ABSTRACTS

Abstracts
P7 Die Kultivierung humaner Präadipozyten im
autologen Serum bietet neue Perspektiven für die Rekonstruktion
von Weichgewebsdefekten
K. Hemmrich1 , D. von Heimburg1,2 , S. Haydarlioglu1 , N. Pallua1 1 2 Klinik für Plastische Chirurgie, Hand- und Verbrennungschirurgie, Universitätsklinikum Aachen, Frankfurt/M.
Goldstandard in der Kultivierung von Fettgewebsvorläuferzellen ist die
Verwendung des Mediums Dulbecco’s modified Eagle medium
(DMEM)/F12 unter Zugabe von fetalem Kälberserum (FCS). Die Differenzierung
wird in DMEM/F12 ohne FCS durch differenzierungsfördernde
Faktoren induziert. Ziel der vorliegenden Studie war die Entwicklung
eines neuartigen, optimierten Protokolls für die Proliferation
und Differenzierung von Präadipozyten unter Einsatz von humanem
Serum. Sowohl die Zellvermehrung als auch die Differenzierung der
Präadipozyten sind Grundvoraussetzung für die Herstellung eines idealen
Biokonstrukts aus Präadipozyten und einer dreidimensionalen
Matrix. Ein derartiges Implantat könnte die adäquate Lösung für die Korrektur
von Weichgewebsdefekten wie großflächigen Verbrennungen,
Tumorresektionen oder angeborenen und vererbten Defekten darstellen.
Methoden: Präadipozyten wurden isoliert aus humanem subkutanen Fettgewebe
und kultiviert in Opti-MEM Medium oder DMEM/F12 als Kontrollmedium.
Die Proliferation wurde mit oder ohne die Zugabe von
humanem Serum oder fetalem Kälberserum (FCS) durchgeführt. Die
Vorteile einer Fibronektinbeschichtung der Kulturträger in Hinblick auf
Proliferations- und Differenzierungssteigerung wurden analysiert. Nach
7-9 Tagen Kulturexpansion wurde die Differenzierung in serumfreiem
Opti-MEM oder DMEM/F12 eingeleitet durch Zugabe von Insulin, Isomethylbutylxanthin,
Pioglitazon, Dexamethason und Transferrin. Das
Ausmaß der Differenzierung wurde durch morphologische Zellanalysen
und Bestimmung der Enzymaktivität des Enyzms Glycerophosphat-
Dehydrogenase nach 12-14 Tagen bestimmt.
Resultate: Es konnte gezeigt werden, daß Fibronectin nicht nur die Zellausbeute
der Präadipozytenisolation aus dem Fettgewebe deutlich steigert,
sondern daß es darüber hinaus auch eine differenzierungsfördernde Wirkung
hat. Bezüglich der Verwendung des Mediums läßt sich feststellen,
daß DMEM/12 im Vergleich zu Opti-MEM etwas besser geeignet ist zur
Zellvermehrung, unabhängig davon, ob FCS oder humanes Serum verwendet
wird. In Bezug auf die Differenzierung jedoch zeigt Opti-MEM
deutlich bessere Ergebnisse, besonders wenn humanes Serum und nicht
FCS verwendet wird.
Schlußfolgerungen: Der Einsatz humanen Serums für die Präadipozytendifferenzierung
ermöglicht nicht nur eine Kultivierung ohne die Verwendung
bovinen Materials, sondern bietet auch gleichzeitig die Möglichkeit eines
komplett autologen Systems. So eröffnet humanes Serum zusammen mit
Opti-MEM in der Präadipozytenkultivierung und Differenzierung neue
Wege für die Behandlung von Weichteilgewebsdefekten durch die Verwendung
optimal vorbereiteter Präadipozyten.
P8 Die adenovirale Transfektionseffizienz in kutane Epithelzellen
wird durch Zusatz von Liposomen gesteigert
T. Hirsch, F. Jacobsen, J. Mertens, D. Mittler, M. Lehnhardt, H.U. Steinau, L. Steinsträsser
Klinik für Plastische Chirurgie und Schwerbrandverletzte, Handchirurgiezentrum,
Operatives Referenzzentrum für Gliedmaßentumore, BG-Universitätskliniken Bergmannsheil,
Ruhr-Universität Bochum
Bei akuten und chronischen Verletzungen der Haut stellt die Wundinfektion
ein wachsendes klinisches Problem dar. Aufgrund der kurzen biologischen
Halbwertszeit von synthetischen Peptiden wie Wachstumsf-
34. Jahrestagung der Deutschen Plastischen Chirurgen
8. Jahrestagung der Deutschen Ästhetisch-Plastischen Chirurgen
akturen und Antimikrobiellen Peptiden in der Wunde könnte der transienter
kutane Gentransfer mit rekombinanten replikationsdefizienten
Adenoviren eine interessante Alternative sein. Problematisch ist jedoch
die potentielle Antigenität der Adenoviren bei mehrmaliger Applikation.
Das maskieren adenoviraler Antigene mittels gängiger Transfektionsreagenzien
zeigt eine Möglichkeit, die Immunreaktion gegenüber dem
Vektor zu vermindern. Ziel unserer Studie war es, die adenovirale Transfektion
mit Hilfe von Liposomen zu optimieren.
Material und Methoden: Zellen der Keratinozytenzellinie HaCat und primäre
humane Keratinozyten wurden mit Ad5-LacZ Virus in einer MOI (multiplicity
of infection) von 1, 10, 100 und 1000 unter Verwendung der
Transfektionsreagenzien FuGENE 6®, Lipofectamine 2000® und
DOTAP:Chol transfiziert. Als Kontrollen dienten der Ad5-LacZ Virus
ohne Transfektionsreagenz bzw. die Transfektionsreagenzien alleine.
Nach Transfektion wurde an verschiedenen Zeitpunkten (1, 2, 3, 5 ,7
oder 14 d) wurde die Beta-Galactosidase Expression luminometrisch
(Berthold Detection Systems®, Tropix Galacto-Light Plus®) quantifiziert
und mit dem Gesamtproteingehalt (BCA-Assay, Pierce) der Probe normalisiert.
Die histologische Analyse erfolgte durch Anfärbung mittels X-
Gal und mikroskopischer Auswertung.
Ergebnisse: Die in vitro Transfektion zeigte eine stabile hocheffiziente dosisund
zeitpunktabhängige Expressionsrate in beiden Zelltypen. Bei allen
Gruppen zeigte eine MOI von 1000 die höchsten Expressionsraten. Es
folgten in ihrer Effizienz die MOI 100, 10 und 1. FuGENE 6® sowie
DOTAP:Chol zeigten eine signifikante (p< 0,005) dosis- und zeitpunktabhängige
Steigerung der Transduktions- und Expressionsrate gegenüber
dem Adenovirus ohne Transfektiosreagenz, während Lipofectamine
2000® keinen signifikanten Unterschied aufwies.
Diskussion: Die Verbesserung der Transfektionseffizienz mit FuGENE 6®
und DOTAP:Chol mit gleichzeitiger Reduktion des benötigten Virustiters
kann eine interessante Option für die in vivo Applikation darstellen.
Zusätzlich kann die durch Adenoviren provozierte Immunreaktion
durch eine gleichzeitige Maskierung adenoviraler Antigene minimiert
werden.
P9 Vorhersage von Nekrosen bei kritisch durchbluteten
Lappenplastiken mittels Laser-induzierter Fluoreszenz von
Indocyaningrün – eine tierexperimentelle Untersuchung
T. Holzbach, R. Giunta, C. Taskov, P.S. Holm, A. von Bernshausen, B. Gänsbacher, E. Biemer
Abt. für Plastische und Wiederherstellungschirurgie, * Abt. für Experimentelle Onkologie und Therapieforschung,
Klinikum r.d. Isar, Technische Universität München
Bei kritisch durchbluteten Lappenplastiken ist die Vorhersage der
tatsächlich zu erwartenden Lappennekrose schwierig und selten exakt
möglich. Daher wird in vielen Fällen später nekrotisches Gewebe nicht
primär reseziert und die Behandlung dadurch verzögert. Die durch Laserlicht
induzierte Fluoreszenz von Indocyaningrün (ICG) erlaubt eine topographische
Darstellung der Perfusion in semiquantitativer Weise. In der
vorliegenden Arbeit sollen die Prädiktionsmöglichkeiten von Nekrosearealen
mit dieser Methode unter definierten Versuchsbedingungen evaluiert
werden.
An 7 Sprague-Dawley Ratten mit einem durchschnittlichen Gewicht von
360g wurden Lappenplastiken vom „random-pattern“ Typ mit einem
Länge-zu-Breite-Verhältnis von 4:1 (8 x 2cm) auf der Bauchhaut gehoben
und wieder eingenäht. Die Fluoreszenzmessung wurde direkt im
Anschluß an die Operation durch Injektion von 1g ICG/kgKG in eine
Schwanzvene durchgeführt und mit einer Digital-Videokamera aufgezeichnet.
Nach 7 Tagen wurden Nekrose und überlebende Fläche der
Lappen mit Hilfe der Image-J®-Software vermessen und die initiale Per-
54 Plastische Chirurgie 3 (Suppl. 1): 54 (2003)