Analytik von Aminosäuren und biogenen Aminen in fermentierten ...

3 OPTIMIERUNG DER HPLC- UND GC-METHODEN 49
Tab. 3-2: Detektionsprogramm des FLD für die OPA/MPA- und die FMOC-Cl-
Derivate innerhalb einer Trennung
Zeit
[min]
Exitation
[nm]
Emission
[nm]
FLD-
Empfindlichkeit
0,0 330 445 low
64,0 330 445 low
65,0 263 312 low
75,0 263 312 low
76,0 330 330 low
3.2.2 Quantifizierung der Aminosäuren
Zur Quantifizierung der AS-Gehalte in den Proben wurden anhand der Injektion der
fünf Standardgemische von 1; 5; 25; 50,0 sowie 200,0 μM die Regressionsgeraden
(y = ax + b) zu jeder AS über Auswertung der jeweiligen Peakflächen bestimmt. Die
Gleichungen der Regressionsgeraden und die Bestimmtheitsmaße sind in Anhang
aufgeführt.
3.2.3 Nachweis- und Bestimmungsgrenzen
Die Nachweisgrenze entspricht der niedrigsten Konzentration, die noch vom Blank
zu unterscheiden ist. Dabei sollte das Signal zu Rausch Verhältnis mindestens 3:1
betragen, um eine Abgrenzung überhaupt möglich zu machen [169]. Die Nachweis-
grenze für die OPA/MPA-FMOC-Cl liegt bei 0,06 – 1,31 pmol absolut injizierter Men-
ge (Tab. 3-3). Die Bestimmungsgrenze wurde durch den kleinsten Kalibrierungs-
standard festgesetzt. Um eine quantitative Aussage machen zu können, sollte sich
das Signal zu Rausch Verhältnis mindestens 5:1 befinden. In der vorliegenden Me-
thode wurde als Bestimmungsgrenze für jede Aminosäure 1,0 μM festgelegt.