Untersuchungen zum Vorkommen und zur gesundheitlichen ...

3.2.2 SSCP (Singel Strand Conformation Polymorphism)
Die SSCP-Fingerprintmethode wurde einerseits verwendet, um die Diversität der
Actinomycetenkolonien auf den unterschiedlichen Nährmedien zu untersuchen,
andererseits um die in den verschiedenen Proben vorkommenden
Actinomycetenpopulationen miteinander zu vergleichen.
3.2.2.1 SSCP-Analyse der abgeschwemmten Nähragarplatten unter
Verwendung Actinomyceten spezifischer Primer
Die SSCP Analyse der aus den kultivierten Actinomyceten-Spezies generierten
Bandenmuster (siehe Abschnitt 2.4.3) zeigte sowohl in Abhängigkeit der
verwendeten Medien als auch in Abhängigkeit der Verdünnungsstufen deutliche
Unterschiede in den „Fingerprintmustern“. Diese Ergebnisse deuten darauf hin, dass
die Diversität der kultivierbaren Actinomyceten bei paralleler Verwendung
verschiedener Nährmedien und dem Einsatz unterschiedlicher Verdünnungsstufen
ansteigt.
BHI G/A Std G Gauze G/A CMA Difco BHI 28 °C Std G
37 °C unverd.
10 0 10 0 10 0 10 -1 10 -2 10 -3 10 0 10 -1 10 -2 10 -3 10 0 10 -1 10 -2 10 -3 10 0 10 -1 10 -2 10 -3 10 0 10 -1 10 -2 10 -3
Abb. 45: SSCP-PA-Gelbild nach elektrophoretischer Auftrennung der aus den
abgeschwemmten Nährmedienplatten generierten SSCP-PCR-Produkte. Die PCR
wurde unter Verwendung spezifischer Actinomyceten-Primer durchgeführt.
Aufgetragen wurden ein Standardgemisch aus Reinkulturen (Std G), SSCP-PCR-
Produkte (650 ng), die auf unterschiedlichen Nährmedien gewachsenen
Kulturengemische (CMA, Difco, BHI, Gauze und G/A) unterschiedliche
Verdünnungsstufen, (10 0 -10 -3 ) Ein Bandenmuster beruht jeweils auf den PCR-
Produkten, deren molekularer Aufarbeitung und anschließender SSCP-Analyse.
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