Analytik von Aminosäuren und biogenen Aminen in fermentierten ...

3 OPTIMIERUNG DER HPLC- UND GC-METHODEN 57
3.3.2.1.2 Chromatographische Trennungen
Die Trennung der untersuchten Aminosäuren erfolgte mittels eines binären Gra-
dientensystems auf einer NovaPak C18-Säule bei einer Säulenofentemperatur von
25 ° C. Das Gradientenprogramm zur Trennung der OPA/IBL(D)C-Derivate wurde in
Tabelle 3-6 dargestellt. Als Eluent A diente dabei ein Natriumacetatpuffer (20 mM,
pH 6,15). Eluent B bestand aus einem Gemisch von MeOH und MeCN (12/1, v/v).
Die mit diesem Gradientenprogramm erhaltene Standardchromatogramme sind in
Abbildung 3-7 gezeigt.
Tab. 3-6: Grandientenprogramm zur Trennung der OPA/IBL(D)C-Derivate der
Aminosäuren auf einer NovaPak C18 RP-Säule (300 mm x 3,9 mm
I.D. Waters). Eluent A: Natriumacetat (20 mM, pH 6,15), Eluent B:
Zeit
[min]
MeOH/MeCN (12/1,v/v).
Eluent A
[%]
Eluent B
[%]
Flußrate
[ml/min]
0,0 100,0 0,0 0,05
0,1 100,0 0,0 1,0
78,0 49,0 51,0 1,0
83,0 49,0 51,0 1,0
83,1 0,0 100,0 1,0
93,0 0,0 100,0 1,0
93,1 100,0 0,0 1,0
98,0 100,0 0,0 1,0
98,1 100,0 0,0 0,05