Analytik von Aminosäuren und biogenen Aminen in fermentierten ...

3 OPTIMIERUNG DER HPLC- UND GC-METHODEN 61
3.4 para-Nitrobenzyloxycarbonylchlorid zur Bestimmung von
biogenen Aminen mittels HPLC
p-Nitrobenzyloxycarbonyl-chlorid (PNZ-Cl) reagiert mit primären und sekundären
Aminen zu den entsprechenden p-Nitrobenzylcarbamaten, welche im UV-Bereich
bestimmt werden können [170]. Überschüssiges PNZ-Cl muß nach der Reaktion
entfernt werden, um eine Interaktion des aggressiven Chlorameisensäureesters mit
der stationären Phase zu verhindern. Aus dieser Reaktion könnten sich irreversible
Schäden am Säulenmaterial ergeben, die zu einer Verringerung der Lebensdauer
der Trennsäule führen. Um dies zu verhindern, wurde Glycin als Scavengerreagenz
eingesetzt. Glycin hat den Vorteil, daß sein PNZ-Cl-Derivat bereits in den ersten Mi-
nuten der Analyse eluiert. Somit wurde die Bestimmung der untersuchten Aminderi-
vate nicht gestört.
3.4.1 Optimierung der chromatographischen Trennungen
3.4.1.1 Manuelle Vorsäulenderivatisierung der biogenen Amine
Die Vorsäulenderivatisierung mit PNZ-Cl der Amine wurde manuell wie folgt durch-
geführt (Abb. 3-8). Dabei wurden der Probe Boratpuffer (0,5 M, pH 8,5), PNZ-Cl-
Reagenz zugesetzt. Nach einer Derivatisierungszeit von 10 min erfolgte die Zugabe
des Scavengers Glycin. Anschließend wurden 20 μl der verdünnten Lösung in die
HPLC-Apparatur injiziert [171,173].