ABSTRACTS

Abstracts
therapeutische Effekt von bFGF und VEGF165 in einem vergleichbaren
ischämischen Lappenmodell der Ratte untersucht werden.
Methodik: 10 Mio. isogene Rattenfibroblasten/Tier wurden adenoviral
transfiziert (je 50 % bFGF und 50 % VEGF165) und in einem McFarlane
Lappenmodell (2 x 8 cm) der Ratte im Lappengewebe und im Bereich
des angrenzenden Wundrandes zu verschiedenen Zeitpunkten gleichmäßig
implantiert. Insgesamt wurden 15 Gruppen mit jeweils 10 Tieren
gebildet. Setting I: Implantation bFGF und VEGF165-modifizierter Zellen
zum Zeitpunkt der Lappenhebung (Gruppe 1); zeitgleiche Implantation
GFP-modifizierter Zellen (Gruppe 2); zeitgleiche Implantation nichtmodifizierter
Zellen (Gruppe 3); zeitgleiche Injektion von Kontrollmedium
(Gruppe 4); Setting II: paralleles Vorgehen 1 Woche vor
Lappenhebung (Gruppen 5-8); Setting III: paralleles Vorgehen 2 Wochen
vor Lappenhebung (Gruppen 9-12). 7 Tage nach Ischämiebeginn wurden
die Tiere euthanasiert und die Lappen klinisch planimetrisch nach ihren
vitalen Lappenanteilen sowie mikroangiographisch und immunhistologisch
ausgewertet.
Ergebnisse: In Setting I ließen sich keine therapeutisch signifikanten Verbesserungen
der Lappenvitalität nach ischämischem Insult erreichen. Hingegen
waren in Gruppe 5 (Setting II) signifikante (P ≤ 0,05) Verbesserungen
der Lappenvitalität sowohl klinisch planimetrisch, als auch für die semiquantitative
Bestimmung der Kapillardichte und die quantitative mikroangiographische
Auszählung der Blutgefäße im Zielgewebe zu erkennen.
In Gruppe 9 (Setting III) waren weitere Verbesserungen der genannten
Parameter messbar (P ≤ 0,001).
Schlußfolgerung: Durch die kombinierte Expression von bFGf und VEGF165
läßt sich eine Optimierung therapeutischer angiogenetischer Effekte im
Zielgewebe erreichen. Diese Effekte gehen zeitlich über das entsprechende
Genexpressionsmaximum hinaus und sind als indirekte Hinweise für ein
Synergismus von bFGf und VEGF165 zur stabilen Angiogeneseinduktion
in vivo zu werten.
P25 Intravital Fluorescence Microscopy – A New Instrument for
Measuring Tissue Perfusion
N. Stuetz1,2 , K. Messmer2 , D. Nolte3 1 2 Center for Hand Surgery, Rhoen-Klinikum, Bad Neustadt/Saale, Institute for Surgical Research,
LMU Munich, 3Department of Oral and Maxillofacial Surgey, University of Bochum
Intravital fluorescence microscopy (IVM) is a new method to quantify
microvascular perfusion by measuring the microcirculatory parameters
leukocyte-endothelium interaction (LE-I), red-blood cell (RBC) velocity,
macromolecular leakage (Extravasation) and functional capillary density
(FCD).
Objective: The purpose of this study was to investigate the effects of endotoxin
on the microcirculation of striated skin muscle using IVM as an
valuable tool for quantitative analysis in an experimental model in the
mouse in reconstructive microsurgery.
Methods: The experimental model used was the transparent dorsal skin fold
chamber in awake BALB/c mice permitting chronic intravital microscopic
analysis of the microcirculation over several days. The effects of endotoxin
(1,25 mg/kg) on FCD, LE-I, RBC velocity and macromolecular leakage,
as an indicator of endothelial integrity, were analyzed in striated
skin muscle. Control animals received equivalent volumes of 0.9 % saline.
Measurements were made 10 min, 1h, 3h, 5h, 8h, 24 h after i.v. injection
of endotoxin. For visualization of the plasma fluorescein isothiocyanatedextran
(FITC-dextran 150 kd), for visualization of intravascular leukocytes
the in vivo fluorescent marker rhodamine 6G were used. FCD,
defined as the length of red cell-perfused capillaries per observation area
(cm -1), has been used as an indicator of tissue perfusion. Quantitative
analysis of FCD in randomly selected regions of the tissue was performed
with a computer-assisted video analysis system which allows calculation
34. Jahrestagung der Deutschen Plastischen Chirurgen
8. Jahrestagung der Deutschen Ästhetisch-Plastischen Chirurgen
of the length of RBC perfused capillaries. Results: 8 h after injection,
endotoxin elicted a significant increase in venular and arteriolar leukocyte
sticking which was accompanied by leakage of FITC-dextran into
the perivascular tissue. Extravasation of FITC-dextran was found significantly
increased while FCD was found decreased which was associated
with a reduction of RBC velocity in postcapillary venules (p < 0.05 vs.
control, n = 6 each group). Conclusion: The use of IVM for measuring
intravital microcirculatory parameters using a double fluorescence technique
of rhodamin 6 G and FITC-dextran is highly effective to assess
microcirculatory disturbances. FCD as an indicator for tissue perfusion
was reduced as a consequence of an endotoxin induced microvascular failure.
This technique may become a helpful tool to early detect microvascular
failure and elucidate the underlying pathomechanisms in experimental
microsurgery.
P26 Untersuchung der in vivo angiogenen Wirksamkeit VEGFtransfizierter
Präadipozyten auf dem Zylinder-
Choriallantoismembran (CAM)-Modell
N. Torio-Padron, F.T. Tegtmeier, M.C. Mueller, G.B. Stark, J. Borges
Abteilung Plastische und Handchirurgie, Universitätsklinikum Freiburg
Dreidimensionale Konstrukte zum Ersatz von Weichteilgewebe, bestehend
aus humanen Präadipozyten und Fibrinkleber als Trägermatrix,
benötigen nach autologer Transplantation Anschluß an das Gefäßsystem
des Empfängerorgans, um eine Nährstoffversorgung der im Konstrukt
befindlichen Zellen auch in Zentralbereichen gewährleisten zu können.
Vorherige Untersuchungen zeigten, daß Präadipozyten die Vaskularisierung
des Konstruktes durch die Sekretion unterschiedlicher Wachstumsfaktoren,
u.a. VEGF und bFGF, induzieren. In dieser Studie wurde
eine mögliche Verbesserung der Kapillarisierung durch die Transfektion
humaner Präadipozyten mit einem VEGF-Vektor untersucht. Transfektionseffizienz
und VEGF-Expression wurden in vitro bestimmt. Die in
vivo angiogene Wirkung der transfizierten Zellen wurde auf dem Zylinder-Chorioallantoismembran
(CAM)-Modell untersucht.
Methodik: Humane Präadipozyten wurden mittels Elektroporation mit
einem pCMX-GFP- und pCMX-VEGF-Vektor transfiziert. Als Maß für
die Transfektionseffizienz wurde die GFP-Expression mittels Durchflußzytometrie
ermittelt und die VEGF-Expression mit Hilfe eines
VEGF-Inmunoassays bestimmt. 4x106 VEGF transfizierte Präadipozyten
wurden in einer Fibrinmatrix auf die CAM am 7. Inkubationstag
aufgebracht und über eine Inkubationszeit von bis zu 8 Tagen wurde die
Vaskularisierung des Konstruktes untersucht. Für die Auswertung wurden
histologische Untersuchungen sowie einen computergestützte Bildanalyse
durchgeführt.
Ergebnisse: 48h nach der Elektroporation mit dem GFP-Vektor wurde eine
Transfektionseffizienz von 22 % mittels Durchflußzytometrie festgestellt.
Durch den VEGF-Immunoassay konnte ebenso eine signifikant
höhere VEGF-Expression bei den VEGF transfizierten Zellen im Vergleich
zur Kontrollgruppe nachgewiesen werden. In histologischen
Untersuchungen zeigten die Konstrukten mit VEGF transfizierten Zellen
gegenüber der Kontrollgruppe eine signifikante Verbesserung der
Vaskularisierung im CAM-Modell.
Fazit: Primäre humane Präadipozyten können mittels Elektroporation mit
einem VEGF-Vektor erfolgreich transfiziert werden. Die Steigerung der
VEGF-Expression im CAM-Modell führte zu einer verstärkten Kapillarisierung
des Fibrinkonstruktes.
60 Plastische Chirurgie 3 (Suppl. 1): 60 (2003)