........................................................................................................................................ 197
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