Analytik von Aminosäuren und biogenen Aminen in fermentierten ...

3 OPTIMIERUNG DER HPLC- UND GC-METHODEN 59
3.3.2.1.3 Detektion der Aminosäuren
Die Fluoreszenzspektren des Reagenzes bzw. seiner Derivate ergaben Maxima bei
einer Anregungswellenlänge von 230 nm und einer Emissionswellenlänge von 445
nm. Als Signalverstärkung wurde die Empfindlichkeit bei low eingestellt.
3.3.2.2 Quantifizierung der Aminosäuren
Zur Quantifizierung der AS-Gehalte in den Proben wurden anhand der Injektion der
sechs Standardgemische von 0,5; 1,0; 2,5; 5,0; 10,0, sowie 20,0 μM die Regressi-
onsgeraden (y = ax + b) zu jeder AS über Auswertung der jeweiligen Peakflächen
bestimmt. Aufgrund der hohen Empfindlichkeit der Fluoreszenz wurden bei diesem
LaChrom System niedrigere Standardkonzentrationen als die bei HP System ge-
wählt. Die Gleichungen der Regressionsgeraden und die Bestimmtheitsmaße sind in
Anhang aufgeführt.
3.3.2.3 Nachweis- und Bestimmungsgrenzen
Die Nachweisgrenze der einzelnen AS (siehe Kap. 3.2.3) in absolut injizierter Stoff-
menge [pmol] sind für die OPA/IBLC- bzw. IBDC-Methoden in den Tabelle 3-7 dar-
gestellt. In der vorliegenden Methode wurde als Bestimmungsgrenze für jede Ami-
nosäure 0,5 μM festgelegt.