Analytik von Aminosäuren und biogenen Aminen in fermentierten ...

Absorption (mAU)
20
15
10
5
0
3 OPTIMIERUNG DER HPLC- UND GC-METHODEN 63
A
B
Him A
Put
Trm
Pea
Oct
Cad
10 20 30 40 50 60
C
Dhx
Him C,Seo
Him B
Tym
Spd
Spm
Retentionszeit (min)
Abb. 3-9: HPLC-Chromatogramm eines Standards (100 μM) nach Derivatisierung
mit PNZ-Cl. Chromatographische Bedingungen siehe Kap.
3.4.1; A: PNZ-Cl-Derivate von Gly, B: p-Nitrobenzylalkohol, C: Carbonat
aus PNZ-Cl und B
Insgesamt 11 biogene Amine konnten einschließlich des internen Standards (Dhx)
mit dieser Methode bestimmt werden. Das Chromatogramm wies für Him drei Peaks
auf und für die restlichen Amine jeweils einen Peak. Him “C“ coeluierte dabei zu-
sammen mit Seo, so daß Seo nicht integriert werden konnte.
Die Elutionsfolge war Him “A“, Put, Trm, Pea, Ocp, Cad, Dhx, Him “B“, Him C/Seo,
Tym, Spd und Spm. Bei Peak “A“ handelt es sich um das PNZ-Derivate von Glycin.
Da dieses Derivat bereits in den ersten Minuten der Analyse eluiert, wird die Trenn-
ung nicht gestört. Somit konnte Glycin gut als Scavenger-Reagenz eingesetzt wer-
den.
Der als “B“ bezeichnete Peak stellt ein Hydrolyse-Produkt des PNZ-Cl,
p-Nitrobenzylalkohol, dar. Zwischen diesen beiden Peaks befinden sich noch weitere
vom Reagenz herrührende Peaks. Der Reagenzpeak “C“ stellt das Carbonat dar,