Charakterisierung von pektinolytischen Enzymen der Zuckerrübe

• Zusatzgerät: TU1=TEZ 180
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- Heizplatte mit Magnetrührer
- Stoppuhr
- Enzymextrakt
- Citruspektin (Veresterungsgrad 70 – 75 %, Cargill)
- Citratpuffer verschiedener pH-Werte nach Gomori
3.5.2 Durchführung Rotationsviskosimetrie
Als Substrat für diesen Versuch dient eine 0,4 %ige Pektinlösung, die wie unter 4.4.2 beschrieben
hergestellt wurde.
Zur Bestimmung der dynamischen Viskosität wurde ein Messmodus erstellt, der sich an das
Verfahren zur Bestimmung der endo-Polygalacturonaseaktivität mittels Kapillarviskosimetrie
anlehnt. Aus diesem Grunde wurden 7 Messabschnitte definiert. Der erste Messabschnitt, der
10 Sekunden andauerte, diente dazu die Scheerrate von 30 Reziproksekunden einzustellen. In
dem darauf folgenden Messabschnitt, der 180 Sekunden umfasste, wurde eine Zehnfachbestimmung
(10 Messpunkte á 18 Sekunden) der Viskosität bei 30 Reziproksekunden vorgenommen.
Die Dauer des zweiten Abschnittes wurde mit 180 Sekunden gewählt, da dies in
etwa der Zeit entspricht, die das definierte Volumen des Reaktionsgemisches benötigt, um die
Kapillare im Kapillarviskosimeter zu durchströmen. Im dritten Messabschnitt, der wiederum
10 Sekunden andauerte, wurde die Scheerrate von 30 Reziproksekunden auf 0 Reziproksekunden
heruntergefahren. In den folgenden vierten Messabschnitt, der 580 Sekunden umfasste,
wurde das Reaktionsgemisch nicht gescheert. Im fünften Messabschnitt wurde wieder innerhalb
von 10 Sekunden die Scheerrate von 30 Reziproksekunden eingestellt. Die Messung
der Viskosität erfolgte im sechsten 180 Sekunden andauernden Abschnitt als Zehnfachbestimmung
(10 Messpunkte á 18 Sekunden). Der folgende siebente Abschnitt diente wiederum,
um die Scheerrate von 30 Reziproksekunden auf 0 Reziproksekunden herunterzufahren.
Vor Beginn der Messung wurden sowohl, das Viskosimeter, als auch die Messzelle und der
Rotationszylinder bei 30 °C temperiert. Das Reaktionsgemisch bestand aus 20 ml Substrat
und 4 ml Enzymextrakt. Bei dem Zusammenführen von Enzymextrakt und Substrat wurde
eine Stoppuhr betätigt. Das Reaktionsgemisch wurde in einem Becherglas gründlich umgerührt
und dann bis zur Markierung in den Messbecher eingefüllt. Dieser wurde dann ins Gerät
eingespannt und der Messzylinder in die dafür vorgesehene Kupplung eingesetzt. Anschließend
wurde das Gerät in Messposition gefahren. Die Messung wurde drei Minuten nach dem
Vereinigen von Enzymextrakt und Substrat gestartet.