Identifizierung und Charakterisierung von neuen Genen für die ...
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Abbildung 146: Expressionsvektor<br />
pSP64-Poly(A) <strong>für</strong> in-vitro-Transkription<br />
<strong>und</strong> Translation eines<br />
Inserts über SP6-Promoter <strong>und</strong><br />
Poly-A als Basensequenz anstelle<br />
<strong>von</strong> Polyadenylierungssignal, was<br />
<strong>für</strong> <strong>die</strong> in-vitro-Transkription <strong>und</strong><br />
Translation wichtig ist. Das Insert<br />
muss ATG- <strong>und</strong> Stop-Codons mitbringen.<br />
Accession Number<br />
X65328. Bezugsquelle <strong>von</strong> Promega.<br />
Abbildung 147: Klonierungsvektor <strong>für</strong> PCR-Fragmente, <strong>die</strong> nach<br />
Aufreinigung direkt unter Ligasezusatz in den linearen Vektor<br />
einkloniert werden können, indem 3’-überhängende T-Basen an<br />
den Enden komplementär mit 3’-überstehenden A-Basen <strong>von</strong> der<br />
durch Taq-Polymerase vermittelten PCR-Reaktion paaren können.<br />
Zu beachten ist, dass nicht alle thermostabilen PCR-Polymerasen<br />
einen solchen 3’-A-Überhang produzieren (beispielsweise Pfu-<br />
Polymerase nicht). Vermittels T7- oder SP6-Promoter können<br />
Inserts direkt <strong>für</strong> <strong>die</strong> Sondensynthese bei in-situ-Hybridisierung<br />
verwendet werden <strong>und</strong> stehen über <strong>die</strong> Schnittstellen in der MCS<br />
<strong>für</strong> weitere Klonierungen zur Verfügung. Bezugsquelle: Promega.
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