Analytik von Aminosäuren und biogenen Aminen in fermentierten ...

3 OPTIMIERUNG DER HPLC- UND GC-METHODEN 47
3.2.1.2 Chromatographische Trennung
Die Trennung der untersuchten Aminosäuren erfolgte mittels eines binären Gra-
dientensystems auf einer NovaPak C18-Säule bei einer Säulenofentemperatur von
25 ° C. Das Gradientenprogramm zur Trennung der OPA/MPA-FMOC-Derivate wur-
de in Tabelle 3-1 dargestellt. Als Eluent A diente dabei ein Natriumacetatpuffer
(0,1 M, pH 6,5) mit Zusatz von TEA. Eluent B war reines Acetonitril. Das mit diesem
Gradientenprogramm erhaltene Standardchromatogramm ist in Abbildung 3-4 ge-
zeigt.
Diese Methode ermöglicht die Trennung aller proteinogenen AS mit Ausnahme von
Cyst(e)in sowie der nichtproteinogenen AS Cit, Tau, Gaba sowie Orn unter Verwen-
dung eines Gradienten innerhalb von 70 min in einem chromatographischen Lauf.
Zusätzlich wurden interne Standards Nva für primären AS und Sar für sekundären
AS getrennt.
Intensität (mV)
2000
1500
1000
500
Asp
Glu
Asn
Ser
Gln His
Thr
Gly
Arg
Cit
Ala
Tau
Gaba
0 10 20 30 40 50 60 70
Retentionszeit (min)
Tyr
Val
Met
Nva
Ile
Trp
Phe
Leu
Orn
Lys
Abb. 3-4: HPLC-Chromatogramm eines Standards (100 μM) nach Derivatisierung
mit OPA/MPA-FMOC-Cl. Chromatographische Bedingungen siehe Kap.
3.2.1
Sar
Pro