Solubilisierung stark lipophiler Arzneistoffe in lipidhaltige ...

Kapitel III Experimenteller Teil
mit möglichst hoher Wiederfindungsrate und Wiederholpräzision war hier notwendig für
die Entwicklung der Analytik mittels HPLC.
Humanplasma aus Blutspenden wurde von der Universitätsklinik zur Verfügung gestellt,
im Gefrierschrank bei –25 °C gelagert und direkt vor der Vorbereitung bei Raumtemperatur
aufgetaut. Eine Lösung von T bzw. Testosteronestern in EtOH (10 mg/ml) wurde
mit Plasmaproben im Verhältnis 1:500 versetzt (entsprechend einer Endkonzentration
von 20 µg/ml) und 30 min bei 37 °C inkubiert. Die Änderung an Probevolumen war hier
geringfügig und wurde deshalb vernachlässigt.
Hier wurden auch ACN, MeOH und EtOH als organische Lösungsmittel für die
Aufarbeitung der Plasmaproben miteinander verglichen. Die testosteronhaltige Plasmaprobe
wurde wie die BSA/KRBP Proben ( III.5.2.1) vorbereitet. Die Proben wurden nach
Methode HPLC-2 analysiert (Tabelle 5). Das resultierende Chromatogramm ist in (Abb.
12) zu sehen. Zur quantitativen Auswertung wurden die Peaks der Substanzen bei der
entsprechenden Wellenlänge integriert und die erhaltenen Flächen statistisch ausgewertet.
Daraus ergaben sich die folgenden Retentionszeiten (t R) (Tabelle 9). Für die
Erstellung der Kalibrierkurve in dieser Phase der Arbeit wurden 6 Konzentrationen im
Bereich von 2-12 µg/ml ausgehend von einer Stammlösung in ACN als Lösungsmittel
hergestellt. Das resultierende Chromatogramm ist in Abb. 9 zu sehen. Die Proben
wurden ebenso dreifach nach Methode HPLC-2 analysiert.
Zusätzlich zu den in III.5.2 diskutierten praktischen Gründen zeigte die Methode A2 hier
deutlich bessere Wiederfindungsraten gegenüber den anderen verglichenen Methoden
(Abb. 11), weswegen sie hier für die weitere Analytik ausgewählt wurde.
TEs Eichwert je 12 microgr/ml
TEs 12 _02Whg Diode Array
100
8.51
T
242
2.50e5
%
TP
9.81
-0
Time
7.00 7.50 8.00 8.50 9.00 9.50 10.00 10.50 11.00 11.50 12.00 12.50 13.00 13.50 14.00
Abb. 9 HPLC-Chromatogramm des Testosterons und seiner Ester in ACN
TE
11.07
TU
12.79
46