Charakterisierung von pektinolytischen Enzymen der Zuckerrübe
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Freisetzen <strong>von</strong> Methanol erfassen. Bell et al. (1951) bezeichnen das Messen <strong>der</strong> freigesetzten<br />
Carboxylgruppen über das Titrieren mit einer alkalischen Maßlösung als Möglichkeit die Pek-<br />
tinesterase zu analysieren.<br />
Bei dieser Methode wirkt die Pektinesterase auf hochverestertes Pektin ein und setzt somit<br />
Carboxylgruppen frei, die zu einem Absenken des pH-Wertes in <strong>der</strong> Analysenlösung führen.<br />
Die freigesetzten Carboxylgruppen lassen sich über das Titrieren mit einer verdünnten Natronlauge<br />
quantitativ bestimmen. Dies kann zum Einen über das manuelle Zudosieren <strong>von</strong> Natronlauge<br />
mittels eines Dosimaten o<strong>der</strong> einer Bürette geschehen, o<strong>der</strong> über die Verwendung<br />
eines Autotitrators, <strong>der</strong> den pH-Wert während <strong>der</strong> ganzen Analysedauer durch Zutitrieren <strong>der</strong><br />
verdünnten Natronlauge konstant hält. Die allgemeine Aktivitätsbestimmung erfolgt bei dem<br />
pH-Wert <strong>von</strong> 7,0. Bei <strong>der</strong> Bestimmung des pH-Optimums werden die entsprechenden pH-<br />
Werte während <strong>der</strong> Analysedauer konstant gehalten. Dabei ist zu beachten, dass es bei pH-<br />
Werten über 7,5 zu einer Entesterung durch die Lauge kommt. Aus diesem Grunde ist es nötig,<br />
bei den entsprechenden pH-Werten Laugenblindwerte zu bestimmen, die dann <strong>von</strong> den<br />
eigentlichen Messwerten abgezogen werden. Von Bedeutung ist auch, dass <strong>der</strong> pH-Wert <strong>der</strong><br />
Substratlösung zwischen 3 und 4 liegt. Somit ist eine Vortitration unter Verwendung einer<br />
etwas stärker konzentrierten Natronlauge angebracht, da es bei Verwendung <strong>der</strong> schwach<br />
konzentrierten Maßlösung zu einer starken Verdünnung des Substrates kommen würde, was<br />
sich wie<strong>der</strong>um auf die Enzymaktivität auswirken würde, da die Substratkonzentration laut<br />
Steffens (2007) in die Michaelis-Menten-Gleichung einfließt und sich somit auf die Enzymaktivität<br />
auswirkt.<br />
Als Substrat wurde, wie <strong>von</strong> Ewest (2009) und Meurer (1991) bereits beschrieben, eine<br />
0,5%ige Citruspektinlösung verwendet, <strong>der</strong>en Veresterungsgrad zwischen 70 und 75 % lag.<br />
Der Natriumchloridgehalt <strong>der</strong> Substratlösung lag bei 0,15 mol/l. Bei <strong>der</strong> Bestimmung des Natriumchlorid-Optimums<br />
wurde das Pektin in <strong>der</strong> Salzlösung aufgelöst, da es bei direkter Zugabe<br />
<strong>von</strong> NaCl o<strong>der</strong> konzentrierter NaCl-Lösung in die Pektinlösung zu Ausflockungen kommt.<br />
Die Aktivität <strong>der</strong> Pektinesterase kann unter Verwendung <strong>der</strong> Formel 1 berechnet werden<br />
U PE<br />
−<br />
μmol<br />
freigesetzte<br />
COO<br />
/ ml =<br />
(1)<br />
Zeit in Minuten × ml Enzymextrakt<br />
Da bei <strong>der</strong> Titration 0,01 M NaOH verwendet wird, <strong>von</strong> <strong>der</strong> 1 ml mit 10 µmol COO - korrespondiert,<br />
muss die Formel 1 um den Faktor 10 ergänzt werden, wie in Formel 2 dargestellt.