Charakterisierung von pektinolytischen Enzymen der Zuckerrübe

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senkt wird, als die einer Na-Polygalacturonatlösung, was bedeutet, dass geringere Enzymak-
tivitäten erfassbar sind. Apfelpectin hingegen ist ungeeignet als Substrat, da es laut Meurer
(1991) erst zu einer Zunahme der Viskosität führt, was an dem Abbau des stark verzweigten
Apfelpektins zu langen fadenförmigen Molekülbruchstücken liegen soll, die dann erst an-
schließend zu kürzeren Molekülen gespalten werden, was sich dann auch in einer Viskositäts-
abnahme niederschlägt.
Unter Verwendung eines Enzymextraktes ist es sehr wahrscheinlich, dass auch exo-
Polygalacturonasen auf die Pektinlösung einwirken und somit ebenfalls einen Einfluss auf die
Viskosität haben. Um dies zu vermeiden, verwendet Meurer (1991) einen Citrat-
Phosphatpuffer, da dieser die Aktivität der exo-Polygalacturonase vollständig hemmt. Dies
könnte an der Tatsache liegen, dass die Citronensäure als Komplexbildner fungiert und beispielsweise
Ca-Ionen bindet, die als Co-Faktoren fungieren können. Diese Vermutung wird
untermauert durch die Feststellung Meurers (1991), dass sich Calciumchlorid in geringen
Mengen stimulierend auf die Aktivität der exo-Polygalacturonase auswirkt.
Zu beachten bei der Untersuchung der endo-Polygalacturonase ist auch die Tatsache, dass das
Enzym das Substrat nur hydrolysieren kann, wenn es Stellen gibt, an denen das Pektin entestert
ist. Somit ist es sehr wahrscheinlich, dass die Aktivität der Pektinesterase sukzessiv auf
die Aktivität der endo-Polygalacturonase wirkt. Aus dieser Sicht wäre die Verwendung von
Polygalacturonsäure als Substrat vorteilhaft, da sie bereits vollständig bzw. so gut wie vollständig
entestert ist. Aus den bereits genannten Gründen wird jedoch Citruspectin verwendet.
So wurde für alle Messungen eine 0,4%ige Citruspectinlösung als Substrat verwendet, wie sie
bereits von Ewest (2009) und Meurer (1991) verwendet wurde. Als Messinstrument diente ein
Ubbelohde Viskosimeter, das mit einer elektronischen Steuereinheit (AVS 350) der Firma
Schott ausgestattet war. Die Kapillare war ebenfalls von der Firma Schott, trug die Typenbezeichnung
53210/I und hatte die Konstante K = 0,009651 mm 2 /s 2 . Die Probe setzte sich aus
12,5 ml Pektinlösung und 2,5 ml Enzymextrakt zusammen und wurde vor dem Einfüllen in
die Kapillare gemischt. Die befüllte Kapillare wurde dann an die Steuereinheit angeschlossen
und in das Wasserbad gestellt und bei 30 °C temperiert. Die erste Messung erfolgte 3 Minuten
nach der Vereinigung von Substrat und Enzymextrakt. Dem Enzym und dem Substrat wurde
somit Gelegenheit gegeben, sich zu akklimatisieren und bereits einzuwirken. Das Messen
erfolgte durch die beiden Lichtschranken, über die die Zeit gestoppt wurde, die ein definiertes
Volumen der Lösung benötigte, um durch eine Kapillare auszulaufen und die als t0 bezeichnet
wurde. Nach 10 weiteren Minuten erfolgte eine weitere Messung, bei der erneut die Durchlaufzeit
t1 bestimmt wurde. Ebenfalls bestimmt wurde die Auslaufzeit eines definierten Volu-