Untersuchungen zum Vorkommen und zur gesundheitlichen ...

Alle Schritte der Silbernitratfärbung erfolgten in Metallwannen, die bei 20 rpm auf
einem Plattformschüttler (CAT, M. Zipperer, Staufen-Etzenbach) geschwenkt
wurden. Zum Anfärben der DNA im Gel wurde die Gelapparatur auseinandergebaut
und die Glasplatten voneinander getrennt. Das Gel, welches auf der größeren
Glasplatte haftet, wurde zunächst dreißig min in 300 ml 10 %iger Essigsäure
inkubiert, wodurch die DNA im Gel fixiert wurde. Anschließend wurde das Gel drei
mal fünf min mit je 300-400 ml Reinstwasser gewaschen. Während der Fixierung
wurden die Entwickler- und die Färbelösungen (Silbernitratlösung) in folgender
Zusammensetzung angesetzt:
Silbernitratlösung 2 : Silbernitrat 0,5 g
Reinstwasser 0,5 l
Formaldehyd 0,75 ml
Entwicklerlösung 3 Natriumcarbonat (wasserfrei) 10,34 g
Reinstwasser 0,5 l
Formaldehyd 1,0 ml
Natriumthiosulfat 0,5 ml
Im Anschluss wurde das Gel 30 min in der Silbernitratfärbelösung im Dunkeln
inkubiert. Anschließend wurde die Färbelösung abgeschüttet und ein weiterer
Waschgang mit 300-400 ml Reinstwasser für 10 Sekunden durchgeführt. Die
Rückseite der Glasplatte wurde außerdem mit VE-Wasser abgespült. Dann erfolgte
die Inkubation des Gels in der Entwicklerlösung bis zur gewünschten
Färbungsintensität in einer zweiten Metallwanne. Um die Färbung zu stoppen, wurde
das Gel für 4 min in 300-400 ml 10 %ige Essigsäure gelegt. Abschließend wurde das
Gel in einem Wasserbad (300 - 400 ml) für eine halbe Stunde gespült. Zum Trocknen
wurde das Gel aus der Wanne genommen und senkrecht stehend bei
2
Das Silbernitrat wurde in Wasser in einem 1 L Messbecher gelöst und mit Aluminiumfolie bedeckt im
Dunkeln gelagert. Das Formaldehyd wurde während des letzten Waschganges zur Lösung zugegeben
und auf einem Rührer (mit Magnetrührfisch) gemischt.
3
Für die Entwicklerlösung wurde das Natriumcarbonat in Wasser in einen 1 L Messbecher
eingewogen, auf einem Magnetrührer gemischt, mit Aluminiumfolie abgedeckt und bis zur
Verwendung in den Kühlraum gestellt. Zum Ende der Inkubation des Gels in Silbernitratlösung wurde
dann zur Entwicklerlösung noch 1 ml Formaldehyd und 0,5 ml Natriumthiosulfat pipettiert.
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