Solubilisierung stark lipophiler Arzneistoffe in lipidhaltige ...

Kapitel III Experimenteller Teil
In früheren ähnlichen Arbeiten [208,209] wiesen die ermittelten Z-Werte eine Unabhängigkeit
von der Solubilisatkonzentration in den mizellaren Lösungen auf und der
Einfluss der Verdünnung war nur auf Verschiebungen der gemessenen Maxima innerhalb
des ±0,5-nm-Bereiches der ausgerechneten Versuchspräzision beschränkt. Dies wurde
in dieser Arbeit als geltend angenommen und war deswegen kein Objekt weiterer
Untersuchungen. Die mit T bzw. seinen Estern gesättigten mizellaren Systeme wurden
dem gleichen beschriebenen Verfahren unterworfen, wodurch die optimalen Verdünnungen
(mit dem entsprechenden steroidfreien System) bestimmt und die maximalen
Absorptionswellenlängen ermittelt wurden, die wiederum in entsprechende Übergangsenergien
nach Gl. III.4-2 umgerechnet wurden. Über die für jedes Derivat herausgefundenen
linearen Regressionsgleichungen wurden dann die Z-Werte aus den entsprechenden
Übergangsenergien rechnerisch ermittelt.
III.5 Gehaltbestimmung mittels HPLC-Methoden
III.5.1 Analytik in mizellaren Systemen
Der Gehalt verschiedener solubilisierter Steroide in den mizellaren Systemen wurde mit
Hilfe der RP-HPLC bestimmt.
Die mizellare Struktur wurde erst durch Verdünnung (mehr als zehnfach) mit einem
organischen HPLC-kompatibeln Lösungsmittel (meist MeOH) zerstört. Dadurch fallen
die Puffersalze aus und es wird möglich, die Probelösung für die HPLC-Analytik mit Hilfe
eines 0,45 µm Nylon (oder PTEF je nach Lösungspolarität) Spritzenfilters (Rotalibo®,
Carl Roth GmbH & Co. Karlsruhe, Deutschland) vom Niederschlag zu befreien. Die
Blindwertprobe und die Verdünnungsreihe wurden entsprechend der Proben angesetzt
und zur Analyse vorbereitet.
Die Anwendung der RP-HPLC war notwendig, da ein Teil der Komponente der
mizellaren Systeme eine Absorption im benötigten UV-Bereich zeigte (v.a. Tween
Produkte), weshalb sie bei der Gehaltsbestimmung von den Steroiden getrennt werden
musste. Mit Ausnahme von den untersuchten Steroiden eluierten alle großen,
hydrophilen oder amphiphilen Moleküle kurz nach der Injektion und fast zusammen mit
dem sog. Lösungsmittelpeak (gegen t 0) und ermöglichten damit eine saubere Trennung
und Gehaltsbestimmung der untersuchten Steroide. Es erfolgte für jede Probe eine
Dreifachbestimmung. Zur quantitativen Auswertung wurden die Peaks der Substanzen
bei der entsprechenden Wellenlänge integriert und die erhaltenen Flächen statistisch
ausgewertet. Im Rahmen dieser Arbeit wurden hauptsächlich zwei HPLC Methoden für
die Gehaltsbestimmung von T und seinen Estern in mizellaren Systemen und den
anderen Lösungen eingesetzt, die im Folgenden in Details geschildert werden.
Methode HPLC-1 (isokratische Elution): Die Messungen erfolgten mit der Säule
Knauer, 100x4 mm, Nucleosil®-100, RP-C18, B612 Y76, 5µm von KNAUER GmbH,
(Berlin, Deutschland) an HPLC/UV MERCK-HITACHI (L-6200A Intelligent Pump, D-
6000A Interface Module, AS-4000A Intelligent Autosampler, L-4250 UV-Vis Detector)
und mit der Software (Model D-6000; CHROMATOGRAPHY DATA STATION
SOFTWARE, HPLC MANAGER Version 2). Die Funktionsparameter der HPLC Methode
sind in der Tabelle 4 aufgeführt.
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