Untersuchungen zum Vorkommen und zur gesundheitlichen ...

Umweltmykologie GbR Berlin)
2.3.6.2 Konservierung in Micronic-Röhrchen (Universität Gießen) 40
2.3.6.3 Konservierung in Glycerinmedium (LGA) 41
2.3.7 Bestimmung der koloniebildenden Einheiten der Schimmelpilze 41
2.4 Molekularbiologische Methoden 41
2.4.1 DNA – Extraktion 41
2.4.1.1 DNA-Extraktion aus Reinkulturen 41
2.4.1.2 DNA-Extraktion aus Materialproben 43
2.4.1.3 DNA-Extraktion aus Kulturen der abgeschwemmten Nähragarplatten 44
2.4.2 Polymerase Kettenreaktion (PCR, Polymerase Chain Reaction) 44
2.4.2.1 Ansetzen der PCR 45
2.4.2.2 Agarosegelelektrophorese 50
2.4.3 SSCP (Single Strand Conformation Polymorphism – Einzelstrang
Konformationspolymorphismus)
50
2.4.3.1 Herstellen der einzelsträngigen DNA 51
2.4.3.2 Polyacrylamidgelelektrophorese 52
2.4.4 Klonierung 55
2.4.4.1 Durchführung der Klonierung 55
2.4.4.2 Konservierung der Klon-Kolonien 57
2.4.5 Sequenzierung durch Kettenabbruchverfahren
(Terminatorverfahren)
58
2.4.5.1 Auswertung der Sequenzen 58
2.5 Zellkulturversuche, Toxizitätstests 59
2.5.1 MTT - Zytotoxizitätstest 59
2.5.1.1 Auswahl der Materialproben und Teststämme 60
2.5.1.2 Vorbereitung der Materialproben und Teststämme 61
2.5.1.3 Zellkultur 61
2.5.1.4 Durchführung des MTT-Zytotoxizitätstests 61
2.5.1.5 Auswertung des MTT-Zytotoxizitätstests 63
2.5.2 Zellkulturtests zur Immunmodulation (TNF-α bzw. IL-6 Test) 63
2.5.2.1 Vorbereiten der Teststämme 64
2.5.2.2 Zellkulturen 65
2.5.2.3 Durchführung des Zellkulturtests 65
2.5.2.4 Auswertung des Zellkulturtests 65
4