Identifizierung und Charakterisierung von neuen Genen für die ...

SDS-Sammelgel (4%):
- 151 -
1,3 ml 30% Acrylamid / 0,8% Bisacrylamid (Bio-Rad) + 2,5 ml 0,5 M
Tris-HCl pH 6,8 + 0,1 ml 10% SDS + 0,1 ml 10% Ammoniumpersulfat
+ 20 µl TEMED + 6 ml dest. H2O.
10x TBE: 218 g Tris-Base + 110 g Borsäure + 9,3 g EDTA gelöst in 2 l dest. H2O, pH 8.3.
TE-Puffer: 1 ml 1 M Tris-HCl, pH 7,5 + 0,2 ml 0,5 M EDTA, pH 8,0 in 100 ml dest. H2O.
6x Ladepuffer für Agarosegele:
15% Ficoll 400 + 60 mM EDTA pH 8,0 + 0,01% Bromphenol-Blau + 0,03%
Xylencyanol.
λ-Verdünnungspuffer: 0,1 M NaCl + 8 mM MgSO4 + 0,05 M Tris-HCl, pH 7,5 + 0,01% Gelatine
Proteinase K-Lysepuffer:
100 mM Tris-HCl, pH 8,5 + 5mM EDTA + 0,2% SDS + 200 mM NaCl + 1
mg/ml Proteinase K.
In-situ Hybridisierungsmix:
50% Formamid + 5x SSC + 1% Boehringer Block + 5 mM EDTA + 0,1% Tween
20 + 0,1 % CHAPS + 0,1 mg/ ml Heparin + 1 mg/ml tRNA.
In-Situ KTBT: 50 mM Tris-HCl, pH 7,5 + 150 mM NaCl + 10 mM KCl + 1% Triton X-100.
In-Situ Blocklösung: 20% Schafserum in KTBT.
In-Situ NTMT: 100 mM Tris-HCl, pH 9,5 + 100 mM NaCl + 50 mM MgCl2 + 0,05 % Tween 20.
In-Situ PBT: PBS mit 0,1% Triton X-100 mit DEPC behandelt und autoklaviert.
Southern-Hybridisierungslösung:
6x SSC + 0,01 M EDTA + 5x Denhardt-Lösung + 0,5% SDS
RNA-Hybridisierungspuffer:
25 mM KPO4 pH 7,4 + 5x SSC pH 7,5 + 50 µg/ µl Heringsspermium-DNA +
50% Formamid + (0,02% Ficoll + 0,02% Polyvinylpyrrolidon + 0,02 % BSA)
+ (alternativ zu den Sachen in Klammern 5x Denhardt-Lösung).
RNA-Ladepuffer: 1 mM EDTA + 0,25% Bromphenolblau + 0,25% Xylencyanol + 50% Glycerin
10x MOPS-Puffer: 0,2 M MOPS + 0,5 M Natriumacetat + 0,01 M EDTA