Analytik von Aminosäuren und biogenen Aminen in fermentierten ...

3 OPTIMIERUNG DER HPLC- UND GC-METHODEN 64
das aus der Reaktion von PNZ-Cl und seinem Alkohol entsteht. Bei Put, Trm, Pea
und Him “B“ konnte eine Basislinientrennung erreicht werden. Probleme stellten sich
bei Him “A“ bzw. Spm heraus. Him “A“ eluiert in einem Bereich in dem auch die
PNZ-Derivate der Aminosäuren, vor allem von Orn und Lys, liegen können, was so-
mit die Bestimmung diese Aminderivats erschwerte. Aus diesem Grund wurde in der
Auswertung der Chromatogramme ausschließlich Him “B“ integriert. Spm eluierte
erst von der Säule, wenn der Acetonitril-Anteil im Eluentengemisch bei ca. 75 % lag.
Da hierbei auch unpolare Störsubstanzen (Verunreinigungen) von der Säule gespült
wurden, war die Integration des Spm in diesem Bereich erschwert. Die Amine Ocp,
Cad, Dhx, Tym und Spd werden nahezu bis zur Basislinie getrennt.
Tab. 3-8: Grandientenprogramm zur Trennung der PNZ-Cl-Derivate der biogenen
Amine auf einer Superspher 100 RP-18e-Säule (250 mm x
4 mm I.D. Merck). Eluent A und C: Natriumacetat (beide 100 mM,
pH 6,1 bzw. pH 4,3), Eluent B: MeCN (100 %).
Zeit
[min]
Eluent A
[%]
Eluent B
[%]
Eluent C
[%]
Flußrate
[ml/min]
0,0 57,0 43,0 0,0 0,05
0,5 57,0 43,0 0,0 0,8
15,5 57,0 43,0 0,0 0,8
16,0 0,0 43,0 57,0 0,8
18,0 0,0 43,0 57,0 0,8
19,0 0,0 32,0 68,0 0,8
34,0 0,0 42,0 58,0 0,8
43,0 0,0 42,0 58,0 0,8
44,0 0,0 47,0 53,0 0,8
62,0 0,0 55,0 45,0 0,8
63,0 0,0 100,0 0,0 1,3
68,0 0,0 100,0 0,0 1,3
69,0 57,0 43,0 0,0 1,3
75,0 57,0 43,0 0,0 1,3
75,1 57,0 43,0 0,0 0,05