Charakterisierung von pektinolytischen Enzymen der Zuckerrübe

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renden Gruppen vorhanden ist. Diese beiden Blindwerte werden zu einem Gesamtblindwert
zusammenaddiert, von dem ein Pufferblindwert subtrahiert wird, da die Absorption des Puffers
sonst doppelt in den Gesamtblindwert eingehen würde. Der so wie in Formel 3 berechnete
Gesamtblindwert wird von den Messwerten, die bestimmt werden, abgezogen und die daraus
entstehenden Differenzen können so genutzt werden, um über die Gleichung der Eichgerade
die Konzentration der freigesetzten Galacturonsäure wie in Formel 4 zu berechnen.
BG = BE + BS - BP (3)
ΔE = ax + b (4)
a: Steigung der Geraden
b: Schnittpunkt mit der Ordinatenachse
x: Konzentration der Polygalacturonsäure
ΔE: Differenz von Probenabsorption und Gesamtblindwert
Die Aktivität der exo-Polygalacturonase kann berechnet werden indem man die über die
Eichgerade berechnete Konzentration der Galacturonsäure in die Formel 5 einsetzt.
U PG
1
V1
in ml
= x ×
×
(5)
1000 × Inkubationsdauer
in Minuten × Enzymmenge in ml V in ml
UPG : exo-Polygalacturonaseeinheit
1000: Umrechnungsfaktor von nmol in µmol
V1: Volumen des entionisierten Wassers, das genutzt wird den Enzymextrakt zu eluieren
V2: Volumen des Enzymextraktes, das über die Gelsäule eluiert wird
Um das pH-Optimum zu bestimmen, werden in Anlehnung an die Arbeit von Ewest (2009)
Acetatpuffer mit pH-Werten von 3,5 bis 6 verwendet. Um im neutralen und alkalischen pH-
Bereich untersuchen zu können, ist es nötig, andere Puffer wie z.B. Phosphatpuffer einzusetzen.
Für die Bestimmung des NaCl-Optimums werden in Anlehnung an die Arbeit von Meurer
(1991) NaCl-Konzentrationen von 0 – 0,4 mol/l verwendet. Dabei wird die das Natriumpolygalacturonat
in der NaCl-Lösung gelöst, da beim Zutropfen einer konzentrierten Salzlösung
oder bei Zugaben von NaCl das Substrat präzipitiert.
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