Charakterisierung von pektinolytischen Enzymen der Zuckerrübe
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9 und einer Wellenlänge <strong>von</strong> 276 nm spektralphotometrisch nachweisbar sind. Über eine<br />
Eichgerade kann mittels <strong>der</strong> gemessenen Extinktion die Menge an reduzierenden Kohlenwasserstoffen<br />
bestimmt werden. Beim Einsatz dieser Methode zu Bestimmung <strong>der</strong> Aktivität <strong>der</strong><br />
exo-Polygalacturonase wird die Tatsache genutzt, dass es durch die Aktivität <strong>der</strong> exo-<br />
Polygalacturonase zur Freisetzung <strong>von</strong> reduzierenden Gruppen bzw. reduzierenden Kohlenwasserstoffen<br />
kommt.<br />
Eine Zunahme <strong>der</strong> reduzierenden Gruppen konnte nur in einem sehr engen pH-Bereich nachgewiesen<br />
werden und auch in diesem Bereich tendiert die Zunahme noch gegen Null. Es ist<br />
somit recht wahrscheinlich, dass das Enzym in <strong>der</strong> <strong>Zuckerrübe</strong> (Belize) nicht o<strong>der</strong> nur in verschwindend<br />
geringen Mengen vorkommt. Die Zunahme <strong>der</strong> reduzierenden Gruppen in dem<br />
engen pH-Bereich ist wahrscheinlich durch die Aktivität <strong>der</strong> endo-Polygalacturonaseaktivität<br />
zustande gekommen. Da eine Zunahme <strong>der</strong> reduzierenden Gruppen unter Standardbedingungen,<br />
bei pH 5,5 und 0,4 mM CaCl2 im Acetatpuffer, kaum nachgewiesen werden konnte, wurde<br />
auf die Bestimmung eines NaCl-Optimums verzichtet. Als Fehlereinfluss ist auch das bereits<br />
erwähnte schlechte Löseverhalten des Natriumsalzes <strong>der</strong> Polygalacturonsäure zu nennen,<br />
das als Substrat für die exo-Polygalacturonase eingesetzt wurde.<br />
Die Möglichkeit das Problem durch die Verwendung <strong>von</strong> Pektin als Substrat zu beheben entfällt,<br />
da es durch das ebenfalls zugesetzte Calcium, das die Funktion <strong>der</strong> exo-Polygalacturonase<br />
unterstützt, zur Bildung <strong>von</strong> Calciumbrücken zwischen den Pektinmolekülen kommen<br />
könnte, die so die Aktivität <strong>der</strong> exo-Polygalacturonase einschränken würden.<br />
Als problematisch ist auch die Tatsache zu nennen, dass gerade im niedrigen pH-Bereich die<br />
Extinktionen <strong>der</strong> Enzymblindwerte größer sind als die Extinktionen <strong>der</strong> Proben. Es ist möglich,<br />
dass dieses Problem durch eine Extraktherstellung mittels Ammoniumsulfatfällung behoben<br />
werden könnte, da so <strong>der</strong> Gehalt an Polysacchariden im Enzymextrakt stark gesenkt<br />
werden könnte.<br />
Die Bestimmung <strong>der</strong> endo-Polygalacturonaseaktivität mittels Kapillarviskosimetrie stellte<br />
sich in Bezug auf den Enzymextrakt, <strong>der</strong> aus <strong>Zuckerrübe</strong>n gewonnen wurde, als ein eher ungünstiges<br />
Verfahren dar. Trotz <strong>der</strong> Tatsache, dass unter Standardbedingungen (pH 5,5) eine<br />
Aktivität <strong>von</strong> 0,083 Einheiten pro g <strong>Zuckerrübe</strong> nachgewiesen werden konnte, ist in diesem<br />
Zusammenhang die Wahl eines an<strong>der</strong>en Verfahrens zu prüfen. Gegebenenfalls wäre es auch<br />
möglich das Verfahren nach Honda et al. so zu modifizieren, dass die Aktivität <strong>der</strong> endo-<br />
Polygalacturonase damit bestimmt werden kann. Denkbar wäre dabei <strong>der</strong> Austausch des Acetatpuffers<br />
gegen den Citratpuffer. Außerdem könnte die Beimengung <strong>von</strong> Calcium zum Puffer<br />
entfallen. Als Substratlösung könnte sogar Pektinlösung verwendet werden. Dabei könnte