Identifizierung und Charakterisierung von neuen Genen für die ...

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Vector Laboratories, Inc., 30 Ingold Road, Burlingame, CA 94010 USA
Antigen Unmasking Solution (H-3300, Lagerung bei 4°C).
Vectashield H-1000 Mounting Medium For Fluorescence (H-1000/P1216, bei 4°C lagern).
Vectashield H-1300 Mounting Medium With Propidium Iodide (H-1300/P1001, bei 4°C lagern).
Vogel GmbH & CO. KG, Marburger Str. 81, 35396 Giessen
„Histoclear“ – Xylolersatz XEM-20 (ND-HS-2001).
Lösungen
FixA: 2,7 ml 37% Formaldehyd + 0,8 ml 25% Glutaraldehyd + 0,2 ml 10% NP-40
mit PBS auf 100 ml aufgefüllt.
FixB: 2,7 ml 37% Formaldehyd + 0,8 ml 25% Glutaraldehyd + 2 ml 10% NP-40
+ 10 ml 1% DOC (Na-Desoxycholat) mit PBS auf 100 ml aufgefüllt.
Hoechst-Stain (2000x):
0,1 mg/ml Bisbenzimide H 33258 in Millipore H2O aufgelöst.
PBS (20x): 160 g NaCl + 4 g KCl + 26,94 g Na2HPO4·2H2O, 1,95 g + NaH2PO4·2H2O + 4 g KH2PO4,
aufgelöst in 1 l Millipore-H2O.
PBT: 50 ml 20xPBS + 2 ml Tween ® 20, verdünnt zu 1 l Millipore-H2O.
x-Gal-Färbelösung: 2 ml MgCl2 (100 mM) + 2,5 ml K4Fe(CN) 6 (200 mM) + 2,5 ml K3Fe(CN) 6
(200 mM) + 2,5 ml X-Gal (40 mg/ml in Dimethylformamid) mit PBS zu 100 ml.
GST-Resuspensionspuffer:
50 mM Tris pH 7,5 + 500 mM NaCl + 2 mM EDTA + Protease Inhibitor Cocktail
(Roche).
GST-Waschpuffer: 50 mM Tris pH 7,5 + 1000 mM NaCl + 2 mM EDTA + Protease Inhibitor
Cocktail (Roche).
GST-Bindepuffer: 20 mM Tris pH 7,5 + 100 mM NaCl + 1 mM EDTA + 0,1% NP-40 + 1 mM
PMSF (frisch dazugegeben).
GST-Reinigungspuffer:
20 mM Tris pH 7,5 + 150 mM NaCl + 1 mM EDTA + 0,1% NP-40 + 1 mM
PMSF (frisch dazugegeben).
SDS-2x-Ladepuffer:
6% β-Mercaptoethanol, 6% SDS, 0,6% Bromphenol-Blau, 20% Glycerol.
SDS-Laemmli-Puffer:
25 mM Tris-HCl pH 7,5 + 250 mM Glycin + 0,1 % SDS.
SDS-Trenngel (12%):
10 ml 30% Acrylamid / 0,8% Bisacrylamid (Bio-Rad) + 6,25 ml 1,5 M
Tris-HCl pH 8,8 + 0,25 ml 10% SDS + 0,25 ml 10% Ammoniumpersulfat
+ 25 µl TEMED + 8,5 ml dest. H2O.