Charakterisierung von pektinolytischen Enzymen der Zuckerrübe

47
9 und einer Wellenlänge von 276 nm spektralphotometrisch nachweisbar sind. Über eine
Eichgerade kann mittels der gemessenen Extinktion die Menge an reduzierenden Kohlenwasserstoffen
bestimmt werden. Beim Einsatz dieser Methode zu Bestimmung der Aktivität der
exo-Polygalacturonase wird die Tatsache genutzt, dass es durch die Aktivität der exo-
Polygalacturonase zur Freisetzung von reduzierenden Gruppen bzw. reduzierenden Kohlenwasserstoffen
kommt.
Eine Zunahme der reduzierenden Gruppen konnte nur in einem sehr engen pH-Bereich nachgewiesen
werden und auch in diesem Bereich tendiert die Zunahme noch gegen Null. Es ist
somit recht wahrscheinlich, dass das Enzym in der Zuckerrübe (Belize) nicht oder nur in verschwindend
geringen Mengen vorkommt. Die Zunahme der reduzierenden Gruppen in dem
engen pH-Bereich ist wahrscheinlich durch die Aktivität der endo-Polygalacturonaseaktivität
zustande gekommen. Da eine Zunahme der reduzierenden Gruppen unter Standardbedingungen,
bei pH 5,5 und 0,4 mM CaCl2 im Acetatpuffer, kaum nachgewiesen werden konnte, wurde
auf die Bestimmung eines NaCl-Optimums verzichtet. Als Fehlereinfluss ist auch das bereits
erwähnte schlechte Löseverhalten des Natriumsalzes der Polygalacturonsäure zu nennen,
das als Substrat für die exo-Polygalacturonase eingesetzt wurde.
Die Möglichkeit das Problem durch die Verwendung von Pektin als Substrat zu beheben entfällt,
da es durch das ebenfalls zugesetzte Calcium, das die Funktion der exo-Polygalacturonase
unterstützt, zur Bildung von Calciumbrücken zwischen den Pektinmolekülen kommen
könnte, die so die Aktivität der exo-Polygalacturonase einschränken würden.
Als problematisch ist auch die Tatsache zu nennen, dass gerade im niedrigen pH-Bereich die
Extinktionen der Enzymblindwerte größer sind als die Extinktionen der Proben. Es ist möglich,
dass dieses Problem durch eine Extraktherstellung mittels Ammoniumsulfatfällung behoben
werden könnte, da so der Gehalt an Polysacchariden im Enzymextrakt stark gesenkt
werden könnte.
Die Bestimmung der endo-Polygalacturonaseaktivität mittels Kapillarviskosimetrie stellte
sich in Bezug auf den Enzymextrakt, der aus Zuckerrüben gewonnen wurde, als ein eher ungünstiges
Verfahren dar. Trotz der Tatsache, dass unter Standardbedingungen (pH 5,5) eine
Aktivität von 0,083 Einheiten pro g Zuckerrübe nachgewiesen werden konnte, ist in diesem
Zusammenhang die Wahl eines anderen Verfahrens zu prüfen. Gegebenenfalls wäre es auch
möglich das Verfahren nach Honda et al. so zu modifizieren, dass die Aktivität der endo-
Polygalacturonase damit bestimmt werden kann. Denkbar wäre dabei der Austausch des Acetatpuffers
gegen den Citratpuffer. Außerdem könnte die Beimengung von Calcium zum Puffer
entfallen. Als Substratlösung könnte sogar Pektinlösung verwendet werden. Dabei könnte