Charakterisierung von pektinolytischen Enzymen der Zuckerrübe
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senkt wird, als die einer Na-Polygalacturonatlösung, was bedeutet, dass geringere Enzymak-<br />
tivitäten erfassbar sind. Apfelpectin hingegen ist ungeeignet als Substrat, da es laut Meurer<br />
(1991) erst zu einer Zunahme <strong>der</strong> Viskosität führt, was an dem Abbau des stark verzweigten<br />
Apfelpektins zu langen fadenförmigen Molekülbruchstücken liegen soll, die dann erst an-<br />
schließend zu kürzeren Molekülen gespalten werden, was sich dann auch in einer Viskositäts-<br />
abnahme nie<strong>der</strong>schlägt.<br />
Unter Verwendung eines Enzymextraktes ist es sehr wahrscheinlich, dass auch exo-<br />
Polygalacturonasen auf die Pektinlösung einwirken und somit ebenfalls einen Einfluss auf die<br />
Viskosität haben. Um dies zu vermeiden, verwendet Meurer (1991) einen Citrat-<br />
Phosphatpuffer, da dieser die Aktivität <strong>der</strong> exo-Polygalacturonase vollständig hemmt. Dies<br />
könnte an <strong>der</strong> Tatsache liegen, dass die Citronensäure als Komplexbildner fungiert und beispielsweise<br />
Ca-Ionen bindet, die als Co-Faktoren fungieren können. Diese Vermutung wird<br />
untermauert durch die Feststellung Meurers (1991), dass sich Calciumchlorid in geringen<br />
Mengen stimulierend auf die Aktivität <strong>der</strong> exo-Polygalacturonase auswirkt.<br />
Zu beachten bei <strong>der</strong> Untersuchung <strong>der</strong> endo-Polygalacturonase ist auch die Tatsache, dass das<br />
Enzym das Substrat nur hydrolysieren kann, wenn es Stellen gibt, an denen das Pektin entestert<br />
ist. Somit ist es sehr wahrscheinlich, dass die Aktivität <strong>der</strong> Pektinesterase sukzessiv auf<br />
die Aktivität <strong>der</strong> endo-Polygalacturonase wirkt. Aus dieser Sicht wäre die Verwendung <strong>von</strong><br />
Polygalacturonsäure als Substrat vorteilhaft, da sie bereits vollständig bzw. so gut wie vollständig<br />
entestert ist. Aus den bereits genannten Gründen wird jedoch Citruspectin verwendet.<br />
So wurde für alle Messungen eine 0,4%ige Citruspectinlösung als Substrat verwendet, wie sie<br />
bereits <strong>von</strong> Ewest (2009) und Meurer (1991) verwendet wurde. Als Messinstrument diente ein<br />
Ubbelohde Viskosimeter, das mit einer elektronischen Steuereinheit (AVS 350) <strong>der</strong> Firma<br />
Schott ausgestattet war. Die Kapillare war ebenfalls <strong>von</strong> <strong>der</strong> Firma Schott, trug die Typenbezeichnung<br />
53210/I und hatte die Konstante K = 0,009651 mm 2 /s 2 . Die Probe setzte sich aus<br />
12,5 ml Pektinlösung und 2,5 ml Enzymextrakt zusammen und wurde vor dem Einfüllen in<br />
die Kapillare gemischt. Die befüllte Kapillare wurde dann an die Steuereinheit angeschlossen<br />
und in das Wasserbad gestellt und bei 30 °C temperiert. Die erste Messung erfolgte 3 Minuten<br />
nach <strong>der</strong> Vereinigung <strong>von</strong> Substrat und Enzymextrakt. Dem Enzym und dem Substrat wurde<br />
somit Gelegenheit gegeben, sich zu akklimatisieren und bereits einzuwirken. Das Messen<br />
erfolgte durch die beiden Lichtschranken, über die die Zeit gestoppt wurde, die ein definiertes<br />
Volumen <strong>der</strong> Lösung benötigte, um durch eine Kapillare auszulaufen und die als t0 bezeichnet<br />
wurde. Nach 10 weiteren Minuten erfolgte eine weitere Messung, bei <strong>der</strong> erneut die Durchlaufzeit<br />
t1 bestimmt wurde. Ebenfalls bestimmt wurde die Auslaufzeit eines definierten Volu-