Untersuchungen zum Vorkommen und zur gesundheitlichen ...

Die DC-Platte wurde anschließend in die DC-Trennkammer gestellt, die in einer
Höhe von ca. 0,5 cm mit dem Laufmittel nach Takahashi et al., 1983 (Mischung aus
64 ml Methanol, 14 ml Aqua dest. Wasser, 2 ml 30%ige Salzsäure und 8 ml Pyridin)
gefüllt war. Die DC-Platte verblieb in der DC-Trennkammer, bis sich die
Lösungsmittelfront in ca. 1 cm Abstand von der oberen Kante der DC-Platte befand
(ca. 2 h). Die DC-Platte wurde aus der DC-Trennkammer herausgenommen, die
Lösungsmittelfront wurde angezeichnet und das Laufmittel wurde im Abzug
abgedampft (ca. 30 min.).
Danach wurde die DC-Platte im Abzug mit 5 bis 10 ml Ninhydrin-Reagenz (125 mg
Ninhydrin, 50 ml Aceton, 3,5 ml konzentrierte Essigsäure) besprüht und nochmals für
5 min auf 100 °C erhitzt. Die DAP wird als dunkel grünbrauner Fleck, der sich nach
längerer Zeit gelb färbt, auf der DC Platte sichtbar. Mit Hilfe der DAP-Referenzen
(meso-Isomer Rf 0,20 bis 0,25 LL-Isomer Rf 0,25 bis 0,30) erfolgt die Identifizierung
der DAP in den Proben.
2.3.5.5 Chemotaxonomische Methoden zum Nachweis von Actinomyceten
Die Chemotaxonomie umfasst die Analyse von Zellbestandteilen wie Fettsäuren,
polare Lipide, Mykolsäuren Polyamine, Chinone, Zucker, Diaminosäure- und
Aminosäurezusammensetzung der Zellwand sowie von Gesamtzellproteinen (Busse
et al., 1996). In den verschiedenen Gattungen der Actinomyceten sind diese
taxonomischen Merkmale unterschiedlich charakteristisch ausgeprägt. Deshalb
werden für die Zuordnung unbekannter Isolate diese Markermoleküle bestimmt und
für die Identifizierung mit herangezogen.
Für einen Teil der Isolate im Rahmen dieses Projektes wurden neben der
Identifizierung der Diaminosäure der Zellwand die Analyse der Menachinone,
Mycolsäuren und Fettsäuren durchgeführt sowie das Enzymmuster mit Hilfe des API-
ZYM-Testes bestimmt.
Menachinone
Sowohl bei den Prokaryonten als auch bei den Eukaryonten sind Chinone als
Bestandteil der Zytoplasmamembranen verantwortlich für den Elektronentransport.
Aufgrund der Ausprägung unterschiedlicher Typen von Chinonen (Ubichinone bei
Gram negativen Bakterien, Menachinone vorwiegend bei Gram positiven Bakterien)
und der unterschiedlichen Länge der gesättigten oder ungesättigten isoprenoiden
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