Charakterisierung von pektinolytischen Enzymen der Zuckerrübe

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mens von entionisiertem Wasser, die als tw bezeichnet wurde. Aus den drei Auslaufzeiten
wurde wie bereits von Ewest (2009) und Meurer (1991) der Kehrwert einer spezifischen Vis-
kosität nach der Formel Nummer 6 berechnet.
1
Δ
η
spez
tw
=
t − t
1
w
tw
−
t − t
ηspez : spezifische Viskosität
0
w
(6)
tW: Durchlaufzeit von reinem Wasser
t0: Durchlaufzeit der Reaktionslösung bei der 1. Messung (nach 3 Minuten Einwirkzeit)
t1: Durchlaufzeit der Reaktionslösung bei der 2. Messung ( 10 Minuten nach t0)
Eine endo-Polygalacturonaseeinheit entspricht der Menge Enzym, die Δ 1/ηspez. einer Polyga-
lacturonsäurelösung in 10 Minuten um 0,001 Einheiten senkt (Ewest, 2009). Bei der Nutzung
einer Pektinlösung als Substrat wurde sowohl von Meurer (1991) als auch von Ewest (2009)
bei der Berechnung der endo-Polygalacturonaseeinheiten die Pektinlösung mit der Polygalacturonsäurelösung
gleichgesetzt.
Um zu prüfen, ob die Viskositätserniedrigung durch die endo-Polygalacturonase oder durch
die exo-Polygalacturonase verursacht wird kann man sich der Comparison ratio methode von
Tam (1983) bedienen, bei der die bestimmten CR-Werte zwischen 3 und 11,5 liegen sollen,
um nachzuweisen, dass es sich um die Aktivität einer endo-Polygalacturonase handelt. Liegen
die CR-Werte deutlich unter 3, so handelt es sich um die Aktivität einer exo-
Polygalacturonase.
3.4.1 Geräte und Materialien Kapillarviskosimetrie
- Ubbelohde Kapillarviskosimeter
- Glaskapillare der Firma Schott Typ 53210/I (K = 0,009651 mm²/s²)
- Steuereinheit AVS 350 (Schott)
- Wasserbad mit Thermostaten (T = 30°C)
- Pipetten
- Heizplatte mit Magnetrührer
- Enzymextrakt aus Zuckerrüben
- Citruspektin (Veresterungsgrad 70-75 %, Cargill)
- Citrat-Phosphatpuffer (pH = 5,5 nach GOMORI, 1955)