Analytik von Aminosäuren und biogenen Aminen in fermentierten ...

3 OPTIMIERUNG DER HPLC- UND GC-METHODEN 51
L-Enantiomeren - sind in der Regel mehrere chromatographische Läufe notwendig,
um zu exakten, quantitativen Ergebnissen zu gelangen.
Im Rahmen dieser Arbeit wurden 2 HPLC-Systeme HP 1090 L von Hewlett Packard
und LaChrom von Merck Hitachi für die chirale AS-Analyse nach Derivatisierung mit
OPA und N-Isobutyryl-L/D-cystein (IBL/DC) eingesetzt. Die von BRÜCKNER et al.
[165,166] entwickelte OPA/IBL(D)C-Methode wurde zuerst bei System HP 1090 L
optimiert und die selbe Methode durch Modifizierung einzelner chromatographischer
Parameter auf das LaChrom System übertragen. Die Unterschiede der Methoden
werden in Kapitel 5.2.6 näher diskutiert.
3.3.1 HP 1090 L System
3.3.1.1 Optimierung der chromatographischen Trennungen
3.3.1.1.1 Vollautomatisierte Vorsäulenderivatisierung der Amino-
säuren
Die Derivatisierung der AS erfolgte unter Verwendung eines programmierbaren Au-
tosamplers. Dabei wurden 5 μl Natriumboratpuffer, 1 μl OPA/IBLC bzw. -IBDC und 1
μl Probe nacheinander aufgezogen. In der Injektionsschleife wurde die Lösung mit 5
Mischzyklen (entsprechend 3 min Derivatisierungszeit) gemischt und dann 7 μl des
Aliquotes der Derivate in die HPLC-Apparatur injiziert.
3.3.1.1.2 Chromatographische Trennungen
Die Trennung der untersuchten Aminosäuren erfolgte mittels eines binären Gra-
dientensystems auf einer Hypersil ODS2-Säule bei einer Säulenofentemperatur von
25 ° C. Das Gradientenprogramm zur Trennung der OPA/IBL(D)C-Derivate wurde in