Analytik von Aminosäuren und biogenen Aminen in fermentierten ...

3 OPTIMIERUNG DER HPLC- UND GC-METHODEN 44
insgesamt 36 AS einschließlich sekundären AS in einem chromatographischen Lauf
getrennt werden konnten.
O
CH CH2 O C
Cl + HN
COOH
CH CH2 O C
FMOC-Cl Prolin Carbamatderivat
-HCl
O
N
COOH
Abb. 3.2: Reaktionsschema der AS mit FMOC-Cl zur Erfassung von sekundären
AS (am Beispiel Pro)
Die erste Beobachtung von ASWAD [155], daß DL-Asn nach der Derivatisierung mit
OPA und N-Acetyl-L-cystein (Ac-L-Cys) als chiralem Thiol zu diastereomeren Isoin-
dolderivate umgewandelt und mittels HPLC getrennt wurden, brachte verschiedene
Varianten von chiralen Thiolverbindung zur AS-Analytik zur breiten Anwendung (indi-
rekte Methode) [156-158]. Als weitere chirale Thiolvarianten werden tert.-
Butyloxycarbonyl-L-cystein (Boc-Cys) [159,160], N-Acetyl-L-penicillamin (NAP) [161]
sowie einige Thiozucker z.B. 2,3,4,6-Tetra-O-acetyl-1-thio-β-D-glucopy-ranosid
(TATG) [89], 1-Thio-β-D-glucose [162], 1-Thio-β-D-galactose [163] oder 1-Thio-β-D-
mannose eingesetzt [164].
BRÜCKNER et al. [165-167] untersuchte eine Reihe der N-Acyl-Cystein-Homologe,
von N-Acetyl bis N-Octanoyl-L-cystein, zur Eignung als chiralen Reagenz zur enan-
tiomeren AS-Analytik. Darüber hinaus gelang die bisher beste Gesamttrennung von
17 proteinogenen AS und ihrer entsprechenden D-Enantiomere sowie Gly und Gaba
nach Vorsäulenderivatisierung mit OPA und N-Isobutyryl-L- bzw. D-cystein [166].