Solubilisierung stark lipophiler Arzneistoffe in lipidhaltige ...

Kapitel III Experimenteller Teil
Herstellung gesättigter Systeme zwecks Bestimmung der Sättigungskonzentrationen:
Die zu untersuchenden wirkstofffreien mizellaren Systeme wurden frisch hergestellt, mit
einem Überschuss vom Wirkstoff in braune lichtgeschützte Vials gefüllt, dicht
verschlossen und ca. 48 h in einem auf 40 °C temperierten Wasserbad eines Rüttelgeräts
ausgeschüttelt. Nach Abkühlung auf Raumtemperatur erfolgte die Filtration durch
0,45 µm Spritzenmembranfilter und anschließend die Analytik nach den in III.5
beschriebenen HPLC Methoden.
Stabilität der hergestellten mizellaren Systeme:
Die Faktoren, welche die Stabilität der nach den o.g. Methoden hergestellten Gallensalz-
Lecithin-Mischmizellen beeinflussen können, wurden ausführlich von Hammad (1998)
[8] untersucht. Diese wurden auch bei den o.g. Herstellungsmethoden der vorliegenden
Arbeit berücksichtigt. Die Hauptgefahr für die Stabilität der MMS, die ungesättigte Fettverbindungen
enthalten, stellt der oxidative Abbau der Doppelbindungen und die Entstehung
als erstes von Hydroperoxide mit konjugierten Doppelbindungen (Diene oder
Triene in den lecithinhaltigen Systemen) in einer sauerstoffreichen, nicht lichtgeschützten
Umgebung dar. Dies demonstrierte sich beispielsweise bei den lecithinhaltigen
Systemen durch Änderungen im UV-Absorptionsspektrum bei 233 nm und 265-
285 nm sowie allgemein durch eine Zunahme der Peroxidzahl und die Entstehung von
Malonaldehyden (λ max ≈ 245 nm). Bei den Systemen der ethoxylierten Tenside besteht
die Gefahr der atmosphärischen Oxidation und Bildung von ethoxylierten Aldehyden mit
allergieauslösender Wirkung [227]. Die optische Prüfung auf Phasentrennung, die
Spektrenaufnahmen im UV-Bereich sowie die Transmissionseigenschaften (bei 660 nm)
der Systeme zeigten keine signifikante Änderung der nach den o.g. Methoden
hergestellten Systeme innerhalb einer Lagerungszeit von einer Woche bei ca. 4 °C.
III.3 Herstellung intravenöser liposomaler Lösungen für das
Kaninchen-Modell
Für die Ermittlung pharmakokinetischer Parameter bei den Tierversuchen ist der
Wirkstoff durch eine i.v. Bolusinjektion zu verabreichen. Für die Solubilisation ausreichender
Mengen von untersuchten Steroiden in wässriger Injektionslösung wurde das
folgende liposomale System verwendet. Zur Herstellung von 20 ml der i.v. Lösung
wurden 100 mg P90G, ca. 1 mg NaDC oder NaGDC und die Menge des Steroids in
einer CHCl 3/MeOH (1:1) Mischung in einem mit Schliffhals versehenen Rundkolben
gelöst. Das Lösungsmittel wurde mittels eines Rotationsverdampfers entsprechend M1
vollkommen abgedampft. Dadurch entstand ein Film an der inneren Wand des Kolbens.
Dieser wurde bei 40 °C (etwa 30 min) im Ultraschallwasserbad mit PB gelöst. Dabei
musste der Kolben mit Helium oder Argon befüllt und mit einem Glasstopfen dicht
verschlossen werden, um Oxidation der ungesättigten Fettsäurereste sowie eine Verdunstung
der Lösung möglichst zu vermeiden. Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur
wurde die Lösung durch einen 0,2-µm-Membranfilter filtriert, mit langsamer
Heliumzufuhr entgast und dicht verschlossen. Die Zugabe von Alkoholen, Glycerolderivaten
oder alkoholischen Konservierungsmitteln wie z.B. BzOH führt zur Instabilität
solcher Systeme [228]. Die Lösung wurde frisch hergestellt und innerhalb von 24 h
verwendet. Die Bestimmung der Vesikelgröße dieses Systems (mit eingebettetem TE, 3
mg/ml) durch Lichtstreuung mit einem Malvern Autosizer II C (Malvern Instruments,
Herrenberg, Deutschland) zeigte eine relativ schmale Ein-Peak-Verteilung um 92,4 nm
(siehe Anhang).
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