Untersuchungen zum Vorkommen und zur gesundheitlichen ...

Seitenketten wird das Chinonsystem als taxonomischer Marker zur Charakterisierung
von Bakterien verwendet. Innerhalb der Actinomyceten sind die vorkommenden
Menachinonemuster sehr vielfältig und oftmals charakteristisch für die einzelnen
Gattungen.
Die Analyse der Menachinone erfolgte nach Collins et al. (1977). Die Isolate wurden
24 h bei 28 °C in Medium M79 (siehe 2.3.1) kultiviert. Die gewachsenen Kulturen
wurden im Autoklaven abgetötet, nach Abkühlung wurde die Biomasse
abzentrifugiert und dreimal mit Aqua dest. gewaschen. Anschließend erfolgte die
Lyophilisierung der Biomasse. Die lyophilisierte Biomasse wurde gewogen und pro
Gramm Trockenmasse wurden 30 ml Chloroform/Methanol-Gemisch (2:1)
dazugegeben und über Nacht geschüttelt. Anschließend wurde das Gemisch mit
einem Papierfilter filtriert und anschließend bei 40 °C bis zur Trockne eingeengt. Der
Rückstand wurde in 1 ml Chloroform/Methanol-Gemisch (2:1) aufgenommen und als
breite Bande auf einer Silufol-Chromatographie-Platte (Alugram SIL G/UV254 von
Macherey-Nagel) aufgetragen. Als Standard wurde Vitamin K1 aufgetragen. Nach
ca. 2 h Chromatographie mit dem Laufmittel Hexan/Diethylether (55 ml+5 ml) wurde
die unter UV-Licht sichtbare Bande der Menachinone markiert, das Kieselgel von der
markierten Bande ausgeschabt und mit 0,5-0,8 ml HPLC-Laufmittel (65 ml
Acetonitril+35 ml iso-Propanol) aufgenommen. Vor der HPLC-Analyse wurde die
Probe filtriert (ultrafree centrifugal filter unit der Firma Millipore). Für die Analyse
wurde eine RP18 Trennsäule (Nucleosil HPLC-Säule 120 5C18, Macherey-Nagel)
verwendet, als Eluent Acetonitril+ iso-Propanol (65% ACN, 35% iso-PrOH). Die
Probe wurde bei 269 nm analysiert und anhand von Referenzspektren ausgewertet.
Fettsäuren
Aufgrund der unterschiedlichen Struktur der Fettsäuren (Variationen in der
Kettenlänge, Vorhandensein von verzweigtkettigen (iso-, anteiso-) Fettsäuren,
gesättigter und ungesättigter Fettsäuren, von Hydroxygruppen an Position 2 und 3)
und der relativen Zusammensetzung der Fettsäuren eines Mikroorganismus ist durch
den Vergleich mit den Fettsäuremustern von Referenzstämmen oftmals eine
Zuordnung von Isolaten zu bekannten Gattungen oder Arten möglich. Fettsäuren der
Zell-Lipide können als Methylester gaschromatographisch getrennt werden.
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