Identifizierung und Charakterisierung von neuen Genen für die ...

der Langzeitpotenzierung (LTP). Der entorhinale
Cortex spielt eine wichtige Rolle bei der
Gedächtnisbildung. Er reagiert nach einem
Gedächtnisbildungsreiz (z.B. einem einer Testperson
auf einem Bildschirm gezeigten Wortes)
schon nach 300 ms. Nur diejenigen Erregungen,
die er an den Hippocampus weiterleitet, führen
zur Speicherung des entsprechenden Reizes im
Gedächtnis. Nervenzelluntergang im entorhinalen
Cortex findet sich schon zu einem frühen
Zeitpunkt der Alzheimer-Krankheit und
wird für die hierbei auftretenden Merkfähigkeitsstörungen
verantwortlich gemacht.
Die Expression von TRIM46 bzw. die lacZ-
Blaufärbung bleibt auch im adulten Gehirn
erhalten, so dass hier von einer permanenten
Funktion des Gens TRIM46 auszugehen ist, die
nicht nur auf die embryonale Entwicklung
beschränkt ist. Daher wäre ein chronischer
Phänotyp durch den TRIM46-KO hier am
Ehesten zu erwarten. Allerdings konnte auch hier
keine auffällige morphologische Veränderung im
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Abbildung 137: Nervenverknüpfungen zwischen entorhinalem
Cortex und Hippocampus über Gyrus dentatus, CA1
und CA3 (Hanser 2001).
Vergleich von Wildtypen mit hetero- und homozygoten TRIM46-KO innerhalb der
Messempfindlichkeiten beobachtet werden, wobei Tiere bis zu einem Alter von 9 Monaten betrachtet
wurden. Auch wenn nicht auszuschließen ist, dass solche Veränderungen in späterem Alter noch auftreten,
so wäre es wahrscheinlicher, nach Veränderungen in anderen Bereichen zu suchen, als das wären
Veränderungen physiologischer Parameter und insbesondere angesichts des Gehirnes und Cortex im
Verhalten, wobei im Hippocampus das Augenmerk auf die Lernfähigkeit zu richten wäre. Dazu später
mehr.
Protein-Interaktionspartner von TRIM46
Da die Auswertung der Expressionsmuster von TRIM46 und der Vergleich dieser Gewebe zwischen KO
und Wildtyp keinen offensichtlichen Phänotyp zeigte, bot es sich an, mit einer alternativen Strategie
weitere Informationen über die mögliche Genfunktion zu erhalten. Da TRIM46 ein Mitglied der TRIM-
Proteinfamilie ist, die sich durch E3-Ubiquitinligase-Funktionalität kennzeichnet, war ein solcher Ansatz
die Suche nach Protein-Interaktionspartnern mittels eines Yeast-Two-Hybrid-Screens. Für diesen Ansatz
wurde die cDNA von TRIM46 kloniert, wobei das Vorkommen von Splicevarianten und 2 verschiedene in
Betracht kommende Protein-Isoformen festgestellt wurden. Diese waren nicht nur unterschiedlich lang,
sondern zeigten in Zellkulturexperimenten eine abweichende subzelluläre Lokalisation, wobei die längere
Variante sowohl im Zellkern als auch Cytoplasma, die kürzere nur im Cytoplasma vorkam. Beide Protein-
Isoformen wurden für den Yeast-Two-Hybrid-Screen eingesetzt, wobei cDNA-Bibliotheken von Gehirn
und Körper aus der Maus verwendet wurden. Hierbei wurden nur für die längere Variante Protein-
Interaktionspartner gefunden.
Es wurde ein besonderes Yeast-Two-Hybrid-Verfahren der Firma Mobitec eingesetzt, dass mit GFP als
Reporter anstelle von β-Galactosidase arbeitet, wodurch das Verfahren sowohl schneller als auch sicherer
gegenüber falsch positiven Resultaten sein sollte. Die Tatsache, dass für die kürzere Isoform von TRIM46
nicht mal ein falsch positiver Klon gefunden wurde, obwohl beide Screens parallel und unter gleichen
Bedingungen durchgeführt wurden, deutet tatsächlich auf eine hohe Sicherheit demgegenüber hin.
Umgekehrt wurden die für die längere Isoform gefundenen Klone dadurch umso wahrscheinlicher.