Charakterisierung von pektinolytischen Enzymen der Zuckerrübe

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tersuchung stattfinden sollte und in den anschließenden 4 Minuten wurde der pH-Wert durch
das Zugeben der Maßlösung auf diesem Wert gehalten und der Verbrauch an Maßlösung erfasst.
Bei der Bestimmung des NaCl-Optimums, wurde das Pektin in einer entsprechenden NaCl-
Lösung eingestreut und gelöst. Die Messung erfolgte bei einem pH-Wert von 7.
3.3 Methode zur Bestimmung der exo-Polygalacturonaseaktivität
Durch die Aktivität der exo-Polygalacturonasen werden Galacturonsäuren vom nichtreduzierenden
Ende der Polygalacturonsäuren abgespalten. Honda et al. (1982) betrachteten die Zunahme
der reduzierenden Gruppen in einer polygalacturonsäurehaltigen Reaktionslösung als
ein Maß für die Aktivität der in der Reaktionslösung vorhandenen exo-Polygalacturonase.
Alle anderen Verfahren, mit denen man die Aktivität des Enzyms bestimmen konnte nutzten
ebenfalls die Tatsache, dass reduzierende Gruppen freigesetzt wurden. Als übliche Verfahren
der Bestimmung galten bis 1982 die Kupfer-Arsenmolybdate-Methode nach Nelson und die
Nitrosalicylsäure-Methode nach Luchsinger und Cornesky, wobei die Kupfer-
Arsenmolybdate-Methode von Gross (1982) als die wesentlich sensiblere Methode dargestellt
wurde. Als Mittel der Wahl stellte Gross (1982) jedoch die Methode nach Honda et al.
dar, da sie um ca. 140 % sensibler sei als die üblichen Methoden.
Bei der Methode nach Honda et al. (1982) wurde 2-Cyanacetamid genutzt, welches mit den
Aldehydgruppen der reduzierenden Zuckern reagierte, wobei es durch Kondensationsreaktionen
zu Reaktionsprodukten kam, die ihr Extinktionsmaximum bei einer Wellenlänge von 276
nm hatten. Auch kam es bei längerer Reaktionsdauer als Folge von Dehydrierungen zur Bildung
von Ringverbindungen wie Pyrrol- und Pyridinderivaten, die ihr Extinktionsoptimum
ebenfalls bei einer Wellenlänge von 276 nm hatten.
Das Interessante an diesem Verfahren ist, dass mit ihm nicht nur Galacturonsäure nachweisbar
ist, sonder auch eine Vielzahl weiterer reduzierender Kohlehydrat-Verbindungen wie z.B.
Arabinose, Glucomannose und Mannose. Honda et al. selbst nutzten Glucose bei der Entwicklung
des Verfahrens. Wichtig ist daher, dass mit der entsprechenden Substanz, die nachgewiesen
werden soll, eine Eichkurve erstellt werden muss, um so die absolute Menge des nachzuweisenden
Stoffes berechnen zu können, was für die Bestimmung der Aktivität des Enzyms
nötig ist. Honda et al. (1982) und Gross (1982) nutzten dazu Glucose-Standards in einem Bereich
von 5-250 nmol. Meurer (1991) und Ewest (2009) hingegen nutzen Konzentrationen
von 50-200 µmol/l Galacturonsäure, um eine Eichgerade zu erstellen. Aus den so gemessenen