ABSTRACTS

34. Jahrestagung der Deutschen Plastischen Chirurgen
8. Jahrestagung der Deutschen Ästhetisch-Plastischen Chirurgen
tung. Wir beschreiben hier eine Methode im Mikrotiterformat unter Verwendung
primärer humaner Tenocyten, zur Quantifizierung der spezifischen
Kollagen I und III-expression. Zellzahl und Kollagengehalt
werden spektrophotometrisch durch Alamar Blue-oxidation und Siriusrotfärbung
bestimmt. Beide Methoden können an identischen Kulturen
ohne zu interferrieren durchgeführt werden. Die Siriusrotfärbung
erlaubt zudem eine morphologische Betrachtung der Zellen, sowie eine
Betrachtung der Kollagenlokalisation. In dieser Hinsicht ist diese
Methode radioaktiven Markierungsmethoden oder der Hydroxprolinbestimmung
überlegen. Die hier vorgestellte Methode ist ein ideales Werkzeug
für Screeningexperimente mit Fokus auf extrazelluläre Matrixbildung
als Basis für Arbeiten im Tissue Engineering.
V24 In-vitro-Einfluß verschiedener Feldstärken auf
die anti- und prothrombotische Aktivität von humanen
Nabelschnur-Endothelzellen im elektrischen Feld
D. Ulrich1 , J. Silny2 , F. Lichtenegger1 , B. Hafemann1 , N. Pallua1 1Klinik für Plastische Chirurgie, Hand- und Verbrennungschirurgie, Universitätsklinikum Aachen
2Forschungsinstitut für elektromagnetische Umweltverträglichkeit (femu), RWTH Aachen
Patienten zeigen nach schweren Stromverbrennungen häufig eine progrediente
Gewebsschädigung und Thrombose von Blutgefäßen auch fern
der Ein- und Austrittsstelle des Stromes. Es besteht die offene Frage, ob
es hierbei zu einer Schädigung des Endothels mit Störung des physiologischen
Gleichgewichtes zwischen Blutgerinnung und Fibrinolyse
kommt. Zur Untersuchung einer möglichen Veränderung des hämostaseologischen
Gleichgewichtes durch Stromschädigung von Endothelzellen
sollten im Rahmen dieser Arbeit Protein C, Tissue Factor, Endothelin-1,
Prostacyclin (PGI2), der Plasminogenaktivator-Inhibitor 1 (PAI-1)
und der tissue-type Plasminogenaktivator (t-PA) in vitro im Zellkulturüberstand
von konfluierend wachsenden humanen Nabelschnur-
Endothelzellen (HUVEC), die definiert und einheitlich hohen Feldstärken
eines 50 Hz-Feldes mit unterschiedlicher Impulsdauer ausgesetzt
wurden, mittels ELISA-Technik bestimmt werden. Zudem wurde
Thrombomodulin immunhistochemisch untersucht.
Methoden: Die HUVEC wurden bei insgesamt 5 Versuchsreihen pro Versuchsreihe
auf 5 Kulturschalen (9 _ 9 _ 2 cm) ausgesät. Eine Schale diente
jeweils als Kontrolle und unterlag nicht einer Stromzufuhr. In vier Schalen
wurden Feldstärken bis zu 60 V/cm appliziert. Die Anzahl der Strompakete
betrug 1, 10, 25 und 50 Impulse, die Impulsdauer jeweils 100 ms.
Um thermische Reaktionen auszuschließen, folgte nach jedem Impuls
eine Pause von 10 Sekunden. Die erste Probenentnahme für die ELISA-
Untersuchungen erfolgte unmittelbar nach Stromapplikation, weitere
nach 1, 2, 4, 8, 24, 48 und 72 Stunden. Gewebeproben für die Immunhistochemie
wurden unmittelbar nach Stromapplikation, nach 24, 48 und
72 Stunden gewonnen. Die statistische Auswertung erfolgte mittels Wilcoxon-Test
für Paardifferenzen. Die Signifikanz wurde auf dem 5-%-
Niveau (p