Untersuchungen zum Vorkommen und zur gesundheitlichen ...
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3.1.5. Bestimmung von Enzymmustern mit dem API-ZYM System<br />
Zu Beginn des Projektes wurden 33 Isolate mit den API-ZYM-Teststreifen mit dem<br />
Ziel untersucht, ob das Nährmedium, von denen die Stämme isoliert wurden, einen<br />
Einfluss auf die enzymatischen Leistungen der Stämme hat. Es wurden Isolate der<br />
Gattungen Amycolatopsis (3), Pseudonocardia (3) <strong>und</strong> Streptomyces (26) untersucht<br />
(s. Anhang). Besonders die Streptomyceten wiesen ein vielfältiges Enzymspektrum<br />
auf. Nur 10 Streptomyces-Isolate wiesen vier verschiedene Enzymspektren auf. Drei<br />
Isolate waren identisch in ihrer Esteraseaktivität, drei in ihrer α-<br />
Galactosidaseaktivität, zwei in ihrer α- <strong>und</strong> β-Galactosidaseaktivität <strong>und</strong> zwei Isolate<br />
in ihrer Esterase- <strong>und</strong> Lipaseaktivität.<br />
Die drei Amycolatopsis- Isolate wurden von Gauze-Agar (2) bzw. Actinomyceten-<br />
Agar isoliert. Die beiden Isolate vom Gauze-Agar unterschieden sich in 3 Enzymen.<br />
Alle bildeten die Enzyme Esterase, Lipase <strong>und</strong> Valine arylamidase, waren aber<br />
unterschiedlich bezüglich der Bildung der Esterase, β-Glucosidase <strong>und</strong> β-<br />
Glucuronidase.<br />
Die drei untersuchten Pseudonocardia-Isolate waren in ihrer Enzymaktivität sehr<br />
ähnlich. Der von CM-Agar isolierte Stamm unterschied sich von den zwei von Gauze-<br />
Agar isolierten in der fehlenden Bildung von β-Glucosidase.<br />
Da die Isolate sehr unterschiedliche Enzymmuster aufwiesen, die weder<br />
Rückschlüsse auf das Nährmedium zuließen noch eine eindeutige Gruppierung<br />
aufgr<strong>und</strong> des Taxons erlaubten, wurden diese Tests nicht weitergeführt.<br />
3.2 Kultivierungsunabhängige <strong>Untersuchungen</strong><br />
3.2.1 Klonierung<br />
Die Bearbeitung der Klone erfolgte wie in Abschnitt 2.4.4 beschrieben.<br />
Von insgesamt 1600 generierten Klonen aus 16 Proben konnten 694 16S rRNA Gen-<br />
Inserts (45%) in die Klasse der Actinobacteria eingeordnet werden. Anhand der<br />
BLAST ® -Suche wurden die analysierten Klonsequenzen 52 Gattungen der Klasse<br />
der Actinobacteria zugeordnet (Tab. 21). Eine weitere Einordnung der 16S rRNA-<br />
Gen-Inserts war aufgr<strong>und</strong> der geringen Länge der Sequenzen nicht möglich.<br />
Insgesamt wurden jedoch Vertreter der Gattungen Amycolatopsis, Arthrobacter,<br />
Jiangella, Nocardioides, Promicromonospora, Pseudonocardia, Saccharopolyspora<br />
<strong>und</strong> Streptomyces am häufigsten detektiert. Bei 17 von 52 ermittelten Gattungen<br />
konnte jeweils nur ein Vertreter detektiert werden (Tetrasphaera, Stackebrandtia,<br />
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