Solubilisierung stark lipophiler Arzneistoffe in lipidhaltige ...

Kapitel III Experimenteller Teil
Lösungen wurden dann jeweils 100-µl-Proben entnommen und durch MeOH auf 1 ml
ergänzt. Die Aufarbeitung der Blindprobe erfolgte auf gleiche Weise mit einer nicht
benützten Membran von gleicher Größe. Für die Gehaltbestimmung kam anschließend
die Methode HPLC-2 ( III.5) zum Einsatz.
Für die Bestimmung der Wiederfindungsrate bei der zuletzt beschriebenen Extraktionsmethode
wurde ein kleines Volumen hoch konzentrierter ethanolischer Wirkstofflösung
mit vorbestimmtem Wirkstoffinhalt auf drei nicht benutzte Membranen gegeben und 1 h
unter Abzug zur Verdunstung gebracht. Danach schlossen sich die zuvor genannten
Extraktionsschritte und die Analytik mit drei Parallelbestimmungen je Probe an.
III.9 Transportuntersuchungen mit Hilfe der Ussing-Kammer mit
isolierten Abschnitten aus Mäuse-Dünndärmen
Die von Ussing und Zerhan entwickelte Methode [236] wurde erst 1950 zur Untersuchungen
des transepithelialen Natriumtransportes an Froschhaut eingeführt. Mit Hilfe
dieser Technik werden heute elektrophysiologische Experimente und Untersuchungen zu
unterschiedlichen Transportprozessen und Wirkstoffmetabolismen an isolierten Epithelen
(ex-vivo) durchgeführt.
Die Methode hat zahlreiche Vorteile und ist mittlerweile zu einer der Standardmethoden
bei den o.g. Untersuchungen geworden. Beispielsweise bei passiv transportierten
Substanzen mit sowohl hoher als auch niedriger Permeabilität wurde eine gute
Korrelation [41] zwischen den über diese Technik ermittelten Permeabilitätskoeffizienten
und denen in-vivo für Humanjejunum festgestellt. Damit ist es auch möglich,
zuverlässige Vorhersagen über den Wirkstofftransport durch andere Epithelen (bukkale,
nasale, esophageale, gastrische, rektale und dermale) zu machen. Die Methode ist
ebenso auf humane Gewebesegmente aus Biopsien u.ä. als auch auf Monoschichten
aus Zellkulturen wie Caco-2-Zelllinie anwendbar. Neben der klassischen Verwendung
chemischer Integritätsmarker wie Mannitol, Inulin oder Luzifergelb gestattet diese
Technik auch, über die Ermittlung des transepithelialen elektrischen Widerstands die
Membranintegrität bzw. Vitalität während der Messungen zu kontrollieren. Darüber
hinaus kann man mit dieser Technik die transepitheliale Potentialdifferenz mit einer
Spannungsklemme (voltage clamp) kompensieren, d.h. das Epithel elektrisch kurzzuschließen
und somit alle äußeren Kräfte bzw. die Wirkung elektrochemischer Gradienten
auszuschalten, die einen zusätzlichen passiven Transport durch das Epithel initiieren
könnten. Dadurch wird es möglich, ausschließlich die nativen Transportprozesse durch
das Epithel zu messen. Die Kammern können auf 37 °C temperiert werden und sind mit
einem Einlass für Carbogen (95% O 2+5% CO 2) versehen. Dies dient einerseits zur
angenehmen Umwälzung der Badlösung (bubble lift) und Durchmischung der
ungerührten Grenzschichten auf den jeweiligen Membranseiten, die apikale (mukosale)
und die basolaterale (serosale); andererseits zur längst möglichen Aufrechterhaltung der
Gewebe durch Begasung mit dem lebenswichtigen Sauerstoff und die damit verbundene
Gewährleistung vom konstanten pH-Wert der Pufferlösung.
Der größte Nachteil dieser Methode [45] besteht darin, dass die Diffusion der Moleküle
über unphysiologische Wege erfolgen kann, d.h. der Mangel an gewöhnlicher Blutversorgung
durch Blutgefässe zwingt die Moleküle, durch das subepitheliale Bindegewebe
der Schleimhaut (Lamina Propia Mucosae) und andere Schichten wie z.B. die
Basalmembran, die Submukosa, und die verschiedenen Muskelschichten zu diffundieren
(siehe Abb. 16). Allerdings weisen diese Gewebeteile diesbezüglich unterschiedliche
Eigenschaften in Abhängigkeit von verwendeten Tierarten, Organen und Segmentort im
52