Untersuchungen zum Vorkommen und zur gesundheitlichen ...

gemischt. Das Gemisch wurde zwei min bei 95 °C im Heizblock inkubiert und
anschließend sofort mindestens drei min auf Eis gestellt.
2.4.3.2 Polyacrylamidgelelektrophorese
Zu Beginn wurden zwei Glasplatten (Abmessung 22 cm x 19,8 cm x 0,3 cm und 20
cm x 19,8 cm x 0,3 cm), sowie Abstandhalter (Spacer, 0,3 mm) und Klemmen mit
70 %igem Ethanol gereinigt und poliert (Kleenex-Tücher). Anschließend wurde die
kleinere der beiden Platten mit Sea-Spray, einer Anti-Haftbeschichtung (BioLogical,
Roth, Karlsruhe) eingerieben. Die größere Platte wurde mit Bindsilan-Lösung, einer
Haftbeschichtung bestehend aus Ethanol, Eisessig und Bindsilan (Bind Silan plus
one, Pharmacia Biotech, Sweden) versehen. Nach einer Einwirkzeit von ca. fünf min
wurden beide Platten erneut mit 70 %igen Ethanol abgerieben. Anschließend wurden
die beiden Glasplatten mit den jeweiligen Beschichtungen nach innen aufeinander
gelegt. Durch die Spacer am Rand wurde die Geldicke auf 0,3 mm justiert und mit
Klemmen fixiert (Biorad, München). Zur Herstellung der Polyacrylamidgele wurden
die in Tab. 7 aufgeführten Lösungen in einem kleinen Becherglas auf einem
Magnetrührer mit Magnetrührfisch in angegebener Reihenfolge zusammen pipettiert:
Tab. 7: Polyarcylamid - Gelmatrize
Reinstwasser
Actinomyceten-Primer:
Com2xf/ Ac1186r
0,725x MDE, mit 10 % Formamid
6,69 ml
10x Formamid 1,5 g
2x MDE-Lösung 5,44 ml
10xTBE 1,5 ml
TEMED 6 µl
40% APS 15 µl
- MDE (Mutation Detection Enhancement – Lösung, Cambrex, Bio Science
Pockland, Inc. Rockland, USA),
- TBE (Tris-Borat-EDTA-Puffer: 54 g Tris base + 27,5 g Borsäure
+ 20 ml 0,5 M EDTA, pH 8)
- Temed (N, N, N´, N´ -Tetramethylethylendiamin): Katalysator der
Polymerisation
- APS (Ammoniumpersulfat, 10 %ig): Katalysator der Polymerisation
Nach Zugabe der APS-Lösung wurde das Gel sofort gegossen, um eine frühzeitige
Polymerisation zu verhindern. Zum Gießen des Gels wurde das Gemisch mit einer
60 ml Spritze (Becton Dickinson, Plastipak) aufgezogen und so zwischen die beiden
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