2.3. AUSWERTUNG - Chromatographie - Naturwissenschaftliches ...

Dr. J. P. Ewald und W. Woll 

CHROMATOGRAPHIE 

http://www.ntk-landau.de/chromatographie

VORWORT 

WOZU DIESE SEITE? 

Am Naturwissenschaftlichen Technikum Dr. K¸nkele in Landau werden BTA (Biologischtechnische 

Assistenten/Assistentinnen), CTA (Chemisch-technische 

Assistenten/Assistentinnen), MTA (Medizinisch-technische Assistenten/Assistentinnen) und 

PTA (Pharmazeutisch-technische Assistenten/Assistentinnen) ausgebildet. Sie alle 

durchlaufen dabei u.a. ein chromatographisches Praktikum, diese Seiten dienen der 

selbst‰ndigen Praktikumsvorbereitung durch die Sch¸ler. Chromatographie ist ein 

wichtiges Verfahren f¸r chemische Analysen. Die theoretischen und praktischen Grundlagen 

werden hier erl‰utert. Genaue Versuchsvorschriften finden sich hier nicht, da sie von den 

Fachrichtungen, den vorhandenen Mˆglichkeiten und dem technischen Fortschritt abh‰ngen. 

Die Seite wurde im Rahmen eines Fortbildungskurses INTEL - Lehren f¸r die Zukunft 

erstellt. 

WAS FINDEN SIE HIER? 

� Zur ersten Orientierung kann die Sitemap dienen, in der alle behandelten Themen 

¸bersichtlich zu finden sind. 

� In einem Glossar kˆnnen Sie jederzeit Fachbegriffe nachschlagen. 

� Weitere Informationsquellen sind unter Literatur und Links zu finden. 

� Das Impressum macht auf einige juristisch notwendige Vorbehalte aufmerksam. 

FEEDBACK 

Diese Seite ist sicherlich nicht perfekt. Deshalb sind wir dankbar f¸r R¸ckmeldungen. Dazu 

sind zwei Mˆglichkeiten vorbereitet: 

� Sie kˆnnen ein entsprechendes Formular ausdrucken und ausf¸llen oder 

� sich per E-Mail an uns wenden. 

Chromatographie 1 

© Dr. J. P. Ewald und W. Woll 2002

SITEMAP 

Einleitung 

Grundlagen 

D¸nnschichtchromatographie ( DC ) 

Fl¸ssigkeits-S‰ulenchromatographie 

Gaschromatographie ( GC ) 

Gleichgewichte I 

Trennprinzip 

Auswertung 

Trennsysteme 

Versuchstechnik 

Fehlerquellen 

Mobile Phasen 

Pumpen 

Probenaufgabe 

S‰ulen 

Detektoren 

Fehlerquellen 

Gasversorgung 

Probenaufgabe 

S‰ulen 

Detektoren 

Fehlerquellen 

Beispiele 

Zwei Verfahren 

DC-Auswertung 

SC-Auswertung 

Flieflmittel 

Schichtmaterialien 

Probenauftrag 

Entwicklung 

Nachbehandlung 

Integrator 

Berechnungen 

Glossar 

Literatur und Links 

Impressum 



1. EINLEITUNG ................................................................................................... 4 

2. GRUNDLAGEN ................................................................................................ 5 

2.1. Gleichgewichte I ...................................................................................... 5 

2.1.1. Beispiele ............................................................................................ 7 

2.2. Trennprinzip .......................................................................................... 10 

2.2.1. Zwei Verfahren................................................................................ 13 

2.3. Auswertung............................................................................................ 15 

2.3.1. DC-Auswertung............................................................................... 16 

2.3.2. SC-Auswertung ............................................................................... 18 

2.3.2.1. Integrator................................................................................... 20 

2.3.2.2. Berechnungen............................................................................ 23 

3. D‹NNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE ( DC ) .................................................. 24 

3.1. Trennsysteme......................................................................................... 25 

3.1.1. Flieflmittel ....................................................................................... 26 

3.1.2. Schichtmaterialien ........................................................................... 27 

3.2. Versuchstechnik..................................................................................... 29 

3.2.1. Probenauftrag .................................................................................. 30 

3.2.2. Entwicklung..................................................................................... 31 

3.2.3. Nachbehandlung .............................................................................. 34 

3.3. Fehlerquellen ......................................................................................... 35 

4. FL‹SSIGKEITS-SƒULENCHROMATOGRAPHIE ............................................... 36 

4.1. Mobile Phasen........................................................................................ 37 

4.2. Pumpen.................................................................................................. 38 

4.3. Probenaufgabe ....................................................................................... 39 

4.4. S‰ulen .................................................................................................... 41 

4.5. Detektoren ............................................................................................. 43 


5. GASCHROMATOGRAPHIE ( GC )................................................................... 49 

5.1. Gasversorgung ....................................................................................... 49 

5.2. Probenaufgabe ....................................................................................... 50 

5.3. S‰ulen .................................................................................................... 53 

5.4. Detektoren ............................................................................................. 56 


6. GLOSSAR...................................................................................................... 60 

7. LITERATUR UND LINKS ................................................................................ 64 

8. IMPRESSUM .................................................................................................. 65 



1. EINLEITUNG 

Zuerst eine (vorl‰ufige) Definition: 

ANALYTISCHE CHEMIE 

Die Chromatographie ist ein Verfahren der 

instrumentellen analytischen Chemie zur 

Auftrennung von Substanzgemischen. 

In der analytischen Chemie werden Substanzen auf ihre Zusammensetzung hin untersucht. 

Solche Untersuchungsproben kˆnnen sein: 

Trinkwasser (z.B. f¸r S‰uglinge sch‰dlicher Nitratgehalt) 

S¸flwaren (z.B. enthaltenen Lebensmittelfarben) 

Obst (z.B. Vitamingehalt) 

Medikamente (z.B. Menge des enthaltenen Wirkstoffs) 

Superbenzin (z.B. giftiger Benzolgehalt) 

Bei der Analyse gibt es zwei grunds‰tzliche Fragestellungen: 

1. Was ist in der Untersuchungsprobe enthalten? (qualitative Analyse) 

2. Wie viel von einer bestimmten Substanz ist in der Untersuchungsprobe enthalten? 

(quantitative Analyse) 

TRENNVERFAHREN 

Bei Substanzgemischen ist zur Beantwortung dieser Fragen oft eine Auftrennung der Probe in 

ihre Bestandteile erforderlich. Dazu gibt es eine ganze Reihe von Techniken wie Filtration, 

Zentrifugation, Extraktion, Destillation usw. Die Chromatographie ist ein solches Trennverfahren. 

INSTRUMENTELLE ANALYTIK 

Urspr¸nglich wurden Analysen mit Glas- u.a. Ger‰ten in Handarbeit durchgef¸hrt. 

Inzwischen werden solche Untersuchungen mittels spezieller Ger‰te angestellt. Dadurch 

kˆnnen bei geringeren Kosten mehr Analysen durchgef¸hrt werden. Die Bedienung solcher 

Ger‰te erfordert qualifiziertes Personal wie z.B. CTA oder andere technische Assistenten. 

Neben den chromatographischen Verfahren werden oft spektrometrische Methoden eingesetzt. 



VERFAHREN DER CHROMATOGRAPHIE 

Das Prinzip der chromatographischen Trennung kann unterschiedlich praktisch umgesetzt 

werden. 

� Die D¸nnschicht-Chromatographie (DC) ist ein einfaches Verfahren, bei dem sehr 

leicht ge‰nderte Trennbedingungen erprobt werden kˆnnen. Auf eine quantitative 

Auswertung wird hier meist verzichtet. 

� Die S‰ulen-Chromatographie (SC) und die HPLC (high performance liquid 

chromatography) arbeiten mit Fl¸ssigkeiten, die durch Trenns‰ulen strˆmen und dabei 

die Untersuchungsproben auftrennen. 

� Die Gas-Chromatographie (GC) ersetzt die Fl¸ssigkeit durch ein strˆmendes Gas, 

arbeiten aber nach dem gleichen Prinzip wie die S‰ulenchromatographie. Sie eignet 

sich nat¸rlich nur f¸r fl¸chtige Substanzen. 

2. GRUNDLAGEN 

‹BERSICHT 

Chromatographische Verfahren arbeiten immer mit zwei Phasen, in denen sich die 

Komponenten einer Probe befinden kˆnnen. Dabei stellt sich jeweils ein spezifisches 

Gleichgewicht ein, d.h. die einzelnen Substanzen sind in jeweils einer charakteristischen 

Weise zwischen den beiden Phasen verteilt. 

Wenn eine der beiden Phasen fest steht, w‰hrend die andere sich daran vorbei bewegt, wird 

die Bewegung der Probenkomponenten von der Gleichgewichtslage mit bestimmt. So kommt 

es zu einer Auftrennung der Probe in ihre Bestandteile. Dieses Trennprinzip wird 

ausf¸hrlicher erl‰utert. 

Schliefllich wollen wir hier einiges zur Auswertung chromatographischer Experimente sagen, 

die oft f¸r die verschiedenen Verfahren nach dem gleichen Schema abl‰uft. 

2.1. GLEICHGEWICHTE I 

CHEMISCHES GLEICHGEWICHT 

Bei einer chemischen Reaktion werden die Ausgangsstoffe (Edukte) verbraucht und neue 

Produkte gebildet. 

Edukte → Produkte 

Die Reaktionen kˆnnen unterschiedlich schnell verlaufen, die benˆtigten Zeiten reichen von 

Sekundenbruchteilen (z.B. Detonationen) bis zu Jahrhunderten und l‰nger (z.B. in antiken 

Gl‰sern). Bei erhˆhter Temperatur und bei grˆflerer Konzentration der Edukte verl‰uft die 

Reaktion schneller. 



Oft ist es so, dass eine Reaktion auch umgekehrt verlaufen kann. Dann gibt es eine 

Konkurrenz zwischen 

� Hinreaktion, die Edukte verbraucht und Produkte erzeugt und 

� R¸ckreaktion, die die Produkte der Hinreaktion verbraucht und deren Edukte erzeugt. 

Edukte ⇆ Produkte 

Von auflen kann man kann man diese beiden Reaktionen nicht getrennt beobachten, man sieht 

nur deren Differenz. Wenn die Hinreaktion schneller ist als die R¸ckreaktion, dann werden 

insgesamt mehr Edukte verbraucht und mehr Produkte gebildet. Dadurch sinkt die 

Geschwindigkeit der Hinreaktion, w‰hrend die R¸ckreaktion schneller wird. Das geht 

schliefllich so weit, bis beide Reaktionen gleich schnell sind. Dann spricht man von einem 

dynamischen Gleichgewicht, die Konzentrationen ‰ndern sich dann auch langfristig nicht 

weiter. Dann gilt f¸r die Konzentrationen der Reaktionspartner das Massenwirkungsgesetz 

(MWG). 

c( 

Produkte) 

K � 

c(Edukte) 

Das einfachste Beispiel f¸r ein dynamisches Gleichgewicht ist das Verteilungsgleichgewicht. 

Dazu ein Experiment: 

Iod lˆst sich mit gelb-br‰unlicher Farbe in Wasser/Methanol und mit rot-violetter Farbe in 

Petrolbenzin. Die beiden Fl¸ssigkeiten sind nicht miteinander mischbar. 

Bei Sch¸tteln einer Iod-Lˆsung in Petrolbenzin mit Wasser/Methanol wechselt ein (kleiner) 

Teil des Iods in das Wasser/Methanol. Sch¸ttelt man umgekehrt reines Petrolbenzin mit einer 

Lˆsung von Iod in Wasser/Methanol, wandert das Iod in entgegengesetzter Richtung ¸ber die 

Grenze zwischen den beiden Phasen. 



Als Reaktionsgleichung formuliert passiert dabei folgendes: 

Iod in Wasser ⇆ Iod in Cyclohexan 

Walter NERNST entdeckte, dass man das Massenwirkungsgesetz auch auf solche Experimente 

anwenden kann, es tr‰gt dann den Namen NERNSTscher Verteilungssatz. 

2.1.1. BEISPIELE 

c( 

Iod in Wasser ) 

K � 

c(Iod 

in Cyclohexan) 

Die Verteilung ist nur ein Beispiel, wie Substanzen ein Gleichgewicht zwischen zwei Phasen 

finden kˆnnen. In der Chromatographie sind folgende Mechanismen wichtig: 

� Verteilung 

� Adsorption 

� Verdampfung 

� Dissoziation 

� Immunreaktion 

� Diffusion 

VERTEILUNGSGLEICHGEWICHT 

Unter Verteilung versteht man den Austausch einer gelˆsten 

Substanz zwischen zwei Fl¸ssigkeiten, die sich nicht miteinander 

mischen. Ein Beispiel wurde oben schon besprochen. 

Die Reaktionsgleichung lautet: 

Iod in Wasser ⇆ Iod in Cyclohexan 

c( 


K � 

c(Iod 


In diesem Fall bezeichnet man das Massenwirkungs-gesetz auch als Nernstschen Verteilungssatz. 

ADSORPTIONSGLEICHGEWICHT 

Bei der Adsorption wechselt eine Substanz aus der Fl¸ssigkeit oder der Gasphase auf die 

Oberfl‰che einer festen Substanz. Eine Lˆsung von roter Lebensmittelfarbe in Wasser wird 

durch Zugabe von festem Polyamidpulver entf‰rbt, die Lebensmittelfarbe ist an das Polyamid 

adsorbiert. 

F. in Wasser ⇆ F. auf Polyamid 

c( 


K � 

c(Iod 


Adsorptionsmittel werden u.a. auch zum Entf‰rben von Lˆsungen und als Trockenmittel (z.B. in Arzneimittelrˆhrchen) 

eingesetzt. Ein wichtiges Adsorptionsmittel ist Aktivkohle. 



VERDAMPFUNGSGLEICHGEWICHT 

DISSOZIATIONSGLEICHGEWICHTE 

Beim Verdampfungsgleichgewicht wechselt eine Substanz aus der 

fl¸ssigen Phase (auch Lˆsungen) in die Gasphase und zur¸ck. 

Brom ist eines der wenigen gef‰rbten Gase, wo man das 

beobachten kann. 

Gelˆstes Brom ⇆ Gasfˆrmiges Brom 

p( 

Gasfˆrmiges 

Brom) 

K � 

c(Gelˆstes 

Brom) 

Das MWG ist hier auch als HENRYsches Gesetz bekannt. Es kann auch beim 

÷ffnen einer Mineralwasserflasche beobachtet werden: bei geringerem Druck 

lˆst sich weniger Kohlendioxid im Wasser. Wenn ein Taucher zu schnell 

aufsteigt, so dass sich dieses Gleichgewicht nicht einstellen kann, f¸hren 

Gasbl‰schen im Blut und im Gewebe zu der gef¸rchteten Taucherkrankheit. 

kann, f¸hren Gasbl‰schen im Blut und im Gewebe zu der gef¸rchteten 

Taucherkrankheit. 

Die Dissoziation eines Elektrolyten, d.h. sein Zerfall in elektrisch geladenen Ionen findet 

normalerweise in w‰ssriger Lˆsung statt. Indikatoren wie Bromthymolblau sind Substanzen, 

die in dissoziierter Form und in undissoziierter Form unterschiedliche Farben haben. Die 

Gleichgewichtslage ñ und damit auch die Farbe der Lˆsung ñ ist stark pH-abh‰ngig. 

� � 

HA ⇆ H � A 

� � 

c(H ) �c(A 

) 

KS 

� 

c(HA) 

Ionenaustauscher sind Feststoffe, an deren Oberfl‰che solche Elektrolytfunktionen fest 

gebunden sind. Im Kontakt mit Wasser stellen sich dann Dissoziationsgleichgewichte an der 

Oberfl‰che ein. Bei einem Kationenaustauscher konkurrieren die verschiedenen gelˆsten 

Kationen um die fest gebundenen Anionen des Austauschers. 

Nat¸rliche Ionenaustauscher sind Tonminerale und Humusstoffe im Boden sowie Zeolithe. Im Labor werden 

allerdings in der Regel k¸nstliche Ionenaustauscher eingesetzt, das sind Kunstharze mit sauren (z.B. SO3 � 

� , 

� 

� PO , COO � 

� , OH 

3 H 

� 

� ) oder basischen (z.B. � N (CH 3 ) 3 , NH 2 

� ) funktionellen Gruppen. 



IMMUNREAKTIONSGLEICHGEWICHTE 

Antigene und Antikˆrper reagieren miteinander in einer Immunreaktion. Wird einer der 

normalerweise gelˆsten Reaktionspartner auf der Oberfl‰che eines Feststoffs chemisch 

gebunden, so kann sich dieses Gleichgewicht auch zwischen zwei Phase einstellen. 

c(Ag-Ak) 

Ag + Ak ⇆ Ag-Ak KS 

� 

c(Ag) �c(Ak) 

Im Kˆrper dient diese Reaktion der Abwehr von Krankheitserregern und anderer unerw¸nschter Stoffe. 

DIFFUSIONSGLEICHGEWICHTE 

Unter Diffusion versteht man die langsame Ausbreitung einer Substanz in einem Material 

durch die ungeregelte W‰rmebewegung ihrer Molek¸le. Bei gef‰rbten Substanzen wie dem 

Kaliumpermanganat in Wasser kann man diese Ausbreitung beobachten (siehe Bild). 

F¸r die Chromatographie interessant ist die Diffusion in die Hohlr‰ume eines porˆsen 

Materials, wenn diese so eng sind, dass sie nur Molek¸le bis zu einer bestimmten Grˆfle 

hineinlassen. Je kleiner die Molek¸le sind, desto mehr Poren stehen ihnen zur Verf¸gung, und 

desto l‰nger kˆnnen sie sich in dem porˆsen Material aufhalten ñ entsprechend steigt der dort 

"gebundene" Anteil der jeweiligen Substanz. 

Neben Feststoffen, die aus porˆsen Kˆrnern bestehen, werden im Labor oft auch Gele eingesetzt. Gele sind 

Lˆsungen von Makromolek¸len, deren Konzentration so hoch ist, dass die Makromolek¸le ein relativ festes 

Ger¸st bilden, in dem das Lˆsungsmittel wie in einem Schwamm gebunden ist. Allgemein bekannt ist Gelatine 

als ein solcher Gelbildner. 



2.2. TRENNPRINZIP 

SO GEHT ES NICHT, ... 

Die Gleichgewichte f¸r die Verteilung verschiedener Substanzen zwischen zwei Phasen (z.B. 

ein Verteilungsgleichgewicht oder auch ein Adsorptionsgleichgewicht) werden unterschiedlich 

liegen. 

In diesem Beispiel befinden sich unterschiedliche Anteile in den beiden Phasen: 

Substanz 

Obere Phase 20% 60% 90% 

Untere Phase 80% 40% 10% 

So ist demnach keine vollst‰ndige Trennung der Substanzen zu erreichen: 



... ABER SO! 

In der Chromatographie werden die beiden Phasen gegeneinander bewegt, indem man z.B. 

eine fl¸ssige Phase durch ein festes Pulver in einem Glasrohr sickern l‰sst. Dann kommt die 

Fl¸ssigkeit st‰ndig mit neuer fester Phase in Kontakt und die feste Phase wird st‰ndig von 

neuer Fl¸ssigkeit durchsp¸lt. Das Verteilungsgleichgewicht zwischen der Fl¸ssigkeit und der 

festen Phase muss sich st‰ndig neu einstellen. (Auch in diesem Fall kann ein Verteilungsgleichgewicht vorliegen, wenn die 

feste Phase oberfl‰chlich mit einem d¸nnen Film einer zweiten Fl¸ssigkeit ¸berzogen ist.) Gedanklich kann man das Verfahren 

in zwei Schritte zerlegen, die sich laufend abwechseln: 

DAS MODELL DER THEORETISCHEN B÷DEN 

1. Die mobile Phase flieflt eine bestimmte Strecke (die Hˆhe eines theoretischen Bodens) 

weiter. Dadurch kommt sie in Kontakt mit neuer station‰rer Phase. 

2. Die mobile Phase wird in Gedanken angehalten, das Gleichgewicht zwischen beiden 

Phasen stellt sich neu ein. Vorne wird Substanz aus der mobilen Phase in die 

station‰re Phase wechseln, w‰hrend weiter hinten ein umgekehrter Austausch 

stattfindet. 

Diese beiden Schritte finden ñ in diesem Modell ñ im laufenden Wechsel statt. Das folgende 

Bild zeigt den Ablauf: 





Wenn man dieses Modell Schritt f¸r Schritt durchrechnet, stellt man fest, dass eine Substanz, 

die in einem theoretischen Boden aufgegeben wurde, sich im Laufe der Zeit ¸ber mehrere 

benachbarte Bˆden ausbreitet. Diese Verbreiterung wird in der Praxis tats‰chlich gefunden 

und man kann daraus die Hˆhe eines theoretischen Bodens bestimmen. Man findet Werte von 

wenigen Millimetern bis zu Bruchteilen eines Millimeters. 

DIE RESULTIERENDE GESCHWINDIGKEIT 

� Die mobile Phase strˆmt mit einer bestimmten Geschwindigkeit v0 (in mm/s) durch 

die station‰re Phase. 

� Je nach Lage des Gleichgewichts wird sich eine bestimmte Substanz zu einem 

bestimmten Anteil x in der mobilen Phase befinden, w‰hrend der restliche Anteil (1-x) 

momentan in der station‰ren Phase gebunden ist und nicht wandert. 

� Weil die Substanz zwischen den beiden Phasen wechseln kann, wandert sie als 

geschlossene Zone durch die station‰re Phase. Die Durchschnittsgeschwindigkeit 

betr‰gt dabei v � x � v0 

� ( 1� 

x) 

� 0 mm / s also : v � x � v 0 

� Verschiedene Substanzen haben unterscheiden sich in der Gleichgewichtslage und 

wandern deshalb mit unterschiedlichen Geschwindigkeiten. 

2.2.1. ZWEI VERFAHREN 

AUS DEM SPORT 

Beim Laufen gibt es grunds‰tzlich zwei Mˆglichkeiten, eine Geschwindigkeit zu bestimmen: 

1. Man kann ñ wie beim 100 m Lauf ñ eine bestimmte Strecke vorgeben und dann 

feststellen, wie viel Zeit die Teilnehmer f¸r diese Strecke benˆtigen, oder 

2. Seltener ist die Frage, wie weit die L‰ufer in einer bestimmten Zeit (z.B. eine Stunde) 

kommen. 

F¸r beide Mˆglichkeiten finden sich auch in der Chromatographie Beispiele. 

PLANAR-CHROMATOGRAPHIE 

Bei dieser Form der Chromatographie wird die station‰re Phase als d¸nne Schicht auf einem 

inerten Tr‰germaterial aufgetragen. (D¸nnschicht-Chromatographie = DC = thin layer 

chromatography = TLC). Fr¸her wurde auch spezielles Filterpapier in der 

Papierchromatographie (PC) als station‰re Phase eingesetzt, was sich heute durch DC- 

Schichten aus mikrokristalliner Cellulose er¸brigt. 

Die zu untersuchenden Proben werden auf einer Seite der Schicht aufgetragen und dann von 

dort mittels Kapillarkr‰ften die mobile Phase durch die Schicht geleitet. Danach wird die 

Schicht getrocknet und man kann in dem erhaltenen Chromatogramm feststellen, wie weit die 

einzelnen Komponenten der Probe gewandert sind. 



SƒULEN-CHROMATOGRAPHIE 

Ganz anders bei der S‰ulenchromatographie: Dort wird ein Rohr, das mit der pulverfˆrmigen 

station‰ren Phase gef¸llt ist, von der mobilen Phase durchstrˆmt. Zu Beginn der 

beabsichtigten Trennung gibt man die Probe an den Anfang dieser "S‰ule". An deren Ende 

befindet sich ein Detektor, der das Austreten von Probenkomponenten anzeigt. Dessen Signal 

wird kontinuierlich aufgezeichnet, das entsprechende Diagramm wird ebenfalls als 

"Chromatogramm" bezeichnet. Die einzelnen Ausschl‰ge markieren jeweils (mindestens) eine 

Substanz und werden als Peaks bezeichnet. 



Die mobile Phase kann sein 

� fl¸ssig bei der HPLC und der (Fl¸ssigkeits-)S‰ulenchromatographie oder 

� gasfˆrmig bei der Gaschromatographie. 

2.3. AUSWERTUNG 

ZWEI FRAGEN 

Qualitative Analyse 

Welche Substanzen sind in einer Probe enthalten? 

Als Trennmethoden sind chromatographische Verfahren zur Beantwortung dieser Frage gut 

geeignet. Es werden einfach parallel die Proben und Lˆsungen mit bekannter 

Zusammensetzung (Standards) untersucht. Substanzen, die bei der Trennung gleich schnell 

wandern, kˆnnen identisch sein. Wandern sie mit unterschiedlicher Geschwindigkeit, so sind 

sie mit Sicherheit nicht gleich. F¸r eine sichere Identifizierung werden also weitere Indizien 

benˆtigt: Das kˆnnen z.B. weitere chromatographische Trennungen unter anderen 

Bedingungen sein oder bestimmte physikalische Eigenschaften, die im Zusammenhang mit 

der Trennung festgestellt werden (Farbe, Fluoreszenz, Leitf‰higkeit, Reaktionsf‰higkeit, ...). 

Quantitative Analyse 

Wie grofl sind die Konzentrationen der verschiedenen Substanzen in der Probe? 

Wenn am Ende der Trennung eine physikalische Grˆfle gemessen wird, deren Wert zur 

Konzentration des gesuchten Stoffes proportional ist, kann auch diese zweite Frage 

beantwortet werden. Meist dient die Extinktion der Lˆsung bei einer bestimmten Wellenl‰nge 

dazu, aber auch andere Verfahren wie Leitf‰higkeits- oder Fluoreszenzmessungen kommen in 

Frage. Die Einzelheiten dieser Nachweisverfahren richten sich nach der verwendeten 

Trenntechnik (siehe bei D¸nnschichtchromatographie, S‰ulenchromatographie und 

Gaschromatographie). 

ANTWORTEN 

Die Antworten finden Sie hier (getrennt nach den beiden grunds‰tzlichen Verfahren): 

� Auswertung bei der Planarchromatographie (DC und PC) 

� Auswertung bei der S‰ulenchromatographie (auch HPLC und GC) 



2.3.1. DC-AUSWERTUNG 

QUALITATIVE AUSWERTUNG 

1. Am einfachsten kann eine Substanz identifiziert werden, wenn die in Frage 

kommenden Standards auf der selben Platte aufgetragen werden. Probe und Standards 

werden dadurch unter exakt gleichen Bedingungen entwickelt. Wenn Probenfleck und 

der Fleck eines Standards sich in folgende Eigenschaften entsprechen, kˆnnen die 

beiden Substanzen identisch sein: 

� gleiche Wanderungsstrecke (Mittelpunkt der Flecken) 

� gleiche Farbe (u.U. wegen unterschiedlicher Menge in verschiedener 

Intensit‰t) 

� gleiches Verhalten gegen¸ber UV-Licht (Fluoreszenzfarbe bzw. Fluoreszenzlˆschung) 

� ggf. entsprechendes Verhalten beim Bespr¸hen mit Nachweisreagenzien. 

Die Grˆfle der Flecken ist dabei nicht entscheidend, sie h‰ngt auch von der 

Konzentration der betreffenden Substanz in Probe bzw. Standard ab. 

2. Nicht immer hat man die Mˆglichkeit, Standards zusammen mit der Probe zu 

untersuchen ñ wenn beispielsweise diese Standards nicht vorliegen und deren Daten 

nur in der Literatur zu finden sind oder wenn eine zweidimensionale Entwicklung 

notwendig ist, um ein komplexes Gemisch aufzutrennen. In solch einer Situation muss 

auf exakt gleiche Trennbedingungen geachtet werden, wie dieselben mobilen und 

station‰ren Phasen sowie eine vergleichbare Entwicklungstechnik (Kammers‰ttigung). 

Trotzdem wird es in der Regel nicht gelingen, auch die Laufstrecke gleich zu halten. 

Dann wird f¸r jede Substanz der Retentionsfaktor (Rf-Wert) berechnet: 

Unmittelbar nach der Trennung markiert man mit einem weichen Bleistift die Front 

der mobilen Phase auf der Platte. Die Startpunkte kˆnnen ebenso gekennzeichnet 

werden (mit Hilfe der Auftragschablone) und auch ñ falls nˆtig ñ die Substanzflecken 

auf der Platte. Letztere sollen aber so vorsichtig markiert werden, dass sie noch gut zu 

erkennen sind. 



Nach dem Trocknen misst man mit einem Lineal die Entfernung vom Startpunkt zur 

Mitte des betreffenden Flecks aus und die Entfernung vom Startpunkt zur 

Lˆsungsmittelfront. Diese beiden L‰ngen ergeben als Quotient den Rf-Wert bzw. mit 

100 multipliziert den hRf-Wert: 

x(i) x(i) 

Rf � bzw. hRf � �100% 

x x 

m.Ph. m.Ph. 

Unter den folgenden Bedingungen kˆnnen zwei Substanzen identisch sein: 

� Entwicklung auf der gleichen Platte mit dem gleichen Flieflmittel 

� vergleichbare Entwicklungstechnik (u.a. Kammers‰ttigung) 

� im Rahmen der Messgenauigkeit (Lineal) gleiche Rf-Werte 

� gleiche Farbe (u.U. wegen unterschiedlicher Menge in verschiedener 

Intensit‰t) 

� gleiches Verhalten gegen¸ber UV-Licht (Fluoreszenzfarbe bzw. Fluoreszenzlˆschung) 

� ggf. entsprechendes Verhalten beim Bespr¸hen mit Nachweisreagenzien. 

QUANTITATIVE AUSWERTUNG 

Eine halbquantitative Aussage kann man an Hand der Farbintensit‰t und der Fleckgrˆfle 

treffen (etwa soviel wie im Standard, deutlich weniger o.‰.). Auf eine weiter gehende 

quantitative Auswertung wird in der Planarchromatographie oft verzichtet. 

Mit entsprechendem Aufwand sind aber auch exakte Konzentrationsbestimmungen oder andere Untersuchungen 

mˆglich: 

� Der Fleck kann isoliert werden: Auf Glasplatten wird man den entsprechenden Bereich der 

Beschichtung abschaben, sonst kann man den Fleck einfach ausschneiden. Das erhaltene Material wird 

dann mit einem passenden Lˆsungsmittel extrahiert ñ in der erhaltenen Lˆsung kann dann ein 

quantitativer Nachweis (z.B. photometrisch) erfolgen. 

� Eine andere Mˆglichkeit ist die Verwendung eines ortsauflˆsenden Reflektions-Photometers (s.u.) oder 

-Fluorometers. Solche Ger‰te kann man mit einem kalibrierten Scanner vergleichen: Eine Lichtquelle 

strahlt monochromatisches Licht auf die Schicht und dann wird Punkt f¸r Punkt die Intensit‰t des 

reflektierten Lichts (bzw. des Fluoreszenzlichtes) ermittelt. Verwendet man dazu die Komplement‰rfarbe 

des Flecks, so erh‰lt man auf dem Fleck eine geringere Reflektion, die in geeigneter Weise 

aufsummiert wird und dann ein Mafl f¸r die Konzentration der entsprechenden Substanz darstellt. 



2.3.2. SC-AUSWERTUNG 

Zur Auswertung werden Probenchromatogramm und Standardchromatogramme verglichen. 

Voraussetzung daf¸r sind identische Trennbedingungen: 

� Trennung auf der selben S‰ule (zur Not die gleiche S‰ule mit dem gleichen Material, 

der gleichen L‰nge und dem gleichen Durchmesser), 

� mit der gleichen mobilen Phase, 

� mit der selben Flieflgeschwindigkeit der mobilen Phase, 

� bei der selben Temperatur, 

� unter Verwendung des selben Detektors mit identischen Einstellungen und 

� mit identischer Aufzeichnung durch den Integrator. 

Weiter m¸ssen die Konzentrationen im Arbeitsbereich des Detektors liegen: Zu kleine 

Konzentrationen liefern kein Signal. Bei zu hohen Konzentrationen kann die Proportionalit‰t 

zwischen Signal und Konzentration nicht mehr gegeben sein, dann erh‰lt man falsche 

Ergebnisse. 

QUALITATIVE ANALYSE 

Die Retentionszeit tR liefert eine 

Information ¸ber die Art der Substanz. Sie 

wird gemessen vom Start der Trennung bis 

zum Erreichen des maximalen Detektorsignals 

der entsprechenden Substanz. Im 

Chromatogramm kann man sie als L‰nge 

vom Startpunkt bis zum Peak-Maximum 

ablesen, meistens werden sie auch direkt mit 

dem Peak vom Integrator ausgedruckt. 

Je nachdem, wie gut sich die Versuchsbedingungen konstant halten lassen, werden sich die 

Retentionszeiten aufeinander folgender L‰ufe geringf¸gig unterscheiden. Durch wiederholte 

Trennung desselben Gemisches kann man einen Eindruck von der Variation der 

Retentionszeiten erhalten. 

Sicherer wird die Identifikation ñ besonders bei komplexen Gemischen mit vielen 

Komponenten ñ durch das Anreicherungsverfahren. Dazu wird einem Teil der Probe etwas 

der gesuchten Substanz zugesetzt. Deren Peak gibt sich dadurch zu erkennen, dass er nach 

dem Zusatz grˆfler wird. Die Menge des Zusatzes sollte so bemessen sein, dass eine deutliche 

Vergrˆflerung erzielt wird, ohne dass diese Substanz danach nur noch einen riesigen Peak 

liefert, der alles ‹brige zudeckt: 

zu wenig in Ordnung zu viel 



QUANTITATIVE ANALYSE 

Eine Aussage ¸ber die Menge der Substanz liegt in der Grˆfle des Peaks, die auf folgende 

Weise ermittelt werden kann: 

� Messung der Peakhˆhe 

� Produkt von Peakhˆhe und Breite des Peaks auf halber Hˆhe 

� Fl‰che des Peaks 

Die letzte Mˆglichkeit ist die genaueste und 

in der Regel vorzuziehen. Die Fl‰che kann 

durch Ausz‰hlen auf mm-Papier, durch 

Ausschneiden und wiegen oder mit einem 

Planimeter bestimmt werden. Normalerweise 

braucht man sich aber nicht darum zu 

k¸mmern, da der Integrator bei der 

Aufzeichnung des Chromatogramms die 

Peakfl‰chen ermittelt und am Ende des 

Ausdrucks in einer Tabelle ausgibt ñ meist 

als absolute Fl‰chen (in einer willk¸rlichen 

Einheit) und als %-Anteile an der 

summierten Gesamt-Peakfl‰che 

Wenn man sich mit einer Methode vertraut 

macht, ist es eine gute Idee, das gleiche 

Material mehrfach zu trennen. Man erh‰lt so 

einen Eindruck von der Streuung der 

Ergebnisse und kann durch Bildung von 

Mittelwerten eines Peaks aus mehreren 

Chromatogrammen genauere Werte erhalten 

ñ f¸r die sp‰tere Routine l‰uft das allerdings 

auf unnˆtigen Verbrauch von Ressourcen 

(Personal, Ger‰te, Chemikalien, Zeit) 

hinaus. 



2.3.2.1. INTEGRATOR 

AUFGABE UND FUNKTION 

Am Ende der Trenns‰ule misst ein Detektor eine physikalische Eigenschaft der mobilen 

Phase wie deren Extinktion oder elektrische Leitf‰higkeit. Die Messgrˆfle wird nicht direkt 

angezeigt, sondern in eine normierte elektrische Spannung umgewandelt (mit einem 

Voltmeter kˆnnte sie dann doch angezeigt werden). 

Der Integrator speichert in regelm‰fligen 

Abst‰nden das Detektorsignal, kann es ggf. 

durch die Bildung eines gleitenden 

Mittelwertes gl‰tten (Filter) und druckt es 

gleichzeitig als Chromatogramm aus. Nach 

Anschluss der Aufzeichnung werden die 

gespeicherten Daten ausgewertet: Der 

Integrator versucht Peaks zu erkennen, sie 

gegeneinander abzugrenzen, die Grundlinie 

zu bestimmen und ermittelt dann ihre 

jeweilige absolute Fl‰che, auch weitere 

Berechnungen sind mˆglich. Neben 

speziellen Ger‰ten kann auch eine Labor- 

EDV diese Aufgabe ¸bernehmen. 

M÷GLICHE EINSTELLUNGEN 

Die hier gemachten Angaben beziehen sich auf den HP 3390A Integrator, kˆnnen aber sinngem‰fl auch auf 

andere Ger‰te ¸bertragen werden. 

Datum (DATE) und Uhrzeit (TIME) 

Eine interne Uhr kann beim Einschalten eingestellt werden. In den Ausdrucken erscheinen dann jeweils 

die aktuellen Angaben. Das ist eine wichtige Hilfe bei der Zuordnung von Versuch und zugehˆriger 

Aufzeichnung. 

Nullpunkt der Basislinie (ZERO) 

Wird in Prozent der Aufzeichnungsbreite angegeben. Bei 5% oder 10% kˆnnen Schwankungen der 

Basislinien erkannt werden. Wenn negative Peaks zu erwarten sind, ist ein Nullpunkt bei 50% oder 90% 

sinnvoll. 

Abschw‰chung (ATT = attenuation) 

Das Messsignal wird vor seiner Verarbeitung abgeschw‰cht, indem es durch 2 ATT dividiert wird. Ein um 

1 grˆflerer ATT-Wert halbiert also die Peakhˆhe. 

Papiergeschwindigkeit (CHTSPD = chartspeed) 

Die Geschwindigkeit der Aufzeichnung des Chromatogramms. Bei einfachen Trennungen sollte sie so 

gew‰hlt werden, dass das gesamte Chromatogramm etwa 10 cm lang ist, bei Proben mit vielen 

Komponenten entsprechend l‰nger. 

Messrate (PK WD) 

Abstand der einzelnen Messungen in Minuten, gleichzeitig werden die Gl‰ttungsfilter entsprechend 

eingestellt. Sollte deutlich k¸rzer als die Breite des schmalsten zu erwartenden Peaks sein ñ zu kurze 

Messzeiten f¸hren aber zu unhandlichen Datenmengen (Rechenzeit). ‹bliche Zeiten liegen zwischen 

0,01 min (Kapillar-GC) und 2,5 min (LC mit geringer Trennleistung). 

Rauschunterdr¸ckung (THRSH = threshold) 

Signalanteile unter dieser Schwelle werden zur Basislinie gerechnet. 



Peakunterdr¸ckung (AR REJ = area reject) 

Peaks, deren Fl‰che kleiner ist als dieser Wert, werden bei der Auswertung nicht ber¸cksichtigt. 

Steuerung der Basislinienkonstruktion 

Es kˆnnen verschiedene Methoden zur Festlegung der Basislinie gew‰hlt werden. Normalerweise wird 

die Basislinie als gerade Strecke (u.U. steigend oder fallend) vom Peakanfang zum Peakende gezogen. 

INTG() 0 Basislinien auf den aktuellen Wert setzen 

INTG() 1 Basislinien beim n‰chsten Minimum setzen 

INTG() 2 Basislinie bei allen Minima setzen 

INTG() 3 Tangentenmethode beim n‰chsten Peak aktivieren (f¸r aufgesetzte Peaks) 

INTG() 4 Tangentenmethode deaktivieren 

INTG() 5 Basislinien horizontal extrapolieren 

Einige mˆgliche Konstruktionen der Basislinie werden unten gezeigt. 

Steuerung des Chromatogrammausdrucks 

Mit / Ohne Retentionszeiten (INTG() 7), mit / ohne Integrationsmarkierungen (INTG() 8), mit / 

ohne Basislinien oder mit / ohne Zeitskala. Die letzten beiden Mˆglichkeiten bietet der HP 3390A nicht. 

Die Integratorparameter kˆnnen auch in einer Zeittabelle programmiert werden, kˆnnen also w‰hrend einer 

Trennung ge‰ndert werden. 

F¸r Reihenuntersuchungen kˆnnen ferner die Responsefaktoren und weitere Umrechnungsfaktoren eingegeben 

werden, so dass im Analysenbericht direkt die gesuchten Konzentrationen erscheinen. 

M÷GLICHE AUSGABEN 

In der Ausgabe kˆnnen verschiedene Angaben erfolgen, hier wieder in Anlehnung an das o.a. Ger‰t: Nach 

Kopfdaten zur Identifizierung des Ausdrucks und dem Chromatogramm folgt ein tabellarischer Analysenbericht. 

Peak-Nummer 

Laufende Nummerierung der Peaks, durch AR REJ unterdr¸ckte Peaks werden mitgez‰hlt, aber nicht 

mit ausgedruckt. 

Retentionszeit 

Meistens in Minuten, sowohl im Chromatogramm als auch im anschlieflenden tabellarischen 

Analysenbericht. 

absolute Peakfl‰che 

F¸r die quantitative Auswertung, der Zahlenwert kann auch von den o.a. Einstellungen abh‰ngen. 

relative Peakfl‰che 

In Prozent der nicht unterdr¸ckten Peakfl‰chen. 

Art der Peakabgrenzung 

Im Chromatogramm als kleine Striche (kˆnnen auch abgeschaltet sein) und in der Tabelle mit Codes: 

. Mess-Signal zu grofl 

I unvollst‰ndiger Peak (incomplete) 

, Mess-Signal zu klein 

D verzerrter Peak (PK WD zu grofl) (distorted) 

S Lˆsungsmittelpeak (solvent) 

T Peakanfang oder -ende mit der Tangentenmethode ermittelt (tangent) 

B Peakanfang oder -ende auf der Grundlinie (baseline) 

V Peakanfang oder -ende im Tal zwischen zwei Peaks (valley) 

P Basislinienunterschreitung (penetration) 

H horizontale Grundlinie extrapoliert 

++ Summenpeak 

Verh‰ltnis von Peakfl‰che zu Peakhˆhe 

Sollte mit der Retentionszeit zunehmen. Ein Peak, der bei diesem Verh‰ltnis eine zu groflen Wert hat, 

kann aus einer fr¸heren Analyse stammen. Auch zur Kontrolle des PK WD-Wertes. 



BEISPIELE ZUR BASISLINIENKONSTRUKTION 

Im Idealfall ist die Basislinie vor und nach dem Peak auf gleicher Hˆhe zu erkennen: 

Wenn zwei Peaks so nahe beieinander liegen, dass sie sich ¸berlappen, zieht der Integrator 

h‰ufig eine gerade Linien am tiefsten Punkt des Tales zwischen den Peaks (links). Das ist 

aber nicht ganz korrekt, wie das rechte Bild zeigt. Eine gute Chromatographiesoftware kann 

auch solche Peaks durch eine passende Regressionsrechnung noch gut trennen. 

Andere Probleme bereitet eine Basislinie, die nicht auf gleicher Hˆhe bleibt ñ z.B. durch 

einen Temperaturanstieg der Trenns‰ule w‰hrend einer gaschromatographischen Trennung. 

Welche der beiden dargestellten Methoden die besseren Ergebnisse liefert, muss im Einzelfall 

gekl‰rt werden. 

Das rechts dargestellte Verfahren kann bei kleinen Peaks, die auf der Schulter eines groflen 

sitzen, oft besser ñ aber nicht optimal! ñ erfassen als die obige Methode mit dem Tal: 



Diese Beispiele sollen das Problembewusstsein im Umgang mit Integratoren sch‰rfen. 

Sie sind bequem zu nutzen ñ kˆnnen aber bei unkritischer Anwendung auch drastische Fehler 

verursachen. Wichtig ist, alle Hinweise des Integrators auf die verwendete Methode im Auge 

zu behalten, insbesondere m¸ssen Probe und Standard in gleicher Weise integriert werden: 

� Die Integrationsmarken im Kurvenverlauf und 

� die Angabe der Integrationsmethode in der Tabelle. 

� Bei manchen Integratoren kann auch die verwendete Basislinie mit ausgedruckt 

werden! 

2.3.2.2. BERECHNUNGEN 

Von jedem untersuchten Material (Proben und Standards) liefert der Integrator einen 

Analysenbericht. Das weitere Vorgehen richtet sich nach dem vorliegenden Einzelfall: 

� Der einfachste Fall liegt vor, wenn die zur Trennung eingesetzte Probenmenge genau 

bekannt ist ñ wie meistens bei der Fl¸ssigkeitschromatographie. Dann erfolgt eine 

Auswertung nur mit Standard. 

� In der Gaschromatographie kann man die eingesetzte Menge nicht exakt 

reproduzieren. Dann ist immer noch eine vollst‰ndige Analyse mˆglich. 

� In Gemischen mit vielen Komponenten wird eine vollst‰ndige Analyse nicht 

wirtschaftlich sein, wenn nur wenige davon interessieren. Dann kann man mit einem 

internen Standard arbeiten. 

In jedem Fall benˆtigt man (aufler den Untersuchungen zur Peakidentifizierung) mindestens 

ein Chromatogramm der Probe und eines einer Standardlˆsung mit genau bekannten 

Konzentrationen der gesuchten Stoffe. 

AUSWERTUNG MIT STANDARD 

Die Auswertung erfolgt f¸r jede Substanz getrennt mit Hilfe folgender Formel: 

Ò *( j,St.) 

Ò *( j,Pr.) � � A( 

j, Pr.) 

A(j,St.) 

Dabei m¸ssen die absoluten Peakfl‰chen A verwendet werden, um die Massenkonzentration 

Ò * zu erhalten. Es kann ¸brigens genauso gut mit der Stoffmengenkonzentration gearbeitet 

werden. 

VOLLSTƒNDIGE ANALYSE 

Zur vollst‰ndigen Analyse wird mit den relativen Fl‰chenanteilen A% und dem Massenanteil 

w gearbeitet. Zun‰chst wird ñ analog der Auswertung mit Standard ñ ein vorl‰ufiger 

Massenanteil w' in der Probe bestimmt: 

w( 

j, St.) 

w' ( j, Pr.) � 

� A%( 

j, Pr.) 

A%(j, 

St.) 



Z‰hlt man dann die erhaltenen w'-Werte zusammen, so erh‰lt man in der Regel nicht genau 

100%. Aus diesem Grund werden die endg¸ltigen Ergebnisse w durch einen so genannten 

100%-Ausgleich erhalten: 

w'( 

j.Pr.) 

w ( j.Pr.) � 

�100% 

� w' 

( j.Pr.) 

Wenn nicht alle Komponenten einer Mischung analysieren werden kˆnnen oder m¸ssen, aber 

nicht von einer immer gleichen Probenmenge in den einzelnen Durchl‰ufen ausgegangen 

werden kann, dann muss mit einem internen Standard gearbeitet werden. 

Dazu setzt man sowohl seinem Analysengemisch als auch der Standardlˆsung eine weitere 

Substanz zu, die in beiden vorher nicht enthalten war und die von den ¸brigen Komponenten 

gut getrennt werden kann. Die Konzentration dieses internen Standards muss in beiden 

Lˆsungen genau bekannt (oder exakt gleich) sein. 

Mit Hilfe des internen Standards kˆnnen dann unterschiedliche untersuchte Probenmengen 

festgestellt und bei der Auswertung ber¸cksichtigt werden: 

Ò * ( j, St.) Ò * ( i.S., Pr.) � A( 

i.S., St.) 

Ò * ( j, Pr.) � � A( 

j, Pr.) � 

A(j, 

St.) Ò * ( i.S., St.) � A( 

i.S., Pr.) 

Hier wurde mit der Massenkonzentration gearbeitet, die Gleichungen kˆnnen aber genauso 

gut f¸r den Massenanteil oder die Stoffmengenkonzentration aufgestellt werden. Ggf. muss 

man auch noch die Verd¸nnung der Probe durch den Zusatz eines internen Standards in der 

Rechnung ber¸cksichtigen. 

AUSWERTUNG MIT RESPONSEFAKTOREN 

F¸r Reihenuntersuchungen kann man sich etwas Rechnung ersparen, wenn man Faktoren, die 

konstant bleiben, in einem so genannten Responsefaktor zusammenfasst, hier am einfachsten 

Beispiel demonstriert: 

Ò * ( j, St.) 

R( j) � 

und dann Ò* 

( j, Pr.) � R( 

j) � A( 

j, Pr.) 

A( 

j, St.) 

3. D‹NNSCHICHTCHROMATOGRAPHIE ( DC ) 

Die D¸nnschichtchromatographie ist das heute ¸bliche Verfahren zur Planarchromatographie. 

Es erfordert keine teuren Ger‰te und ist somit relativ kosteng¸nstig ñ allerdings fordern die 

hoch entwickelten Verbrauchsmaterialien auch ihren Preis. 

Zur Durchf¸hrung: Die Proben werden am Rand der Schicht aufgetragen, dann wird die 

Platte entwickelt, d.h. so mit der mobilen Phase (dem Flieflmittel) in Kontakt gebracht, dass 

dieses durch Kapillarwirkung in der gew¸nschten Richtung durch die Schicht wandert. 

Farblose Substanzen kˆnnen durch verschiedene Methoden zur Nachbehandlung sichtbar 

gemacht werden und kˆnnen dann ausgewertet werden. 

Verschiedene Trennbedingungen kˆnnen ohne Vorbereitung sofort umgesetzt werden. 

Wichtige Aspekte zur Wahl der station‰ren Phase und des Flieflmittels werden erl‰utert. 



3.1. TRENNSYSTEME 

F¸r eine bestimmte Trennaufgabe m¸ssen station‰re und mobile Phase passend gew‰hlt 

werden, eine falsche Wahl f¸hrt zu unbrauchbaren Trennungen: 

Ursachen 

zu starkes Adsorptionsmittel zu schwaches Adsorptionsmittel 

zu schwaches Lˆsungsmittel zu starkes Lˆsungsmittel 

Die Substanzen werden vollst‰ndig 

adsorbiert: Sie bleiben am Startfleck und 

wandern nicht. 

Folgen 

Die Substanzen werden nicht adsorbiert: 

Sie wandern mit der Flieflmittelfront. 

In beiden F‰llen gibt es keinen Unterschied im Wanderungsverhalten und folglich auch keine 

Trennung. 

Welche Kombination von Beschichtung und Flieflmittel eine brauchbare Trennung 

ermˆglicht, h‰ngt selbstverst‰ndlich von der Art der zu trennenden Substanzen ab. Hinweise 

zur Auswahl der station‰ren Phase und der mobilen Phase folgen auf einigen Seiten. 



3.1.1. FLIEflMITTEL 

POLARITƒT 

Die wichtigste Eigenschaft der mobilen Phase ist ihre Polarit‰t, die etwa als Dielektrizit‰tszahl 

gemessen werden kann. Polare Substanzen lˆsen sich gut in polaren Flieflmitteln, 

unpolare dagegen gut in unpolaren Fl¸ssigkeiten. In der Praxis hat sich die eluotrope Reihe 

bew‰hrt, in der die Flieflmittel nach steigender Polarit‰t angeordnet sind: 

unpolar 

pH-WERT 

Alkane (n-Hexan, Petrolether) 

Cycloalkane (Cyclohexan u.a.) 

Tetrachlormethan 

Aromaten (Toluol u.a.) 

Diethylether 

Chloroform 

Ketone (Methylethylketon, Aceton u.a.) 

Ester (Essigs‰ureethylester u.a.) 

Dimethylsulfoxid 

Acetonitril 

Pyridin 

Ethanol 

Methanol 

Wasser 

polar 

F¸r saure oder basische Substanzen ist der S‰uregrad der mobilen Phase wichtig: saure 

Substanzen lˆsen sich oft in basischen Flieflmitteln und basische Stoffe umgekehrt gut in 

S‰uren. Wenn man auf spezielle Puffer verzichten will, kann man durch Zusatz von 

Essigs‰ure oder Salzs‰ure den pH-Wert senken oder mit Hilfe von Ammoniak oder Aminen 

anheben. 

IONENSTƒRKE 

Die Ionenst‰rke gibt die effektive Konzentration der elektrischen Ladungen in der Lˆsung an, 

h‰ngt also von der Elektrolytkonzentration ab. Bei hoher Ionenst‰rke sinkt die Lˆslichkeit 

weniger polarer Substanzen. Probenkomponenten, die selber dissoziieren, gehen mit den im 

Flieflmittel vorhandenen Ionen neue Gleichgewichte ein ñ das kann auch zur Bildung von 

(ungeladenen) Ionenpaaren f¸hren, die sich dann wie neutrale Molek¸le verhalten. 

SPEZIFISCHE WECHSELWIRKUNGEN 

Die oben angesprochenen Einflussgrˆflen beschreiben die Wechselwirkung zwischen 

Probenkomponenten und Flieflmittel recht pauschal. Im Einzelfall spielen auch die 

Wechselwirkungen auf molekularer Ebene eine wichtige Rolle, wie etwa: 

� van der Waals-Bindungen 

� Wasserstoffbr¸ckenbindungen 

� Dipol-Dipol-Wechselwirkungen 

� Wechselwirkungen mit elektronenreichen Strukturen wie unges‰ttigte Bindungen oder 

aromatische Ringsysteme 



MISCHUNGEN 

Besonders interessant ist das Verhalten von Mischungen als Flieflmittel. Die Trenn- 

Eigenschaften liegen meist zwischen denen der Bestandteile der Mischungen und kˆnnen ¸ber 

die Zusammensetzung stufenlos gesteuert werden. Oft beobachtet man dabei aber keinen 

linearen Zusammenhang, sondern geringe Zus‰tze einer Komponente zu Flieflmittel kˆnnen 

schon grofle Effekte haben. 

3.1.2. SCHICHTMATERIALIEN 

ALLGEMEINES 

Die station‰re Phase wird als feines Pulver auf ein inertes Tr‰germaterial aufgetragen. Die 

Korngrˆflen liegen zwischen 2 µm f¸r die Analyse von minimalen Volumina und 50 µm f¸r 

pr‰parative Aufgaben. 

Mit zunehmendem Wassergehalt der station‰ren Phase ñ auch aus der Laborluft ñ sinkt die 

Aktivit‰t der station‰ren Phase, d.h. ihre F‰higkeit, unpolare Stoffe zu adsorbieren. 

Gleichzeitig steigt der Einfluss von Verteilungsgleichgewichten auf die Trennung. 

KIESELGELE 

Standard-Kieselgel wird durch F‰llung aus einer Wasserglas-(Natriumsilikat)-Lˆsung mit 

Schwefels‰ure hergestellt. Der Niederschlag wird abfiltriert, bei 100 bis 200 C getrocknet 

und gemahlen. Die Herstellung erfordert viel Erfahrung, um reproduzierbare Ergebnisse zu 

erhalten. Das fertige Produkt besteht aus SiO2 mit einem geringen Anteil von Wasser. Dieses 

bildet an der Oberfl‰che saure SiOH Gruppen. Folglich ist das Kieselgel ein polares, schwach 

saures Adsorptionsmittel, an dem sich auch gleichzeitig ñ durch das oberfl‰chlich gebundene 

Wasser ñ Verteilungsgleichgewichte einstellen kˆnnen. F¸r diese hydrophilen Schichten 

w‰hlt man lipophile Flieflmittel. Kieselgelplatten werden in unterschiedlichen Qualit‰ten 

angeboten, so auch in hoch gereinigter Form f¸r die Spurenanlytik. 

Die Si-O-H Gruppen kˆnnen mit bestimmten organischen Substanzen zur Reaktion gebracht 

werden und ‰ndern dadurch ihren Charakter vollst‰ndig (Silanisierung). Man erh‰lt dadurch 

so genannte Umkehrphasen (= reversed phase, Abk¸rzung RP), die sich hydrophob 

verhalten. So ist die RP-18-Phase durch SiOC18H37 Gruppen gekennzeichnet. Durch Auswahl 

des organischen Reaktionspartners und mehr oder weniger vollst‰ndigen Umsatz der SiOH- 

Gruppen kann der Charakter der station‰ren Phase von hydrophil nach hydrophob in vielen 

Schritten ver‰ndert werden. ‹blich sind heute folgende Modifikationen (in abnehmend 

hydrophober Reihenfolge): 

� RP-18-100 mit vollst‰ndiger Umwandlung aller SiOH-Gruppen 

� RP-18-50 mit 50% verbleibender SiOH-Gruppen 

� RP-2 mit Dimethylsilangruppen 

� Cyano-modifiziertes Kieselgel mit einer Cyano-Gruppe (-CN)am Kettenende 

� Amino-modifiziertes Kieselgel mit einer Amino-Gruppe (-NH2) am Kettenende, die 

auch eine schwache Ionenaustauscherwirkung haben 

� Diol-modifiziertes Kieselgel mit zwei OH-Gruppen an der Kette 

� (unmodifiziertes Kieselgel) 



Die RP-18-Phasen haben lipophilen Charakter und werden zusammen mit hydrophilen 

Flieflmitteln benutzt, die Verh‰ltnisse sind also genau umgekehrt wie bei den Standard- 

Kieselgelplatten. Mit einer Cyano-modifizierten Platte kann je nach Wahl des Flieflmittels 

eine normale oder ein Umkehrphasen-Trennung durchgef¸hrt werden. 

Standard- oder RP-Kieselgelschichten kˆnnen durch eine Vorbehandlung weiter ver‰ndert 

werden, einige Beispiele sind: 

� Vor der Trennung kann die Trennschicht bestimmten D‰mpfen (z.B. das verwendete 

Flieflmittel oder S‰uren oder Basen) ausgesetzt werden, um sie entsprechend zu 

konditionieren. 

� Mit Ammoniumsulfat impr‰gnierte Schichten werden zur Trennung von Lipiden und 

Tensiden benˆtigt. 

� Mit Coffein oder anderen Charge-Transfer-Komplexbildnern werden Platten zur 

Trennung polycyclischer aromatischer Kohlenwasserstoffe pr‰pariert. 

� Durch Zusatz eines optisch aktiven Prolinderivats zusammen mit Cu 2+ -Ionen entstehen 

Schichten, auf denen man die Enantiomeren optisch aktiver Stoffe trennen kann. 

WEITERE SCHICHTMATERIALIEN 

Aluminiumoxid wird meist durch F‰llung unter basischen Bedingungen hergestellt, und ist 

dann selbst basisch (pH=9). Mit Gips als Bindemittel entstehen aber neutrale Beschichtungen. 

ƒhnlich wie beim Kieselgel wird der Niederschlag abfiltriert, getrocknet und gemahlen. Seine 

hˆchste Aktivit‰t erreicht er schliefllich durch Gl¸hen bei 500 C. Es stellen sich vorwiegend 

Adsorptionsgleichgewichte ein. Die Aktivit‰t kann nach Brockmann durch Zugaben von bis 

zu 15% Wasser in Stufen verringert werden. Auf Aluminiumoxid werden vorwiegend 

basische Stoffe getrennt. 

Nat¸rliche Cellulose enth‰lt als Kohlenhydrat sehr viele OH-Gruppen, stellt demnach eine 

polare station‰re Phase mit der Mˆglichkeit zur Ausbildung vieler Wasserstoffbr¸cken- 

Bindungen dar. Die aus Pflanzen (z.B. Baumwolle oder Holz) gewonnene Cellulose wird so 

fein gemahlen, dass die einzelnen Molek¸le nur noch eine Polymerisationsgrad von 400 bis 

500 aufweisen. Durch Hydrolyse kann eine mikrokristalline Cellulose mit Polymerisationsgraden 

bis herab zu 40 gewonnen werden. Durch Reaktion mit Essigs‰ure(anhydrid) kann 

acetylierte Cellulose hergestellt werden (bis zu 40% der OH-Gruppe acetyliert), die dadurch 

ihren hydrophilen Charakter verliert. Die DEAE-Cellulose (Diethylaminoethyl-) ist ein 

schwacher Kationenaustauscher. 

Polyamid ist ein polarer Kunststoff, der zahlreiche Wasserstoffbr¸cken ausbilden kann. Er 

wird zur Trennung von Phenolen, Flavonoiden u.a. eingesetzt. 

Bei Kieselgur handelt es sich um ein nat¸rliches Kieselgel aus den Schalen von fossilen 

Kieselalgen. Wegen seiner relativ geringen Oberfl‰che pro Gramm ist es eigentlich keine gute 

station‰re Phase. Gerade deshalb wird es aber in Konzentrierungszonen eingesetzt. Eine 

andere Anwendung findet es entsprechend impr‰gniert als Tr‰germaterial f¸r die 

Verteilungschromatographie. 

Mischphasen enthalten verschiedene station‰re Phasen in einem Verh‰ltnis, das f¸r ein 

bestimmtes Trennproblem optimale Ergebnisse liefert. 



HERSTELLUNG 

Anfangs wurden Platten f¸r die D¸nnschichtchromatographie im Labor selbst hergestellt. 

Eine Suspension des Schichtmaterials in Wasser wurde auf Glasplatten ausgestrichen, wobei 

mehr oder weniger komplizierte Hilfen f¸r eine konstante Schichtdicke sorgten. Die Platten 

wurden dann an der Luft und anschlieflend im Trockenschrank getrocknet. 

Heute werden Fertigplatten in grofler Vielfalt angeboten, so dass man sich f¸r die t‰gliche 

Routine auf die gleich bleibende Qualit‰t eines erfahrenen Herstellers verlassen kann. Nur 

noch in Sonderf‰llen muss man sich die Schichten selbst gieflen. 

Bei der Auswahl der Platten sind zu beachten: 

� Zusammensetzung der station‰ren Phase, wie oben erl‰utert. 

� Das ggf. verwendete Bindemittel (heute meist spezielle Polymere) soll die Schicht 

zus‰tzlich festigen. Der dazu fr¸her verwendete Gips fungierte auch als station‰re 

Phase, solche Platten werden auch heute noch f¸r spezielle Trennungen angeboten. 

� Das eingesetzte Tr‰germaterial. Glas ist resistent gegen alle eingesetzten 

Chemikalien, aber schwer und zerbrechlich. Polyester ist ebenfalls recht resistent, 

unzerbrechlich, kann einfach geschnitten werden, billiger, aber nur bis 160 C stabil 

und erzeugt bei Fluoreszenz-Nachweisen ein st‰rkeres Rauschen. Aluminium wird nur 

von starken S‰uren oder Laugen angegriffen, ist unzerbrechlich und kann geschnitten 

werden. 

� Die Schichtdicke betr‰gt 0,1 bis 0,25 mm f¸r analytische Aufgaben und 0,5 bis 2,0 

mm und mehr f¸r pr‰parative Trennungen. Auf d¸nnen Schichten kˆnnen geringere 

Probenmengen nachgewiesen werden. 

� Die Korngrˆfle des Materials liegt bei der HPTLC (high performance thin layer 

chromatography) f¸r empfindliche Nachweise zwischen 2 und 5 µm, f¸r pr‰parative 

Aufgaben bis zu 50 µm. 

� Das Format der Trennplatte muss eine ausreichend lange Trennstrecke ermˆglichen 

und zu der vorgesehenen Trennkammer passen. Vielfach werden grofle (Glas-)Platten 

vorgeritzt angeboten, so dass man sich bei Bedarf kleine Formate schnell brechen 

kann. 

� Bei Bedarf wird der Schicht ein Fluoreszenzindikator wie das Mangan-dotierte 

Zinksilikat beigemischt. Dieses Material erzeugt schon in geringen Anteilen eine gut 

sichtbare Fluoreszenz und ist in den verwendeten Flieflmitteln unlˆslich (bleibt also an 

seinem Platz). 

3.2. VERSUCHSTECHNIK 

Folgende Schritte sind f¸r d¸nnschichtchromatographische Trennungen nˆtig: 

1. Auswahl eines geeigneten Trennsystems, u.U. Austesten verschiedener Systeme auf 

ihre Eignung 

2. Auftragen der Probe 

3. Entwicklung der Platte 

4. ggf. nˆtige Nachbehandlung bei farblosen Proben 

5. Auswertung der Ergebnisse 



3.2.1. PROBENAUFTRAG 

Die Proben werden mit Kapillarpipetten 

aufgetragen. Das sind d¸nne Glasrˆhrchen, die 

in die Probenlˆsung eingetaucht werden. 

Durch die Kapillarwirkung saugt sich die 

Fl¸ssigkeit in die Kapillare. Dann wird die 

Pipette vorsichtig ñ ohne die Schicht zu 

verletzen ñ auf die Platte gesetzt. Jetzt ist die 

Kapillarit‰t der Schicht daf¸r verantwortlich, 

dass die Fl¸ssigkeit von der Schicht aufgesaugt 

wird. Vor der Entwicklung der Platte m¸ssen 

die aufgetragenen Flecken unbedingt trocknen, 

sonst stˆrt das Lˆsungsmittel der Probe die 

Trennung. 

‹blicherweise werden zwischen 1 und 20 µl aufgetragen. Je kleiner die Probenflecken, desto 

sch‰rfere Trennungen erh‰lt man sp‰ter. Die empfindlichsten Verfahren auf Nanoplatten 

kommen sogar mit 0,01 µl aus. 

Diverse Halter erleichtern das Hantieren mit 

kurzen Kapillarpipetten. 

Mit Saugh¸tchen oder anderen Pipettierhilfen 

kann man bei groflen Kapillarpipetten 

Teilvolumina abmessen. 

Die Proben werden einige mm von dem 

Rand der Platte entfernt aufgetragen, von 

dem aus die mobile Phase starten soll ñ 

einerseits soll die Platte mˆglichst gut zur 

Trennung ausgenutzt werden, andererseits 

darf die Probe sich nicht im Vorrat der 

mobilen Phase lˆsen. Um reproduzierbare 

Ergebnisse zu erhalten, benutzt man dazu 

Schablonen. 



Schliefllich gibt es automatisierte Ger‰te, die 

mittels einer elektrisch gef¸hrten 

Mikroliterspritze oder sogar mit Spr¸hd¸sen die 

Proben auftragen. Mit ihnen kˆnnen grˆflere 

Probenvolumina f¸r pr‰parative Aufgaben 

auch bandfˆrmig aufgetragen werden. 

3.2.2. ENTWICKLUNG 

Platten mit Konzentrierungszone haben am Anfang der 

Laufstrecke eine 1 bis 2 cm breite Beschichtung aus 

Kieselgur. In diesem Bereich aufgetragene Proben laufen 

wegen der geringen Adsorption bis zum Beginn der 

eigentlichen Trennschicht mit der Flieflmittelfront und 

erscheinen dort als schmales Band. Man erh‰lt eine bessere 

Auflˆsung und intensivere Farben nach der Trennung. 

Im einfachsten Fall wird die Platte ñ mit den getrockneten 

Probenflecken nach unten ñ in ein Schraubdeckelglas gestellt, 

dessen Boden mit etwas Flieflmittel bedeckt ist. Es muss genug 

Flieflmittel sein, dass es w‰hrend der Trennung nicht 

verschwindet, aber auch nicht so viel, dass die Probenflecken in 

der Fl¸ssigkeit stehen. Das Flieflmittel beginnt durch die 

Kapillarkraft in der Beschichtung nach oben zu steigen und 

nimmt dabei die einzelnen Komponenten der Probe 

unterschiedlich schnell mit. Man nimmt die Platte aus dem 

Glas heraus, bevor die Flieflmittelfront die obere Kante der 

Platte erreicht und markiert sofort die Flieflmittelfront mit 

einem weichen Bleistift. Die Platte wird unter dem Abzug oder 

im W‰rmeschrank getrocknet. 



Etwas bequemer sind spezielle Glasgef‰fle 

f¸r die D¸nnschichtchromatographie. Sie 

sind rechteckig oder zylindrisch geformt und 

den ¸blichen Plattenformaten (20x20 bis 

10x10 cm 2 ) angepasst. Der Deckel ist 

passend zum Gef‰fl geschliffen und schlieflt 

deshalb schon beim Auslegen dicht. 

Besonders g¸nstig ist die Doppeltrogkammer, 

bei denen der Boden in zwei kleine 

Trˆge unterteilt ist. Dadurch kann man u.a. Flieflmittel einsparen. 

Eine schlechte Kammers‰ttigung f¸hrt zu nicht 

reproduzierbaren Ergebnissen. Wenn n‰mlich in einer 

groflen Trennkammer gearbeitet wird, ist die Luft 

darin nicht unbedingt mit Flieflmittel-d‰mpfen 

ges‰ttigt. Dann verdunstet das Fliefl-mittels aus der 

Trennschicht und es muss deshalb mehr Flieflmittel 

durch die Schicht wandern, um einen bestimmten 

Stand zu erreichen. Damit wandern auch die 

Probenkomponenten weiter, insbesondere die mit 

kleinen Rf-Werten. 

Die ersten Versuche, dieses Problem zu umgehen, 

bestanden darin, die Innenw‰nde der Trennkammer 

mit Filterpapier auszukleiden und so f¸r eine 

schnellere S‰ttigung zu sorgen. Entscheidende Fortschritte brachte aber erst die radikale 

Reduzierung des verf¸gbaren Gasraumes, z.B. durch die Sandwichkammer: In 1 mm Abstand 

war ¸ber der Schicht eine Glasplatte angebracht. 

In der Doppeltrogkammer kann man eine Seite f¸r die Kammers‰ttigung benutzen und erst 

sp‰ter die Trennung durch Zugabe von Flieflmittel in den zweiten Trog, in dem die 

vorbereitete Platte steht, starten. Diese Technik kann man auch nutzen, um die Trennschicht 

mit den D‰mpfen einer anderen Fl¸ssigkeit vorzukonditionieren. 

Durch eine horizontale Entwicklung kann man zus‰tzlich den Einfluss der Schwerkraft auf die 

Bewegung der mobilen Phase ausschalten. Das ist z.B. mit der H-Trennkammer mˆglich. 

Sie besteht aus: 

1. einem Unterteil aus Teflon. 

2. einer Glasfritte (aufheben, keine Einwegartikel!) und 

3. einer Abdeckplatte aus Glas. 

Die Glasfritte wird in eine entsprechende 

Vertiefung des Unterteils eingesetzt und dann 

die vorbereitete 5x5 cm 2 Platte (4) mit der 

Schicht nach unten aufgelegt. Dabei sollen 

die aufgetragenen Probenflecken bei der 

Glasfritte sein und die Platte am 

gegen¸berliegenden Anschlag anliegen. 

Dann wird etwas Flieflmittel in die 

Vertiefung vor der Glasfritte pipettiert und 

der Glasdeckel aufgelegt ñ der Boden muss 

dabei ganz bedeckt sein. Die Trennung wird dann sp‰ter rechtzeitig abgebrochen (s.o.) 



Trotz der kurzen Trennstrecke erh‰lt man bei geringem Chemikalienverbrauch mit speziellen 

HPTLC-Schichten gute Ergebnisse (high perfomance thinlayer chromatography). 

Nr. 5 ist die Auftragschablone, ganz rechts die zusammengesetzte Kammer. 

ƒhnlich arbeitet die Horizontal-Entwicklungskammer der Firma CAMAG. Das Flieflmittel 

wird aber durch einen schmalen Kapillarspalt zwischen Unterteil und einem Glaspl‰ttchen 

zugef¸hrt. Weiter besteht die Mˆglichkeit, mit eingelegter Glasplatte in Sandwichtechnik zu 

arbeiten oder ohne diese ggf. mit Vorkonditionierung zu arbeiten. 

Das Unterteil (1) wird mit den Stellschrauben genau 

horizontal ausgerichtet. Dann wird die untere Glasplatte 

(2) eingelegt bzw. das Vorkonditionierungsmittel 

eingef¸llt. Die DC-Platte (3) wird ñ mit der Schicht nach 

unten ñ aufgelegt, sie muss auf beiden Seiten genau 

neben den Flieflmittelvertiefungen liegen. In diese 

werden die schmale Glasstreifen (4) eingestellt, so dass 

sie die Platte nicht ber¸hren. Nach dem Einf¸llen des 

Flieflmittels werden sie mit den breiten Glasstreifen (5) 

an die Plattenkante geschoben: Das Flieflmittel kommt in 

Kontakt mit der Schicht und die Trennung beginnt. 

Vorher muss aber noch der Teflonwinkel (6) zur 

seitlichen Abdichtung eingesetzt werden. Das Ganze 

wird mit einer Plastikhaube (7) abgedeckt. 

Man kann die Trennung wie ¸blich nur von einer Seite laufen lassen oder von zwei 

gegen¸berliegenden Seiten ñ hat dann aber nur die halbe Strecke zur Verf¸gung. 

Manchmal kann eine Trennung dadurch verbessert werden, dass sie nach dem Trocknen der 

Platte einfach (oder auch mehrfach) wiederholt wird. Substanzen mit kleinen Rf-Werten 

werden dadurch etwas auseinander gezogen, w‰hrend Substanzen in der N‰he der 

Flieflmittelfront zusammen geschoben werden. Diese Mehrfachentwicklung kann auch mit 

unterschiedlichen mobilen Phasen erfolgen. 

Es gibt auch automatisierte Ger‰te f¸r diese Technik (AMD = automated multiple 

development), in denen 20, 30 oder mehr Trennl‰ufe einprogrammiert werden. Dabei kann 

von Lauf zu Lauf die Laufstrecke und die Fleiflmittelzusammensetzung variiert werden. 

Gemische von sehr vielen Komponenten kˆnnen mit der 

zweidimensionalen DC getrennt werden. Die Probe wird dabei nur 

in einer Ecke der Platte aufgetragen und dann zun‰chst wie bekannt 

entwickelt. F¸r die zweite Entwicklung wird die Platte um 90 

gedreht, sie erfolgt also quer zur ersten Trennung. Dadurch kˆnnen 

sich die Komponenten einer Probe ¸ber die gesamte Platte verteilen 

statt nur auf einen schmalen Streifen ¸ber der Startposition. F¸r die 

zweite Trennung muss man ein anderes Flieflmittel nehmen, sonst 

findet man die Komponenten alle auf der Diagonalen (warum 

wohl?). 



3.2.3. NACHBEHANDLUNG 

F¸r die Auswertung muss man die Komponenten der Probe auf der Platte lokalisieren. 

� Im einfachsten Fall machen sie sich durch ihre Eigenf‰rbung bemerkbar. 

� Farblose Substanzen kˆnnen manchmal fluoreszieren, man legt die Platte also unter 

eine UV-Lampe mit passender Wellenl‰nge (254 nm oder 366 nm). 

� Andere farblose Substanzen kˆnnen zwar nicht selbst fluoreszieren, absorbieren aber 

das UV-Licht. Ist die Schicht dann mit einem Fluoreszenzindikator versehen, so stellt 

man unter der UV-Lampe eine Fluoreszenzlˆschung fest. 

� Kommt man mit diesen zerstˆrungsfreien Tests nicht weiter, so muss man zu 

F‰rbereagenzien greifen. Aus dem groflen Katalog der mˆglichen Reagenzien seien 

hier nur einige genannt: 

o Iod-D‰mpfe als universelles F‰rbemittel, wird von vielen Substanzen 

absorbiert (braune Flecken) 

o Kaliumpermanganat/Schwefels‰ure ebenfalls universell einsetzbar, die 

Substanzen reduzieren das rosa Permangant zu farblosen Stoffen 

o Antimonchlorid erzeugt oft fluoreszierende oder gef‰rbte Produkte 

o Dragendorff-Reagenz (Bismutnitrat/Weins‰ure/Kaliumiodid) f‰rbt Alkaloide 

an 

o Eisen(III)chlorid f‰rbt Phenole gr¸n-blau 

o Ninhydrin bildet mit Aminen, Aminos‰uren und Peptide rˆtliche Flecken 

Meist werden diese Reagenzien als Lˆsungen verwendet, mit denen die getrockneten 

Platten bespr¸ht werden, gelegentlich werden sie auch ganz eingetaucht. F¸r beide 

Techniken gibt es passende Ger‰te. Zur Ausbildung der F‰rbung ist oft noch eine 

anschlieflende W‰rmebehandlung nˆtig. 

� Wenn man an genaueren 

Informationen ¸ber eine der getrennten 

Komponenten interessiert ist, kann man 

den betreffenden Fleck ausschneiden, 

die Substanz wieder auflˆsen und dann 

weiter untersuchen. Sehr elegant ñ 

aber auch aufwendig ñ sind 

massenspektroskopische Methoden, 

mit denen man direkt von der 

Trennplatte die Probe verdampft, zersetzt 

und dann die Masse der verschiedenen entstehenden Fragmente untersucht. Aus dem 

Massenspektrum kann man oft wertvolle Hinweise auf die Struktur der Substanz 

ableiten. 

Sind die einzelnen Komponenten lokalisiert, geht es weiter mit der Auswertung der 

Chromatogramme. 



3.3. FEHLERQUELLEN 

Jede Abweichung von den vorgesehenen Bedingungen kann das Ergebnis einer 

chromatographischen Trennung ver‰ndern. 

Die folgende Liste nennt eine Reihe von Mˆglichkeiten: 

� station‰re Phase 

� Herstellungsprozess der station‰ren Phase 

� Korngrˆfle und Korngrˆflenverteilung der Beschichtung 

� Aktivit‰t der station‰ren Phase 

� relative Feuchte 

� pH-Wert der Schicht 

� Bindemittel der station‰ren Phase 

� katalytische Zersetzung empfindlicher Probenkomponenten durch die station‰re Phase 

� Qualit‰tsschwankungen der Beschichtung 

� Schichtdicke der station‰ren Phase 

� Schwankungen der Schichtdicke 

� Vorbeladung mit Flieflmittelgemisch 

� mobile Phase 

� pH-Wert des Flieflmittels 

� Verunreinigungen im Flieflmittel 

� Volumen der Probe 

� Grˆfle und Form des Startflecks 

� Lˆsungsmittel der Probe 

� Art der Entwicklung 

� Kammertyp 

� Trennstrecke 

� S‰ttigung von Kammer und Schicht mit Flieflmitteld‰mpfen 

� Abstand zwischen Startzone und Flieflmittelniveau in der Kammer 

� Entmischung des Flieflmittels (z.B. durch Verdampfung) 

� Flieflgeschwindigkeit der mobilen Phase 

� Konvektion von Flieflmitteld‰mpfen in der Kammer 

� Temperatur 



4. FL‹SSIGKEITS-SƒULENCHROMATOGRAPHIE 

Der russische Botaniker Michael Tswett entdeckte 1903 das Prinzip der 

S‰ulenchromatographie (SC), als er einen Extrakt von Blattfarbstoffen durch ein mit 

Calciumcarbonat-Pulver gef¸lltes Glasrohr filtrierte und dann immer wieder das verwendete 

Lˆsungsmittel nachgoss. Er beobachtete verschieden gef‰rbte Zonen, die unterschiedlich 

langsam durch die S‰ule wanderten. Von solchen primitiven Vesuchsaufbauten ist man heute 

weit entfernt, eine ganze Industrie lebt davon, optimierte Ausr¸stungen f¸r die 

Chromatographie zu entwickeln und verkaufen. 

Die Auflˆsung einer Trenns‰ule h‰ngt ganz entscheidend von der Korngrˆfle der F¸llung ab. 

Je feiner die Kˆrner, desto niedriger sind die theoretischen Bˆden und desto bessere 

Ergebnisse werden erzielt. Weil gleichzeitig aber auch der Strˆmungswiderstand steigt, muss 

ein erheblicher technischer Aufwand betrieben werden, um solche Analysen noch in 

akzeptabler Zeit durchf¸hren zu kˆnnen. Das ganze Verfahren wird dann als HPLC (high 

performance liquid chromatography) bezeichnet. Im Einzelnen werden dazu benˆtigt: 

1. spezielle mobile Phasen, 

2. Hochdruck-Pumpen, 

3. besondere Ventile zur Probenaufgabe, 

4. die eigentliche Trenns‰ule und 

5. ein geeigneter Detektor 

6. mit daran angeschlossenem Integrator. 

Schliefllich m¸ssen die Ausdrucke des Integrators richtig ausgewertet werden. 



4.1. MOBILE PHASEN 

F¸r die mobilen Phasen gilt zun‰chst das, was bei der D¸nnschichtchromatographie zu den 

Flieflmitteln gesagt wurde: Wichtige Eigenschaften sind: 

� Polarit‰t, 

� pH-Wert, 

� Ionenst‰rke und 

� spezifische Wechselwirkungen mit den Proben. 

Auch Mischungen spielen eine bedeutende Rolle in der HPLC als mobile Phasen. 

Die Viskosit‰t spielt eine bedeutende Rolle, mit ihr steigt der Strˆmungswiderstand und 

entsprechend der benˆtigte Druck. Mischungen haben oft unerwartet hohe Viskosit‰ten, mehr 

als die Ausgangsstoffe. Die Viskosit‰t ist zusammen mit der UV-Durchl‰ssigkeit (90% 

Transmission bei 10 mm Schichtdicke) f¸r einige Fl¸ssigkeiten in der Tabelle unten 

angegeben. Vielfach wird ein UV-Photometer als Detektor eingesetzt, deshalb m¸ssen die 

verwendeten mobilen Phasen in diesem Wellenl‰ngenbereich entsprechend durchsichtig 

sein. Weil hier oft Verunreinigungen die Transparenz beeintr‰chtigen, m¸ssen f¸r die HPLC 

hoch gereinigte Sorten eingesetzt werden. 

Bezeichnung UV-Durchl‰ssigkeit bis Viskosit‰t 

Cyclohexan 210 nm 0,97 mPa � s 

Toluol 286 nm 0,77 mPa � s 

Ethylacetat 255 nm 0,44 mPa � s 

Aceton 330 nm 0,39 mPa � s 

Acetonitril 190 nm 0,32 mPa � s 

Methanol 210 nm 0,82 mPa � s 

Wasser 191 nm 1,01 mPa � s 

Gelˆste Gase in der mobilen Phase bereiten oft Schwierigkeiten, wenn sie sich als Bl‰schen 

abscheiden. Passiert dies in der S‰ule, nimmt die Strˆmung verschiedene Wege um die Blase 

herum und die Peaks werden verdoppelt oder verbreitert. In der Detektorzelle verursachen 

Luftblasen ein heftig schwankendes Signal oder einzelne, scheinbar unmotivierte Ausschl‰ge. 

Dann m¸ssen die verwendeten mobilen Phase entgast werden. Am einfachsten geht das mit 

einem Ultraschallbad, was aber den Nachteil hat, dass diese Behandlung mindestens t‰glich 

wiederholt werden muss. Aufwendiger und teurer sind Systeme, die eine Entgasung mittels 

Vakuum oder eines konstanten Stromes von Heliumgas durch die Fl¸ssigkeit vornehmen. 



4.2. PUMPEN 

Vor Beginn der Arbeit ist es sinnvoll, den Vorrat an mobiler Phase zu 

¸berpr¸fen und ggf. zu erg‰nzen. Aus den Vorratsflaschen gelangt die 

mobile Phase durch einen Ansaugfilter und d¸nne Schl‰uche zur 

eigentlichen Pumpe. 

Die feinkˆrnigen (bis herab zu einige µm Korngrˆfle) station‰ren Phasen bilden in der 

Trenns‰ule einen groflen Strˆmungswiderstand. Das erfordert sehr hohe Dr¸cke (bis zum 

400-fachen des normalen Luftdrucks), um auf die erforderlichen Fˆrderraten von etwa 1 ml je 

Minute zu kommen. Sie werden z.B. mit einer Kolbenpumpe erzielt. Ein Kolben aus Saphir 

(H‰rte!) bewegt sind in einem Zylinder periodisch vor und zur¸ck. Durch das Ansaugventil 

gelangt die Fl¸ssigkeit in den Kolben, durch das Auslassventil verl‰sst sie ihn wieder. Die 

Ventile verhindern einen entgegengesetzten Fl¸ssigkeitstransport. Der Kolben kann 

elektrisch, hydraulisch oder pneumatisch angetrieben werden. 

Die Pumpe hat normalerweise einen Drucksensor auf der Hochdruckseite eingebaut, der in 

folgenden Situationen den Fl¸ssigkeitstransport abschalten kann: 

� Eine Unterschreitung des minimalen Drucks deutet auf ein Leck vor der S‰ule hin. 

� Eine Verstopfung der S‰ule o.‰. f¸hrt zur ‹berschreitung des maximalen Drucks und 

kˆnnte sonst teure Sch‰den nach sich ziehen. 

Die Grenzwerte kˆnnen an der Pumpe eingestellt werden. 

Neben den Grundeinstellungen von Fˆrderrate und 

Drucklimits kˆnnen bei einer Gradientenpumpe 

mehrere Vorratsflaschen mit unterschiedlichen 

Fl¸ssigkeiten angesteuert werden. Solchen Pumpen 

sind in der Regel programmierbar und kˆnnen im 

Verlauf der Trennung die Zusammensetzung der 

mobilen Phase kontinuierlich ‰ndern. Dazu wird in der 

Regel die gew¸nschte Zusammensetzung der mobilen 

Phase an bestimmten Zeitpunkten eingegeben ñ bei 

einigen Pumpen kann man auch die Art des 

‹bergangs w‰hlen. 



Kolbenpumpen haben aber den Nachteil, dass sie keinen 

konstanten, sondern einen pulsierenden Druck liefern. Die 

S‰ulenpackung wird dadurch regelrecht festgeklopft und so weit 

verdichtet, dass ein Durchfluss verhindert werden kann. Um das zu 

verhindern, wird nach der Pumpe ein Pulsd‰mpfer eingebaut, z.B. 

ein federndes, schraubenfˆrmig aufgewickeltes Metallrˆhrchen. 

Die hohen Dr¸cke erfordern einigen Aufwand, um Lecks zu vermeiden. Als "Schl‰uche" 

verwendet man auf der Hochdruckseite enge Metallrohre von 1 bis 2 mm Durchmesser. Ggf. 

kann eine innere Beschichtung der Metallrohre Reaktionen zwischen Probe bzw. mobiler 

Phase und dem Metall verhindern. Die Anschl¸sse erfordern spezielle hochgenaue 

Dichtungen. Alle beweglichen Teile m¸ssen mit hˆchster Pr‰zision gefertigt und montiert 

sein. Um Undichtigkeiten durch Verschleifl zu vermeiden, werden dabei oft Keramiken oder 

andere harte Materialien eingesetzt. 

F¸r die Niederdruck-Fl¸ssigkeits-SC werden geringere 

Anforderungen an die Pumpe und die Verbindungen 

gestellt. Bei der Membranpumpe ersetzt eine 

periodisch bewegte Membran den Kolben als 

Abschluss des Pumpenraums. Eine 

peristaltische Pumpe (Bild) pumpt die 

Fl¸ssigkeit direkt im Schlauch: Ein Rad mit 

Rollen grenzt einzelne Schlauchabschnitte 

gegeneinander ab und dr¸ckt ihren Inhalt in 

Pumprichtung voran. Wenn das zu fˆrdernde 

Gesamtvolumen nicht zu grofl ist, kann auch eine 

ausreichend grofle, elektrisch angetriebene Spritze als 

Pumpe dienen. 

4.3. PROBENAUFGABE 

Der hohe Druck am S‰ulenanfang erfordert besondere Vorkehrungen, damit an der Stelle der 

Probenaufgabe nicht die mobile Phase austritt, anstatt durch die S‰ule zu flieflen: das 

Sechswegeventil. Die Probe selbst wird dann mittels einer Mikroliterspritze in das 

Sechswegeventil gespritzt. Der ganze Vorgang kann f¸r Reihenuntersuchungen mit einem 

Autosampler automatisiert werden. 



SECHSWEGEVENTIL 

Von den sechs Anschl¸ssen eines Sechswegeventils sind in den beiden Positionen des Rotors 

jeweils zwei benachbarte Anschl¸sse miteinander verbunden. In der Position LOAD kann die 

Dosierschleife mit der Mikroliterspritze gef¸llt werden, ein ‹berschuss flieflt ¸ber ab. 

Gleichzeitig ist die Pumpe mit der S‰ule direkt verbunden. Dreht man nun den Rotor in die 

Position INJECT, so wird die Dosierschleife zwischen Pumpe und S‰ule geschaltet. Ihr Inhalt 

bestimmt also das Probenvolumen, das untersucht wird. 



MIKROLITERSPRITZE 

Die benˆtigten Volumina in der Grˆflenordnung von 20 µl werden am besten mit 

Mikroliterspritzen gehandhabt. Sie sind ‰hnlich wie die medizinischen Spritzen aus Zylinder, 

Kolben und Nadel aufgebaut, nur mit sehr viel kleineren Durchmessern. Es sind 

verschiedenen Nadelformen im Einsatz: 

� Stumpfe Nadeln f¸r die HPLC, wenn keine Septen durchstoflen werden m¸ssen 

� schr‰g angeschliffene Nadeln f¸r die GC, bei der man durch Septen injizieren muss, 

� konisch angeschliffene Nadeln f¸r Autosampler schonen die Septen 

� verst‰rkte Nadeln, wenn die Gefahr des Umknickens der Nadel besteht 

� Nadeln mit runder, geschlossener Spitze und seitlichem Auslass ... 

HANDHABUNG 

F¸r die GC, bei der Volumina bis herab zu 

0,1 µl eingespritzt werden m¸ssen, ist die 

Nadel der Kolben und ein d¸nner Draht in 

der Nadel der Zylinder. Um empfindliche 

Spritzen zu sch¸tzen und immer das gleiche 

Volumen einzuspritzen, gibt es spezielle 

Spritzenhalter. 

1. Das Sechswegeventil z¸gig auf LOAD stellen ñ dreht man das Ventil zu langsam, 

wird die S‰ule blockiert und der ‹berdrucksensor schaltet die Pumpe ab. 

2. Die Spritze mit der Probe gr¸ndlich durchsp¸len. 

3. Die Probe ohne Luftblasen aufziehen ñ eine hartn‰ckig bleibende Luftblase ggf. nicht 

mit einspritzen. Das Volumen sollte deutlich mehr als die Dosierschleife sein. 

4. Die Spritze einf¸hren und die Probe einspritzen. 

5. Das Sechswegeventil z¸gig auf INJECT stellen (s. 1.). Bei manchen wird dabei 

automatisch der Integrator gestartet, bei anderen muss man das gleichzeitig von Hand 

erledigen. 

4.4. SƒULEN 

Abmessungen: Analytische HPLC-S‰ulen sind zwischen 50 und 250 mm lang und haben 

einen Innendurchmesser von 4 mm oder weniger (Microbore-S‰ulen). Es gibt einige 

unterschiedliche Anschluss-Systeme, die man beim Austausch beachten muss. 



Die Packung der S‰ule besteht aus etwa 2 bis 10 µm groflen Kˆrnern, wobei jeweils auf eine 

geringe Breite der Korngrˆflenverteilung geachtet wird. Die Hersteller unterscheiden 

zwischen unregelm‰flig geformten, gemahlenen Kˆrnern und solchen, die gleich in kugeliger 

Gestalt hergestellt werden. Porˆse Kˆrner ñ mit unterschiedlichen Porendurchmessern (etwa 

10 nm) ñ haben eine grofle innere Oberfl‰che (hohe Kapazit‰t), w‰hrend bei dichten Kˆrnern 

die Diffusionswege kurz sind (schnelle Trennungen). 

Das wichtigste zum Material der Kˆrner wurde bei der D¸nnschichtchromatographie gesagt, 

deshalb folgt hier nur eine kurze Aufz‰hlung mit einigen Erg‰nzungen. Am h‰ufigsten 

werden (modifizierte) Kieselgele eingesetzt. 

� unmodifiziertes Kieselgel 

� Octadecyl-modifiziertes Kieselgel (RP-18 Phasen) werden gern zusammen mit 

Acetonitril/Wasser-Gemischen eingesetzt. Gegen die Tendenz der C18-Reste, sich in 

w‰ssriger Umgebung auf die Oberfl‰che des Kieselgels zu legen und so die 

S‰ulenqualit‰t dramatisch zu verschlechtern, haben sich die Hersteller diverse Tricks 

einfallen lassen. 

� mit k¸rzeren Alkyl-Gruppen modifizierte Kieselgele (Dodecyl=C12, Octyl=C8, 

Hexyl=C6, Pentyl=C5, Butyl=C4, Propyl=C3, Methy=C1) 

� Dimethyl-modifiziertes Kieselgel (C2) 

� Phenyl-modifiziertes Kieselgel (Ph) 

� Phenyl-Ether-modifiziertes Kieselgel 

� Cyano-modifiziertes Kieselgel (CN) 

� Nitrophenol-modifiziertes Kieselgel (NO2) 

� Diol-modifiziertes Kieselgel (Diol) 

� Amino-modifiziertes Kieselgel (NH2) 

� Dimethylamino-modifiziertes Kieselgel 

� Diethylaminoethyl-modifiziertes Kieselgel (WAX), ein schwacher 

Anionenaustauscher 

� Carboxymethyl-modifiziertes Kieselgel (WCX), ein schwacher Kationenaustauscher 

� Sulfons‰ure-modifiziertes Kieselgel (SAX), ein starker Anionenaustauscher 

� Quatern‰r Ammonium-modifiziertes Kieselgel (SCX), ein starker Kationenaustauscher 

� durch spezielle Impr‰gnierungen modifizierte S‰ulen 

Ein nicht ganz so umfangreiches Programm von S‰ulen ñ insbesondere zur Probenvorbereitung 

ñ wird auch auf einer Polymerbasis angeboten. Weiter gibt es S‰ulen mit 

folgenden Packungen: 

� Aluminiumoxid, 

� Cellulose in verschiedenen Formen, 

� Polyamid, 

� Florisil (einem Magnesiumsilikat), 

� Hydroxyapatit, aus dem auch Z‰hne und Knochen bestehen, f¸r biochemische 

Trennungen, 

� verschiedene modifizierte Polystyrole f¸r die Gel-Chromatographie und 

� Zirkoniumdioxid, das wie Kieselgel modifiziert werden kann und besonders 

temperatur- und pH-stabil ist. 

Ein Hersteller bietet an, ‰hnlich wie bei den mobilen Phasen auch die station‰ren Phasen f¸r 

ein spezielles Trennproblem optimiert zu mischen. 



Kurze Vors‰ulen werden vor der eigentlichen Trenns‰ule 

montiert. Sie kˆnnen, m¸ssen aber nicht aus dem gleichen 

Material wie die Trenns‰ule bestehen. Verschlechterungen 

der S‰ule, die meist am Anfang einsetzen, werden von der 

Vors‰ule aufgenommen, die leicht und g¸nstig 

ausgewechselt werden kann. Verdichtung der Packung 

durch eine schlechte Pumpen-d‰mpfung, ungelˆste 

Partikel in der Probe und die langsame Auflˆsung des 

S‰ulenmaterials kˆnnen Ursachen eines solchen Qualit‰tsverlustes sein. 

Bei empfindlichen Trennungen setzt man einen S‰ulenthermostaten ein, der f¸r eine 

konstante Temperatur bei der Trennung sorgt und so die Reproduzierbarkeit verbessert. 

In manchen F‰llen, besonders bei automatisierten Systemen, lohnt es sich mehrere, u.U. 

verschiedene S‰ulen parallel oder in Reihe zu schalten. 

4.5. DETEKTOREN 

Am S‰ulenausgang wird mit dem Detektor eine physikalische Eigenschaft der austretenden 

Lˆsung gemessen, die sich ‰ndert, wenn darin Probenkomponenten enthalten sind. Der 

Detektor muss als passend zur untersuchten Probe ausgew‰hlt und eingestellt werden. Die 

Nachweisgrenze liegt typischerweise bei 1 ng/ml. In der Regel muss man Empfindlichkeit 

und Messbereich der vorliegenden Aufgabe anpassen. 

UV/VIS-DETEKTOR 

In einer kleinen Durchflussk¸vette wird die Extinktion der Lˆsung mit monochromatischem 

Licht gemessen. Um nicht nur gef‰rbte Verbindungen erfassen zu kˆnnen, wurde der 

Messbereich bis ins Ultraviolette ausgedehnt, wo viele organische Substanzen mit 

Doppelbindungen die Strahlung absorbieren. Die wichtigste Einstellung am Detektor ist die 

verwendete Wellenl‰nge, die ein Kompromiss f¸r die Substanzen sein muss, die man 

bestimmen will ñ andere Substanzen bleiben u.U. unentdeckt. Als Lichtquelle dient 

normalerweise eine Deuteriumlampe mit einem Prismen- oder Gittermonochromator. 

DIODENARRAY-DETEKTOR 

Dieser Detektor misst dieselben Eigenschaften wie der UV/Vis-Detektor ñ mit einem 

wesentlichen Unterschied: Aus dem Spektrum wird nicht eine Wellenl‰nge ausgew‰hlt und 

gemessen, sondern der Lichtdetektor besteht aus einer ganzen Reihe (Diodenarray) einzelner 

lichtempfindlicher Bauteile. So kann man simultan das gesamte Spektrum der Substanz in der 

K¸vette erfassen. Aufgezeichnet wird statt einer Linie eine ganze Fl‰che von Werten. Schnitte 

in den beiden horizontalen Ebenen entsprechen dem ¸blichen Chromatogramm (bei 

konstanter Wellenl‰nge) bzw. einem ¸blichen Spektrum (bei konstanter Retentionszeit). 

Dadurch kann nachtr‰glich f¸r jede Substanz die optimale Wellenl‰nge herangezogen werden. 

FLUORESZENZ-DETEKTOR 

Die Fluoreszenz kann auch in der HPLC zum quantitativen Nachweis genutzt werden. Im 

Unterschied zu den beiden bisher besprochenen Detektoren wird nicht in Transmission 

gearbeitet, sondern das Fluoreszenzlicht wird im rechten Winkel zum eingestrahlten UV-Licht 

gemessen. Eingestellt werden m¸ssen die Wellenl‰nge des Anregungslichtes (UV) und die 

des Fluoreszenzlichtes (meist im sichtbaren Bereich). Nicht viele Substanzen fluoreszieren, 

dann aber hat man einen empfindlichen Detektor zur Verf¸gung. 



DIFFERENTIALREFRAKTOMETER 

Als letzter optischer Detektor soll das Differentialrefraktometer besprochen werden. 

Bestimmt wird der Brechzahl-Unterschied zwischen der reinen mobilen Phase, bevor sie auf 

die S‰ule strˆmt und danach. So erfasst man nur die Unterschiede, die durch gelˆste Stoffe 

verursacht sind, und man wird unabh‰ngig von einer sich ‰ndernden Raumtemperatur, die die 

Brechzahl deutlich beeinflusst. Mit diesem Detektor kann man nahezu alle Substanzen 

bestimmen, allerdings ist er etwas unempfindlicher als die anderen. 

LEITFƒHIGKEITSDETEKTOR 

Die elektrische Leitf‰higkeit ‰ndert sich empfindlich mit dem Gehalt an Elektrolyten in einer 

Lˆsung. So ist dieser Detektor das Ger‰t der Wahl f¸r viele (nicht alle) 

ionenchromatographische Trennungen. Um elektrolytische Zersetzungen zu vermeiden, 

arbeiten diese Ger‰te meist mit Wechselstrom. 

AMPEROMETRISCHER DETEKTOR 

Man kann aber auch gezielt die Elektrolyse anstreben. In der Amperometrie werden 

Substanzen, die man elektrolytisch reduzieren oder oxidieren kann, erfasst. Voraussetzung ist 

eine elektrolytische Leitf‰higkeit der mobilen Phase. 

REAKTIONSDETEKTOR 

Dieser Detektor ist streng genommen gar kein eigenst‰ndiger Detektor, sondern wird einem 

solchen nur vorgeschaltet. Wenn die Substanzen mit einem bestimmten System gut zu 

trennen, aber schlecht nachzuweisen sind, kann man einen ‰hnlichen Weg wie in der 

D¸nnschichtchromatographie beschreiten, indem man die Substanzen nach der Trennung 

chemisch reagieren l‰sst. Die Reaktionspartner werden schon in die mobile Phase gemischt, 

die Reaktion selbst wird aber erst durch Licht ausgelˆst. Um eine ausreichend intensive 

Bestrahlung zu erreichen hat man aus einem d¸nnen Plastikschlauch einen Strumpf gestrickt 

und ¸ber eine Lampe gezogen ñ so haben die Substanzen ausreichend Zeit zu reagieren, 

werden aber nicht nachtr‰glich wieder gemischt. 

MASSENSPEKTROMETER 

Dies ist der aufwendigste Detektor, der sich zudem nur f¸r fl¸chtige Substanzen eignet. Er 

bietet aber vergleichbar dem Diodenarraydetektor den Vorteil, dass zu jedem Zeitpunkt ein 

ganzes Spektrum von Eigenschaften zur Verf¸gung steht, die zudem recht einfach 

interpretiert werden kˆnnen. Die Substanz wird n‰mlich verdampft und dabei in Molek¸l- 

Bruchst¸cke zerlegt. Diese werden ñ in Abh‰ngigkeit von ihrer Masse ñ registriert. 




‹BERSICHT 

PROBLEME MIT DEN GERƒTEN 

[Lecks] [Sechswegeventil] [Kein Fluss] [Zu geringer Fluss] [Zu hoher Druck / steigender Druck] [Zu niedriger 

Druck / fallender Druck] [Druckschwankungen] 

PROBLEME MIT DEN PEAKS 

[Keine Peaks] [Breite Peaks] [Peak-Tailing] [Peak-Fronting] [Doppelte Peaks] [Negative Peaks] [Geister-Peaks] 

[Zu kleine Peaks] [Zu grofle Peaks] 

PROBLEME MIT DER BASISLINIE 

[Drift] [regelm‰flige Schwankungen] [unregelm‰flige Schwankungen] 

[ver‰nderliche Retentionszeiten] 

LECKS 

� zu hoher Druck 

� Pumpe undicht 

� Sp¸lventil nicht richtig geschlossen 

� Mixer undicht 

� Drucksensor undicht 

� Pulsationsd‰mpfer defekt 

� Sechswegeventil undicht 

� falsche Spritze zu Probenaufgabe 

� Fitting zu lose, zu fest, gerissen, verschmutz, nicht passend 

� Verstopfungen 

� Detektorzelle undicht 

PROBLEME MIT DEM SECHSWEGEVENTIL 

� Leck 

� Rotor zu fest angezogen 

� Dosierschleife verstopft 

� Spritze verschmutzt 

KEIN FLUSS 

� Mangel an station‰rer Phase 

� Ansaugfilter verstopft 

� Pumpe nicht eingeschaltet 

� Sicherung durchgebrannt 

� Pumpe wegen ‹berschreitung der Drucklimits ausgeschaltet 

� Pumpe wegen ‹berschreitung der Zeit ausgeschaltet 

� Luft in der Pumpe 

� Pumpe defekt 

� Leck 

ZU GERINGER FLUSS 

� Pumpe falsch programmiert 

� Druck zu hoch 

� Lecks 



ZU HOHER DRUCK / STEIGENDER DRUCK 

� zu hohe Flussrate eingestellt 

� S‰ule oder Vors‰ule verstopft, auch durch Bakterien 

� Verstopfung System (Sechswegeventil, Schl‰uche, Detektorzelle, Ablauf) 

� Ausf‰llung von Salzen 

� mobile Phase mit zu hoher Viskosit‰t 

� station‰re Phase zu fein gekˆrnt 

� Polymer als station‰re Phase: bei Eluentenwechsel gequollen 

� S‰ulentemperatur zu niedrig 

� Drucksensor defekt 

ZU NIEDRIGER DRUCK / FALLENDER DRUCK 

� kein Druckausgleich bei Vorrat der mobilen Phase 

� Flussrate zu niedrig eingestellt 

� Luftblase in der Pumpe 

� Dichtung oder Ventil an Pumpe defekt 

� Drucksensor defekt 

� Leck zwischen Pumpe und S‰ule 

� falsche S‰ule 

� S‰ule zu warm 

DRUCKSCHWANKUNGEN 

� Gradiententrennung: normal 

� mobile Phase nicht entgast 

� Luftblase in der Pumpe 

� Pumpe defekt (Ventile, Kolbendichtung) 

� Lecks zwischen Pumpe und S‰ule 

KEINE PEAKS 

� Probe nicht oder falsch eingespritzt 

� kein Fluss 

� Detektor funktioniert nicht (Lampe aus, falsche Einstellungen, Verbindung unterbrochen) 

� Integrator falsch programmiert 

BREITE PEAKS 

� zwei nicht getrennte Peaks 

� zuviel oder zu konzentrierte Probe (‹berladung), Probenschleife zu grofl 

� zu grofles Totvolumen in der Apparatur 

� falsche mobile Phase (Art, Zusammensetzung, Reinheit) 

� zu geringe Pufferkonzentration 

� Vors‰ule kontaminiert 

� zu geringer Fluss 

� zu lange Retentionszeit 

� zu niedrige S‰ulentemperatur 

� Leck zwischen S‰ule und Detektor 

� Detektorzelle zu grofl 

� Detektoreinstellung zu langsam 



PEAK-TAILING 

unsymmetrischer Peak: schneller Anstieg und langsamer Abfall 

� nicht getrennte Peaks 

� Verstopfung der Vors‰ule 

� Totvolumen im System 

� pH-Wert der mobilen Phase zu nahe am pK-Wert der betreffenden Substanz 

� Wechselwirkung zwischen Komplexbildnern und Metallspuren in der S‰ule (Abhilfe: andere S‰ule, 

EDTA-Zusatz zur mobilen Phase) 

PEAK-FRONTING 

unsymmetrischer Peak: langsamer Anstieg und schneller Abfall 

� nicht getrennte Peaks 

� ‹berladung der S‰ule 

� Kanalbildung in der S‰ule 

� Detektorzelle zu grofl 

DOPPELTE PEAKS 

� Probe doppelt eingespritzt 

� zwei schlecht getrennte Substanzen 

� S‰ulen¸berladung 

� Lˆsungsmittel der Probe zu stark 

� Dosierschleife verstopft 

� Vors‰ule verstopft 

� Totvolumen oder Kanalbildung in der S‰ule 

DEFORMIERTE PEAKS 

� S‰ule ¸berladen 

� falscher Messbereich des Detektors 

� Integrator falsch eingestellt 

� Zeitkonstante von Detektor oder Integrator zu hoch 

NEGATIVE PEAKS 

� bei Brechzahl- und Leitf‰higkeitsdetektor normal, ggf. den Detektor umpolen 

� UV-Detektor: Probenkomponente absorbiert schw‰cher als mobile Phase 

GEISTER-PEAKS 

� versp‰tete Elution aus einer fr¸heren Analyse 

� Verunreinigung 

� Luftblase im Detektor 

� S‰ule offen gelagert 

ZU KLEINE PEAKS 

� Probenverluste bei der Aufbereitung 

� zu wenig / zu gering konzentrierte Probe eingespritzt 

� Detektor falsch eingestellt: Zeitkonstante zu grofl, Abschw‰chung zu hoch, D‰mpfung zu stark 

� irreversible Adsorption in der S‰ule (durch entsprechende Zus‰tze zur mobilen Phase unterbinden) 

ZU GROflE PEAKS 

� S‰ule ¸berladen (Volumen oder Konzentration reduzieren) 

� Detektor ¸bersteuert 



DRIFT DER BASISLINIE 

� Gradiententrennung: normal, ggf. mobile Phase wechseln (Reinheit, Art, UV-absorbierenden Zusatz in 

der durchsichtigeren Komponente) 

� sehr breiter Peak 

� Mischungsprobleme bei der mobilen Phase 

� Ansammlung von Verunreinigungen 

� S‰ulentemperatur ‰ndert sich 

� Wellenl‰nge nicht bei Extinktionsmaximum 

� Detektorzelle verschmutzt 

� Luftblase im Detektor 

� Detektorzelle undicht 

UNREGELMƒflIGE SCHWANKUNGEN DER BASISLINIE 

� am Start des Chromatogramms: Inkompatibilit‰t von Lˆsungsmittel der Probe und mobiler Phase 

� Mischungsprobleme bei der mobilen Phase 

� Luftblase im System 

� Leck 

� Dosierventile in der Pumpe defekt 

� Mischer funktioniert nicht richtig 

� langsam: Temperaturschwankungen 

� S‰ule zu warm, mobile Phase siedet 

� S‰ule verliert station‰re Phase 

� schwache Detektorlampe 

� Detektor verschmutzt 

� elektrische Stˆrungen von anderen Ger‰ten 

REGELMƒflIGE SCHWANKUNGEN DER BASISLINIE 

� periodisch: Pulsation der Pumpe 

� Verunreinigungen 

� Luftblase im System 

� Leck 

� Mischungsproblem der mobilen Phase 

� unterschiedliche Temperatur von Detektor und S‰ule 

� Detektor defekt 

� elektrische Stˆrungen von anderen Ger‰ten 

VERƒNDERLICHE RETENTIONSZEITEN 

� k¸rzer: ‹berladung der S‰ule 

� falsche Flussrate 

� k¸rzer: Verlust an station‰rer Phase 

� l‰nger: Lecks 

� S‰ule nicht equilibriert 

� unzureichende Pufferkapazit‰t 

� Mischungsprobleme 

� S‰ulentemperatur nicht konstant 

� Luft in der Pumpe 

� ge‰nderte Zusammensetzung der mobilen Phase 



5. GASCHROMATOGRAPHIE ( GC ) 

Die Verwendung von Gasen als mobile Phase setzt eine spezielle Ausstattung voraus. 

Benˆtigt werden: 

1. Gasversorgung, 

2. Probenaufgabesystem, 

3. S‰ule mit Ofen, 

4. Detektor und 

5. Integrator 

Die Teile 2 bis 5 sind h‰ufig in den Gaschromatographen integriert. 

Zur Auswertung der Gaschromatogramme muss man noch etwas rechnen. 

5.1. GASVERSORGUNG 

Als mobile Phasen (Tr‰gergase) werden ¸berwiegend inerte Gase 

wie Stickstoff, Argon, Wasserstoff oder Helium eingesetzt. F¸r 

die Trennung spielt die Art des Gases nur eine untergeordnete 

Rolle. 

� Wasserstoff und Helium sind mit ihrer hohen 

W‰rmeleitf‰higkeit besonders beim TCD geeignet. 

� Wasserstoff bildet mit Luft explosive Mischungen. 

� Mit Stickstoff benˆtigt man eine geringere 

Flieflgeschwindigkeit, um gleiche Trennergebnisse zu 

erzielen wie mit Helium. 

� Stickstoff ist das billigste Gas. 

Gase werden heute ¸blicherweise komprimiert in Druckgasflaschen (Photo) geliefert, f¸r die 

besondere Sicherheitsvorschriften gelten. F¸r manche Detektoren wird zus‰tzlich noch 

synthetische Luft benˆtigt. 



In den Druckgasflaschen herrscht etwa der 

200-fache Atmosph‰rendruck, das ist viel zu 

viel f¸r die GC. Mit Reduzierventilen kann 

man den Druck anpassen (herabsetzen). 

Meist arbeitet man mit mehreren solcher 

Reduzierventile hintereinander (an der 

Gasflasche, an der Entnahmestation, im 

GC). 

Es ist wichtig, die einzelnen Bedienungselemente 

richtig zu benutzen: Es gibt jeweils 

einen Absperrhahn f¸r die Gaszufuhr (1) und 

manchmal auch den Gasausgang sowie einen 

Regelknopf f¸r den reduzierten Druck (2). Weiter kann man den Vordruck und/oder den 

Arbeitsdruck an einem Manometer ablesen (hier: Arbeitsdruck). ‹ber den Druck wird die 

Strˆmungsgeschwindigkeit in der S‰ule geregelt. 

An das Gas f¸r die GS werden hohe Reinheitsanforderungen gestellt. Wenn die vom 

Hersteller gelieferte Qualit‰t nicht ausreicht, kˆnnen noch spezielle Gasreinigungspatronen 

eingesetzt werden: 

� Sauerstoff-Filter arbeiten mit einem leicht 

oxydierbaren Metall auf einem porˆsen 

Tr‰ger. 

� Als Wasserfilter dienen Molekularsiebe, das 

sind Silikate mit groflen Kristallgitter- 

Hohlr‰umen, in denen kleine Molek¸le 

gebunden werden kˆnnen. 

� Aktivkohlefilter halten ÷l (von Pressluft- 

Kompressoren) sowie einige schwefel- und 

halogenhaltige Substanzen zur¸ck. 

� Kohlendioxid wird mit Natriumhydroxid auf einem Tr‰germaterial entfernt. 

� Katalytische Filter verbrennen einige Verunreinigungen, sie benˆtigen also Sauerstoff und m¸ssen vor 

den ¸brigen Filtern installiert sein. 

Teilweise auf der Basis von Gasfiltern werden auch Gasgeneratoren angeboten f¸r Null-Luft 

(frei von Kohlenwasserstoffen, z.T. auch von Wasser und Kohlendioxid), Stickstoff und 

Wasserstoff. Der Wasserstoff wird dabei elektrolytisch aus Wasser gewonnen. 

5.2. PROBENAUFGABE 

‹BERSICHT 

Die grundlegenden Elemente eines Einlass-Systems f¸r die GC werden am einfachsten 

Beispiel ñ einem Einlass ohne Split f¸r fl¸ssige Proben ñ erl‰utert. In der Kapillar-GC wird 

der Einsatz eines Splitters notwendig, um die S‰ule nicht zu ¸berladen. Bei der Headspace- 

Technik arbeitet man nicht mit Probenlˆsungen, sondern entnimmt das 

Untersuchungsmaterial aus dem Gasraum ¸ber der Probe. Neben diesen Standard-Techniken 

gibt es noch weitere Mˆglichkeiten, die Proben auf eine GC-S‰ule zu geben. 

EINLASS OHNE SPLIT 

Bei gepackten S‰ulen mit ihrem grˆfleren Querschnitt und in der Spurenanalytik auf 

Kapillars‰ulen reicht als fl¸ssiges Probenvolumen etwa 1 µl aus. Diese Menge kann gerade 

noch bequem mit einer Mikroliterspritze abgemessen werden. 



Beim Einspritzen soll die Probe schnell 

verdampfen, es entstehen dabei etwa 1 ml 

Gas. Deshalb befinden sich alle Teile des 

Einlass-Systems in einem Einspritzblock 

(Bild), dessen Temperatur deshalb ¸ber dem 

Siedepunkts des Lˆsemittel liegen soll ñ aber 

nicht zu sehr, da sonst thermische 

Zersetzungsreaktionen auftreten kˆnnen. Das 

Gas (1) wird durch den Einspritzblock zur 

S‰ule (2) gef¸hrt. 

Durch ein Septum (3) kann mit einer Mikroliterspritze die Probe in den 

Einspritzblock gebracht werden, ohne dass an dieser Stelle das Gas 

austritt. Die Septen bestehen meist aus Silikonkautschuk und/oder 

Teflon. Gelegentlich m¸ssen die Septen gewechselt werden, wenn sie 

durch viele Injektionen beginnen auszureiflen oder anfangen zu "bluten", 

d.h. Bestandteile an das Gas abgeben. Dabei muss das richtige Septum 

gew‰hlt werden (Abmessungen, Maximaltemperatur, Verwendungszweck) 

und die Septumschraube darf nur mit Gef¸hl angezogen werden. 

An der heiflen Oberfl‰che des Einspritzblocks 

kann es zu chemischen Reaktionen 

der Probe kommen. Um das zu verhindern 

wird ein Inlet Liner (4) eingesetzt. Er 

besteht aus Glas, das durch eine spezielle 

Behandlung (Silanisierung) inaktiviert wird, 

so dass keine Adsorption u.‰. zu erwarten ist. Das Volumen muss zur verwendeten S‰ule 

passen. Die spezielle Formgebung oder eine F¸llung aus silanisierter Glaswolle vergrˆflert die 

Oberfl‰che und beschleunigt so die Verdampfung. 

Die Mikroliterspritzen f¸r die GC erlauben die Abmessung von Bruchteilen eines µl, indem 

die Nadel als Zylinder und ein d¸nner Draht darin als Kolben verwendet wird. Sie sind 

entsprechend vorsichtig zu handhaben. Der Spritzenhalter sch¸tzt die Spritze dabei z.T. 

1. Vor dem Einspritzen werden sie gr¸ndlich mit der jeweiligen Probe ausgesp¸lt, um 

Verschleppungen zu vermeiden. 

2. Dann zieht man die Probe auf, l‰sst den ‹berschuss aus der Spritze heraus und wischt 

die Nadel ab, ohne dabei ÷ffnung zu ber¸hren. 

3. Man setzt die Nadel in der Mitte des Septums genau im rechten Winkel dazu auf und 

durchsticht vorsichtig das Septum. Dabei f¸hrt man die Nadel in der Mitte zwischen 

zwei Fingern, um ein Verbiegen zu vermeiden. 

4. Ist die Nadel weit genug eingef¸hrt, injiziert man die Probe und entfernt die Spritze 

wieder. 

Einige Alternativen zum beschriebenen Vorgehen sind: 

� Die Verdampfung der Probe aus der gef¸llten Nadel, d.h. der Kolben wird bei der Probenaufgabe nicht 

bewegt. 

� Das Einspritzen mit heifler Nadel: Nach dem Einf¸hren der Nadel wartet man eine bestimmte Zeit, 

bevor man die Probe einspritzt. 

� Zus‰tzliches Einspritzen einer Luftblase und/oder von etwas reinem Lˆsungsmittel nach der Probe ñ 

dazu muss man nat¸rlich vorher entsprechend aufziehen. 



EINLASS MIT SPLIT 

Die Kapillar-GC erfordert Probenmengen 

unter 0,01 µl, die man nicht mehr einfach 

handhaben kann. Stattdessen spritzt man 

etwa 1 µl ein und verdampft diese Probe im 

Einspritzblock. Nun wird allerdings der 

grˆflte Teil davon seitlich aus dem 

Einspritzblock in die Umgebung entlassen 

und nur ein kleiner Rest gelangt auf die 

Trenns‰ule. Das Splitverh‰ltnis wird durch 

das Splitventil (A) geregelt, je weiter man dieses ˆffnet, desto weniger Probe gelangt auf die 

S‰ule. Das genaue Verh‰ltnis h‰ngt aber auch vom Tr‰gergas, Vordruck und den 

Temperaturen von Einspritzblock und Trenns‰ule ab. Mit geschlossenem Splitventil kann 

man auch "splitless" arbeiten. 

HEADSPACE-TECHNIK 

WEITERE SYSTEME 

Bei der Headspace-Technik werden die Probengef‰fle mit 

Septen verschlossen und dann aus dem Gasraum ¸ber der 

Probe das Untersuchungsmaterial entnommen. Dazu werden 

die Gl‰schen in einen beheizten (Revolver-)Halter eingesetzt 

(Verdampfung der interessanten Bestandteile) und einige 

Minuten temperiert. Dann wird der Halter vor die 

Injektionsposition gedreht und auf die Injektionsnadel 

geschoben. Nach einem programmierten Schema entnimmt 

das Ger‰t dann ein bestimmtes Gasvolumen aus dem 

Probengef‰fl und schickt es auf die S‰ule. 

Beim PTV-System (programed temperature vaporization) kann der Einspritzblock erst 

unmittelbar nach der Injektion sehr rasch (bis 20 C pro Sekunde) und programmiert auf die 

erforderliche Temperatur aufgeheizt werden. Man vermeidet dadurch stˆrende thermische 

Reaktionen. 

Manche GC-System verzichten auf einen Einspritzblock und ermˆglichen eine 

Direkteinspritzung auf die (kalte) S‰ule. Ihre Bedienung erfordert besondere Erfahrung. 

Die SPME (solid phase micro extraction) integriert einen Teil der Probenvorbereitung mit der 

Probenaufgabe. Eine feine Faser, mit einem passenden Absorptionsmittel versehen und in 

einem Metallhalter gesch¸tzt, absorbiert aus der Probe (entweder ¸ber den Gasraum oder aus 

der Fl¸ssigkeit) die interessanten Analyten. Diese Faser kann dann mit ihrem Halter wie eine 

Spritze gehandhabt werden, im Ein"spritz"block verdampft das absorbierte Material. Beim 

Durchstechen der Septen muss die Faser nat¸rlich durch den Halter gesch¸tzt sein! 



5.3. SƒULEN 

‹BERSICHT 

Zuerst wurden in der Gaschromatographie gepackte S‰ulen, ‰hnlich wie in der HPLC, 

verwendet. Inzwischen wurden sie weitgehend von Kapillars‰ulen abgelˆst. In beiden 

S‰ulentypen befinden sich speziell f¸r die GC entwickelte station‰re Phasen. Die 

"Lˆslichkeit" der Probenkomponenten ist durch ihren jeweiligen Gleichgewichts-Dampfdruck 

gegeben, der stark von der Temperatur abh‰ngt. Statt der mobilen Phase variiert man bei der 

GC deshalb die Temperatur der Trenns‰ule, die sich dazu in einem thermostatisierten 

S‰ulenofen befindet. 

GEPACKTE SƒULEN 

Die S‰ulen mit einem Innendurchmesser von 

2 bis 4 mm sind mit der station‰ren Phase 

gef¸llt. Diese Kˆrner haben einen 

Durchmesser, der etwa 10% der S‰ule 

ausmacht und sind porˆs. Adsorptionsphasen 

kˆnnen direkt eingef¸llt werden, w‰hrend die 

fl¸ssigen Verteilungsphasen als 

Impr‰gnierung eines von Kieselgur 

abgeleiteten Tr‰germaterials (Chromosorb) 

Verwendung finden. Wegen des 

Strˆmungswiderstandes der Packung kˆnnen 

diese S‰ulen nur 1 bis 6 m lang sein. Die 

Wand der Trenns‰ulen besteht aus Kupfer, Stahl, Glas oder Quarzglas. 

KAPILLARSƒULEN 

Mit Innendurchmessern von 0,05 bis 0,53 

mm (typisch: 0,32 mm) sind die 

Diffusionswege zur Wand so kurz, dass auf 

eine durchgehende F¸llung der 

Kapillars‰ulen verzichtet werden kann. Die 

station‰re Phase bildet nur einen d¸nnen 

Film (z.B. 0,25 µm) oder eine Beschichtung 

auf der Wand. Eine grˆflere Adsorptionsfl‰che 

erreicht man mit porˆsen 

Beschichtungen. Der Strˆmungswiderstand 

ist geringer als bei den gepackten S‰ulen, so 

kˆnnen wesentlich l‰ngere S‰ulen zum Einsatz kommen (bis 100 m). Bei vergleichbarer 

Trennstufenhˆhe erreicht man dadurch erheblich bessere Trennungen. Allgemein wird die 

Trennung verbessert durch l‰ngere S‰ulen, engere Kapillaren und d¸nnere Filme, wobei man 

aber Nachteile hinsichtlich der S‰ulenkapazit‰t und der Trennungsdauer hinnehmen muss. 

Neben neuerdings wieder eingef¸hrten Edelstahls‰ulen verwendet man in der Regel 

Kapillaren aus "fused silica", einem synthetischen hochreinen Quarzglas, das zum 

mechanischen Schutz mit einem gelblich-braunen Polyimid-‹berzug versehen ist. 

Wide bore S‰ulen nehmen hinsichtlich der Abmessungen und der Trennleistung eine 

Zwischenstellung zwischen gepackten und Kapillar-S‰ulen ein. Mit ihnen kˆnnen alte Ger‰te 

f¸r gepackte S‰ulen aufger¸stet werden. 



STATIONƒRE PHASEN 

Lange Zeit wurden unsystematisch die verschiedensten Materialien in der GC mehr oder 

weniger erfolgreich eingesetzt. Als unpolares Standardmaterial hat sich Squalan bew‰hrt, ein 

Kohlenwasserstoff, der aus Haifischlebertran gewonnen wurde. Heute ist etwas Systematik 

eingekehrt, viele Hersteller verwenden einheitliche Bezeichnungen f¸r die S‰ulenmaterialien, 

obwohl sie aus verst‰ndlichen Gr¸nden nicht alle Einzelheiten der Zusammensetzung und 

Herstellung der Phasen verraten. 

Viele Phasen f¸r die Verteilungschromatographie leiten sich von den Polysiloxanen her, das 

sind Polymere mit prinzipiell folgendem Aufbau: 

R R R R R R R 

| | | | | | | 

� � O � Si� O � Si� O � Si� O � Si� O � Si� O �Si� O �Si� O �� 

| | | | | | | 

R R R R R R R 

Die Reste R sind organische Gruppen, sie bestimmen die chromatographischen Eigenschaften 

der Phase. Es kommen zum Einsatz: 

� Methylgruppen (-CH3, unpolar) 

� Phenylgruppen (-C6H5, etwas polar) 

� Cyanopropyl-Gruppen (-(CH2)3-CN, stark polar) 

Die Tabelle gibt eine ‹bersicht g‰ngiger Phasen: 

Bez. Polarit‰t Tmax Methyl- Phenyl- Cyanopropyl- 

1 unpolar 360 C 

5 unpolar 340 C 

1301 schwach polar 280 C 

20 schwach polar 310 C 

35 mittel polar 300 C 




225 polar 260 C 

2330 stark polar 275 C 

Bei der Herstellung kommen noch weitere Aspekte zur chemischen Struktur dazu, die die S‰ulen oft f¸r einen 

bestimmten Einsatz optimieren: 

� Der Polymerisationsgrad, d.h. die Kettenl‰nge der Molek¸le, 

� der Vernetzungsgrad hat Einfluss auf die Stabilit‰t der Phase, 

� weitere Zus‰tze, 

� die Reinheit der verwendeten Chemikalien, 

� die Art der Aufbringung in der S‰ule (meist als Lˆsung), 

� eine Stabilisierungsbehandlung, bei der chemische Bindungen zwischen Wand und Film entstehen, 

� spezielle Reinigungsprozeduren vor der Auslieferung. 



Wichtige Phasen sind noch die polaren Carbowachse, das sind Polyethylenglykole mit dem 

chemischen Aufbau: 

�� O � CH � CH � O � CH � CH � O � CH � CH � O �� 

F¸r spezielle Zwecke gibt es besondere Phasen wie z.B. 

2 2 2 2 2 2 

� Poly(Trifluoropropyl-Methyl-Siloxan) f¸r Substanzen mit freien Elektronenpaaren, 

� Poly-Carboran-Siloxan mit besonders hoher maximaler Einsatztemperatur (460 C) und 

� permethylierte Cyclodextrine in Poly(dimethylsiloxan) eingebettet zur Trennung von Enantiomeren. 

Feste Adsorbenzien werden haupts‰chlich zur Trennung von Gasen und leicht fl¸chtigen Substanzen eingesetzt, 

z.B. 

� Aluminiumoxid 

� Molekularsiebe 

� Polyvinylbenzol u.a. Polymere 

� graphitierter Rufl (zur Trennung der Blutalkohole) 

SƒULENOFEN 

Die S‰ulentemperatur spielt bei der GC 

eine ungleich wichtigere Rolle als bei den 

fl¸ssigkeitschromatographischen Verfahren. 

Was man dort mit unterschiedlichen mobilen 

Phasen erreichen kann ist in der GC nur mit 

der Temperatursteuerung mˆglich. 

Aus diesem Grund befindet sich die S‰ule in 

einem thermostatisierten Ofen. Die Heizung 

erfolgt elektrisch, ein Ventilator sorgt durch 

eine gleichm‰flige Temperaturverteilung. 

Bei einer isothermen Trennung arbeitet 

man bei konstanter Temperatur, man kann 

aber auch, ‰hnlich der Gradientenmethode 

bei der HPLC, mit einem ansteigenden 

Temperaturprogramm arbeiten. Auch Einspritzblock und Detektor sind beheizt, meist etwas 

hˆher als die S‰ule. 

Alle Gas-Verbindungen m¸ssen unbedingt dicht sein, sonst geht unkontrolliert Gas (und 

damit analytische Information) verloren. F¸r den Einsatz bei wechselnden, hohen 

Temperaturen gibt es spezielle Dichtungen (Ferrules) aus Graphit. 



5.4. DETEKTOREN 

Die Grˆfle des Detektorsignals h‰ngt ab von 

� der Menge der im Detektor befindlichen Substanz, 

� der chemischen Struktur dieser Substanz und 

� der Art und den Einstellungen des verwendeten Detektors. 

D.h. gleiche Mengen unterschiedlicher Substanzen liefern i.d.R. unterschiedliche Mess- 

Signale und gleiche Mengen derselben Substanz erzeugen bei verschiedenen Detektoren 

unterschiedlich grofle Mess-Signale! Die folgenden Detektoren werden in der 

Gaschromatographie benutzt: 

Der W‰rmeleitf‰higkeitsdetektor (TCD = thermal conductivity detector) misst 

Konzentrationen am S‰ulenausgang. Am besten wird er zusammen mit Wasserstoff oder 

Helium als Tr‰gergas eingesetzt, da diese Gase eine besonders hohe W‰rmeleitf‰higkeit 

besitzen und deshalb alle anderen Substanzen besonders gut auffallen. Meist findet man sie 

bei gepackten S‰ulen, f¸r Kapillars‰ulen kˆnnen sie nicht hinreichend miniaturisiert werden. 

Der TCD ist ein Universaldetektor, mit dem man nahezu alle Substanzen nachweisen kann. 

Die Nachweisgrenze liegt bei etwa 1000 pg. 

Beim Flammenionisationsdetektor FID wird das aus der S‰ule auftretende Gas in eine 

Knallgasflamme geleitet. Wenn dabei organische Verbindungen verbrennen, entstehen Ionen 

ñ etwa eines von 1.000.000 Molek¸len wird ionisiert (in der reinen Knallgasflamme selbst 

entstehen kaum Ionen). Zwischen Brenner und einer dar¸ber angebrachten Ringelektrode, an 

denen eine Spannung von einigen 100 V anliegt, flieflt dadurch ein elektrischer Strom. Die 

Nachweisgrenze liegt bei 10 pg. 

Im thermoionischen Detektor (TID) befindet sich eine elektrisch beheizte Silikatperle, die 

Rubidium enth‰lt. Mit stickstoff- oder phosphorhaltigen Substanzen reagiert sie unter Bildung 

von Ionen, die ‰hnlich wie bei FID nachgewiesen werden. Weil mit diesem Detektor bis zu 1 

pg dieser Stoffe nachgewiesen werden kˆnnen, spricht man auch vom Stickstoff- 

Phosphordetektor (NPD). 

Der Elektroneneinfangdetektor (ECD) reagiert empfindlich (1 pg) auf Substanzen, die 

Halogene, Schwefel, Schwermetalle oder Nitrogruppen enthalten. Die Betastrahlung des 

radioaktiven 63 Ni ionisiert das Tr‰gergas (optimal: Helium) und die genannten Verbindungen 

fangen die gebildeten Ionen ein. So kommt es zu einem Einbruch der Leitf‰higkeit, wenn 

entsprechende Substanzen die S‰ule verlassen. Aus elektrischen Gr¸nden arbeitet man mit 

einer gepulsten Gleichspannung, u.a. wird dadurch die Entladung der entstehenden schweren 

Ionen an Stelle der Elektronen vermieden. 

Der flammenphotometrische Detektor (FPD) verbrennt die Probe ‰hnlich wie ein FID in 

einer Knallgasflamme. Dann wird allerdings die Extinktion gemessen, die je nach gew‰hlter 

Wellenl‰nge bis herab zu 10 pg Schwefel, Phosphor oder Zinn anzeigt. 

Ein Massenspektrometer (MS) als Detektor bietet den Vorteil, von den austretenden 

Substanzen weitere analytische Informationen zu erfassen. Den Molek¸len wird so viel 

Energie zugef¸hrt, dass sie in Bruchst¸cke zerfallen, die dann nach der Masse sortiert 

registriert werden. Aus dem Zerfallsmuster kann man R¸ckschl¸sse auf die Struktur der 

Substanz ziehen (GC-MS-Kopplung). 




Unbefriedigende Ergebnisse bei der GC kˆnnen verschiedene Ursachen haben, die man nach 

der H‰ufigkeit einteilen kann: Zuerst kommen Bedienungsfehler, dann untaugliche Proben 

und schliefllich eine falsche, schlechte oder defekte S‰ule sowie Ger‰tefehler. Einige h‰ufige 

Ursachen werden hier ñ nach Symptomen sortiert ñ genannt. 

PEAKS 

KEINE PEAKS 

� Kein Tr‰gergasstrom 

� Detektor ausgeschaltet, FID brennt nicht 

� falsche Einstellungen 

� in falsche S‰ule injiziert, falscher Detektor eingestellt 

� Mikroliterspritze defekt 

� Septum undicht 

� Temperatur des Einspritzblocks zu niedrig 

� Integrator oder Elektronik defekt 

ZU WENIGE PEAKS 

� Probe zu verd¸nnt / zu wenig Probe eingespritzt 

� Leck an Septum oder S‰ule 

� falsche Temperatureinstellungen 

� falsche Flussrate des Gases 

� Adsorption im Inlet Liner 

� falsche S‰ule 

ZU VIELE PEAKS 

� doppelte Einspritzung 

� Verunreinigungen der Probe, des Lˆsungsmittels, des Probenbeh‰lters 

� Peaks von voriger Analyse 

� Adsorption und verzˆgerte Desorption der Probe 

� Mikroliterspritze verschmutzt 


� Reaktionen der Probe (Vorbereitung, Zersetzung auf der S‰ule) 

ZU KLEINE PEAKS 

� schlechte Einspritztechnik 


� Mikroliterspritze defekt 


� Einspritzblock zu kalt 

� Adsorption der Probe im Ger‰t 

TAILING (STEILER ANSTIEG, LANGSAMER ABFALL) 

� S‰ule oder Einspritzblock zu kalt 

� zwei nicht getrennt Peaks 

� Adsorption 



LEADING (LANGSAMER ANSTIEG, STEILER ABFALL) 

� S‰ule ¸berladen 

� zwei nicht getrennte Peaks 

� Probe kondensiert oder zersetzt sich 

DOPPELTE PEAKS 

� Detektor massiv ¸bersteuert 

� Probe verdampft vor der Injektion 

VERFORMTE PEAKS 

� Peakspitze falsch: Detektor ¸bersteuert 

� Peakspitze falsch: falsche Einstellungen 

� Knicke am Peakfufl: Basislinie falsch eingestellt 

BREITER L÷SUNGSMITTELPEAK 

� normal bei stark verd¸nnten Proben 


� Totvolumen 


� Reaktionen des Lˆsungsmittels mit S‰ule oder Detektor 

GRUNDLINIE 

NICHT AUF NULL 

� ECD noch nicht betriebsbereit 

� zu geringer Gasfluss 

� S‰ulentemperatur zu hoch 

� Kontamination 


DRIFT 

� bei hohen Temperaturen: Gasfluss temperaturabh‰ngig 

� Leck 

� Kontamination 

� S‰ulenbluten 


INSTABILE GRUNDLINIE, RAUSCHEN 

� Kontamination von S‰ule, Einspritzblock oder Detektor 

� Leck 


� schlechte Temperaturkontrolle 

� schwankende Gasdr¸cke 

� Spikes: elektronische Probleme und Verunreinigungen 

RETENTIONSZEITEN FALSCH 

� zu viel Probe eingespritzt 

� S‰ulentemperatur falsch 

� Gasfluss zu falsch eingestellt 

� Leck 

� S‰ule defekt 



REPRODUZIERBARKEIT 




� Adsorption der Probe 

� schlechte Trennung der Peaks 

WEITERGEHENDE FEHLERSUCHE 

F¸r eine Fehlersuche bis in alle Details sollten eine Reihe von Hilfsmitteln zur Verf¸gung stehen: eine 

‰quivalente S‰ule zum Austausch, eine neue Mikroliterspritze, Hilfen zur Lecksuche, Ersatzsepten und 

-dichtungen, Detektorreiniger, ein Thermometer, ein Gasfluss-Messger‰t, ein Austauschintegrator und das 

Instrumenten-Handbuch. Mit einem geeigneten Plan kann man sich dann an die Arbeit machen ... 



6. GLOSSAR 

A 

Analytische Chemie 

Anwendungsorientierter Bereich der Chemie, der die Frage nach der Zusammensetzung 

von reinen Substanzen und Gemischen untersucht. 

Analytik 

kurz f¸r Analytische Chemie. 

C 

Chromatogramm 

Ergebnis einer chromatographischen Trennung. Bei der Planarchromatographie die 

getrocknete station‰re Phase, bei der S‰ulenchromatographie die Aufzeichnung des 

(zeitabh‰ngigen) Detektorsignals. 

D 

Destillation 

Verfahren zur Abtrennung einer Fl¸ssigkeit aus einer Mischung. Die Mischung wird 

bis zum Sieden erhitzt und die aufsteigenden D‰mpfe durch Abk¸hlen wieder 

verfl¸ssigt. Leicht siedende Bestandteile kˆnnen so von festen oder bei hˆheren 

Temperaturen siedenden Substanzen abgetrennt werden. 

D¸nnschichtchromatographie 

Verfahren der Planarchromatographie, bei der als station‰re Phase eine d¸nne Schicht 

auf einem inerten Tr‰germaterial dient. 

E 

Enantiomer 

Manche organischen Molek¸le sind mit ihrem Spiegelbild nicht identisch, solche 

Molek¸lpaare bezeichnet man als Enantiomere. Sie unterscheiden sich in vielen 

physikalischen und chemischen Eigenschaften nicht, wichtige Ausnahmen sind die 

Reaktivit‰t gegen¸ber anderen solchen Stoffen und die optische Aktivit‰t. Bei 

letzteren handelt es sich um die F‰higkeit, die Polarisationsebene des Lichtes zu 

drehen, die beiden Enationeren drehen um den gleichen Betrag, aber in entgegen 

gesetzte Richtung. In der Biochemie kommt meist nur ein Enantiomer vor, sein 

Spiegelbild h‰tte ganz andere Stoffwechseleigenschaften. 

Extinktion 

Messgrˆfle in der Spektroskopie, die oft einen einfachen Zusammenhang mit der 

Zusammensetzung einer Probe aufweist. genauer: der negative dekadische 

Logarithmus der Transmission. 

Extraktion 

Trennverfahren, bei dem bestimmte Bestandteile mit einem fl¸ssigen 

Extraktionsmittel aus einer fl¸ssigen oder festen Probe herausgelˆst werden. Bei einer 

fl¸ssigen Probe d¸rfen sich die beiden Fl¸ssigkeiten nicht mischen, in diesem Fall 

bedient man sich des NERNST'schen Verteilungsgleichgewichts. 



F 

Filtration 

Trennverfahren, bei dem i.d.R. feste Bestandteile von einer Fl¸ssigkeit getrennt 

werden. Die Porenweite des Filters legt sie Grˆfle der zur¸ck gehaltenen Teilchen fest 

(s.a. Ultrafiltration). Mit entsprechendem Filter kˆnnen auch Gemenge von zwei nicht 

mischbaren Fl¸ssigkeiten (z.B. Fetttrˆpfchen in Milch) getrennt werden. 

Fluoreszenz 

Manche Stoffe strahlen unter UV-Licht sichtbares Licht ab. Diesen Vorgang 

bezeichnet man als Fluoreszenz. Das Papier der Banknoten enth‰lt fluoreszierende 

Fasern, ein wichtiges Indiz f¸r die Echtheit der Scheine. 

G 

Gel 

Lˆsung einer makromolekularen Substanz, deren Konzentration so hoch ist, dass die 

gelˆsten Molek¸le sich zu einem schwammartigen Ger¸st verbinden, in dessen 

Hohlr‰umen sich das Lˆsungsmittel befindet. Dadurch haben Gele eine relativ feste 

Konsistenz. 

Glasfritte 

Glaspulver kann durch Erw‰rmen oberfl‰chlich zum Schmelzen gebracht werden, die 

Glaskˆrner backen dadurch zusammen. Es entsteht ein porˆses Material (Glasfritte), 

das im Labor z.B. als Filter eingesetzt werden kann. 

H 

Henry, William 

1774-1836, englischer Arzt und Mitarbeiter von John Dalton. Er entdeckte das 

HENRYsche Gesetz. 

hydrophil 

= "wasserliebend", sich gut mit Wasser mischend, dann oft lipophob. 

hydrophob 

="wasserfliehend", sich nicht mit Wasser mischend, dann oft lipophil. 

I 

inert 

K 

Ein Material, das mit den Substanzen, mit denen es zusammenkommt, keine 

chemischen Reaktionen eingeht, bezeichnet man als inert. 

Knallgas 

explosive Mischung von Wasserstoff und Sauerstoff, kann aber mit einem geeigneten 

Brenner ruhig brennen. 

Komponente 

Bestandteil 

L 

lipophil 

= "fettliebend", gut mit Fetten mischbar, dann oft hydrophob. 

lipophob 

= "fettfliehend", nicht mit Fetten mischbar, dann oft hydrophil. 



M 

Massenanteil 

Gehaltsangabe, definiert als Masse der Komponente geteilt durch die Masse der 

Mischung, abgek¸rzt mit w. 

Massenkonzentration 

Gehaltsangabe, definiert als Masse der Komponente geteilt durch das Volumen der 

Mischung, abgek¸rzt mit � * . 

Massenwirkungsgesetz 

Zusammenhang zwischen den Konzentrationen bei einem chemischen Gleichgewicht. 

N 

Nernst, Walter 

deutscher Physikochemiker (1864-1941), arbeitete u.a. im Bereich der 

Thermodynamik (3. Hauptsatz), der Elektrochemie (Nernst-Gleichung) und der 

Spektroskopie (Nernst-Stift als IR-Lichtquelle). F¸r die Chromatographie ist sein Satz 

¸ber Verteilungsgleichgewichte wichtig. 

P 

Papierchromatographie 

veraltetes Verfahren der Planarchromatographie, bei der ein spezielles Filterpapier als 

station‰re Phase dient. 

Phase 

Homogene Mischung (mit einer Komponente auch als reiner Stoff). Heterogene 

Mischungen bestehen aus mehreren Phasen (z.B. Milch = w‰ssrige Molke und 

Fetttrˆpfchen, Nebel = Luft und kleinste Wassertrˆpfchen). 

Planarchromatographie 

chromatographisches Verfahren, bei dem die d¸nne, fl‰chenfˆrmige station‰re Phase 

durch Kapillarkr‰fte von der mobilen Phase durchstrˆmt wird. Die veraltete 

Papierchromatographie ist in der Praxis durch die D¸nnschichtchromatographie ersetzt 

worden. 

Q 

Qualitative Analyse 

Chemische Untersuchung einer Substanz unter der Fragestellung: Was ist in der Probe 

enthalten? 

Quantitative Analyse 

Chemische Untersuchung einer Substanz unter der Fragestellung: Wie viel von einer 

bestimmten Substanz ist in der Probe enthalten? 

S 

Spektrometrie 

Spektroskopische Verfahren mit dem Schwerpunkt auf der Messung der Extinktion 

bzw. Absorption. 



Spektroskopie 

Untersuchung der energieabh‰ngigen Wechselwirkung zwischen Probe und Strahlung. 

‹blich sind neben sichtbarem Licht auch IR- (Infrarot-) und UV- (Ultraviolett-) 

Strahlung. Die Energie der Strahlung variiert hierbei mit der ihrer Wellenl‰nge. Bei 

der Emissions-Spektroskopie sendet die Probe selber Strahlung aus. Absorptions- 

Spektrometer messen wie viel Licht von einer Probe durchgelassen wird, die 

Extinktion zeigt dabei oft eine einfache Abh‰ngigkeit von der Zusammensetzung der 

Probe. 

Stoffmengenkonzentration 

Gehaltsangabe, definiert als Stoffmenge der Komponente geteilt durch das Volumen 

der Mischung, abgek¸rzt mit c. 

U 

Ultrafiltration 

Filtrationsverfahren mit so engen Poren, das sogar Molek¸le bis zu einer bestimmten 

Grˆfle (oft Proteine) zur¸ckgehalten werden. 

Ultrazentrifugation 

Spezielles Verfahren der Zentrifugation. Bei Drehzahlen ¸ber 50000 min -1 kˆnnen 

sogar feinste Teilchen (bis hin zu groflen Molek¸len) abgetrennt werden. 

Ultrazentrifugen erfordern besondere Sicherheitsmassnahmen (Rotorbruch, 

Erw‰rmung durch Luftreibung). 

Z 

Zentrifugation 

Verfahren zur Auftrennung heterogener Gemische (i.d.R. Feststoffe in einer 

Fl¸ssigkeit) durch Sedimentation auf Grund unterschiedlicher Dichte. Bei geringer 

Korngrˆfle kann die Sedimentation durch die Schwerkraft allein zu lange dauern, sie 

kann durch eine mehr tausendfach grˆflere Zentrifugalkraft ersetzt werden. s.a. 

Ultrazentrifugation. 



7. LITERATUR UND LINKS 

B‹CHER 

K. Cammann, Instrumentelle Analytische Chemie, Heidelberg, 2001 

C.F.Poole, S.K.Poole, Chromatography today, Amsterdam, 1991 

G. Schwedt, Chromatographische Trennmethoden, Stuttgart, 1994 

G. Schwedt, Taschenatlas der Analytik, Stuttgart, 1996 

H.H. Willard u.a., Instrumental Methods of Analysis, Belmont, 1988 

A. Wollrab, Chromatographie, Kˆln, 1991 

diverse Schriften der Hersteller 

HERSTELLER 

MACHEREY-NAGEL E-Mail: sales@mn-net.com 

Postfach 10 13 52 Internet: http://www.macherey-nagel.com/ 

D-52313 D¸ren 

Phenomenex E-Mail: Anfrage@Phenomenex.com 

Zeppelinstr.5 Internet: http://www.phenomenex.com/ 

D-63741 Aschaffenburg 

RESTEK GERMANY E-Mail: Info@RestekGmbH.de 

Schaberweg 23 Internet: http://www.restekcorp.com/ 

D-61348 Bad Homburg 

Sigma-Aldrich Chemie E-Mail: deorders@eurnotes.sial.com 

Gesch‰ftsbereich Supelco Internet: http://www.sigmaaldrich.com/ 

Brands/Supelco_Home.html 

Eschenstr. 5 

D-82024 Taufkirchen 

Varian Deutschland E-Mail: de.info@varianinc.com 

Alsfelder Strasse 6 Internet: http://www.varianinc.com/ 

D-64289 Darmstadt 

VWR International (ehemals Merck) E-Mail: chrom@de.vwr.com 

Frankfurter Str. 250 Internet: http://de.vwr.com/ 

D-64293 Darmstadt 



LINKS 

Chemie-Portalseite www.chemie.de 

Chemie-Linkseite von Rolf Claessen 

Analytik Portalseite www.analytik.de 

Analytical Links and Resources by Carvalhas & Tavares (sehr bunt, aber ergiebig) 

Encyclopedia of Analytical Instrumentation by Brian M. Tissue, 

Chemical Separations by James K. Hardy, University of Akron, Ohio (USA) 

HPLC Onlinebook by Y. Kazakevich, Seton Hall University, New Jersey (USA) 

Glossary of Chromatographic Terms 

LC-GC Europe engl. Zeitschrift zur Chromatographie mit Onlineausgabe 

Fehlersuche GC mit gepackter S‰ule (engl., Supelco Bulletin 792) 

Fehlersuche Kapillar-GC (engl., Supelco Bulletin 853) 

Fehlersuche HPLC (engl., Supelco Bulletin 826) 

8. IMPRESSUM 

COPYRIGHT 

1. Das Urheberrecht f¸r diese Seiten (Text, Abbildungen, Gestaltung) liegt bei 

Dr. Jˆrg Peter Ewald und Wolfgang Woll. 

2. Die Nutzung durch Einzelpersonen und Weitergabe einzelner Kopien ist erlaubt und 

erw¸nscht, wir bitten jedoch um eine R¸ckmeldung. 

3. Jede Nutzung in grˆflerem Umfang (Unterricht, Weitergabe, Spiegelung auf Servern 

u.‰.) erfordert in jedem Einzelfall unsere Zustimmung. 

4. Sollten einzelne Punkte dieser Erkl‰rung rechtlich nicht zul‰ssig sein, gelten die 

¸brigen Punkte weiterhin und der strittige Punkt in der gesetzlich zul‰ssigen Weise, 

die der hier dargestellten Absicht am n‰chsten kommt. 

5. Kontaktmˆglichkeiten sind unten genannt. 

WARENZEICHEN 

Diese Seite dient zu Unterrichtszwecken, nicht zur Werbung. Deshalb sind gesch¸tzte 

Warenzeichen u.‰. nicht besonders gekennzeichnet. Ein fehlender Hinweis auf solche 

Schutzrechte ist deshalb nicht als Indiz f¸r das Fehlen eines solchen Schutzes zu verstehen. 

LINKS 

Das Landgericht Hamburg hat am 12. Mai 1998 entschieden, dass man f¸r die Inhalte von 

gelinkten Web-Sites sich ggf. selbst zu verantworten hat. Dies kann nur dadurch verhindert 

werden, indem man sich laut Hamburger-Landgericht ausdr¸cklich von deren Inhalten 

distanziert. 

Deshalb distanzieren wir uns von den Inhalten der hier verlinkten Seiten. Sollten Sie durch die 

Links zu rechtswidrigen Seiten gelangen bitten wir um einen entsprechenden Hinweis an uns. 

Vielen Dank f¸r Ihr Verst‰ndnis. 



HAFTUNGSAUSSCHLUSS 

Da wir diese Seiten kostenlos ñ und nur zu Informationszwecken ñ anbieten, lehnen wir jede 

Haftung f¸r Sch‰den, die auf die Befolgung der hier gegebenen Ratschl‰ge zur¸ckgef¸hrt 

werden, ab. Bitte beachten Sie folgende Hinweise f¸r chemische Untersuchungen. 

1. Befolgen Sie die Anleitungen der Ger‰tehersteller, die in Betriebsanleitungen und Handb¸chern 

niedergelegt sind. Evtl. gibt es zus‰tzliche Betriebsanweisungen o.‰. des Labors. Nehmen Sie keine 

eigenm‰chtigen Eingriffe vor. 

2. Beachten Sie die Unfallverh¸tungsvorschriften im Labor. 

3. Chemikalien kˆnnen gesundheitliche und andere Sch‰den verursachen. Sorgen Sie deshalb f¸r eine 

sachgerechten Umgang mit den entsprechenden Stoffen. 

4. Halten Sie sich streng an die Strahlenschutzvorschriften (ECD), eine behˆrdliche Genehmigung ist 

f¸r den Umgang mit radioaktiven Quellen erforderlich. 

5. Druckgase sind nur bei sachgem‰fler Handhabung sicher, beachten Sie die entsprechenden 

Vorschriften. 

6. Elektrischer Strom ist gef‰hrlich, sichern Sie sich den Vorschriften entsprechend bei Arbeiten an 

elektrischen Ger‰ten ab. 

7. Chemische Analysen sind Arbeiten, die nur von ausgebildeten Fachleuten richtig durchgef¸hrt und 

interpretiert werden kˆnnen. Nur entsprechende statistische Kontrollen garantieren zuverl‰ssige 

Ergebnisse. 

ANSCHRIFT 

Snail-Mail Dr. J. P. Ewald / W. Woll 

NTK Landau 

Kˆnigstr. 18 

D-76829 Landau 

E-Mail E-Mail: Ewald@NTK-Landau.de

2.3. AUSWERTUNG - Chromatographie - Naturwissenschaftliches ...

Sie wollen auch ein ePaper? Erhöhen Sie die Reichweite Ihrer Titel.

Template löschen?

Als Template speichern?