Analytik von Aminosäuren und biogenen Aminen in fermentierten ...
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2 MATERIAL 41<br />
100 ml R<strong>und</strong>kolben eluiert <strong>und</strong> am Rotationsverdampfer unter Vakuum bei e<strong>in</strong>er<br />
Temperatur <strong>von</strong> 40 ° C zur Trockene e<strong>in</strong>geengt. Der trockene <strong>Am<strong>in</strong>osäuren</strong>rückstand<br />
wird anschließend <strong>in</strong> 5 ml MKB-Gemisch aufgenommen <strong>und</strong> Aliquote hier<strong>von</strong> der<br />
<strong>Am<strong>in</strong>osäuren</strong>analyse mittels HPLC zugeführt. Für die Bestimmung mittels GC wurde<br />
der Rückstand <strong>in</strong> 1 ml 0,1 M HCl aufgenommen, nach Überführung <strong>in</strong> e<strong>in</strong> “Reacti-<br />
Vial“ unter Stickstoffstrom zur Trockene e<strong>in</strong>geengt <strong>und</strong> dann der Derivatisierung zu-<br />
geführt.<br />
2.5.4 Aufarbeitung der Proben zur Analyse der <strong>biogenen</strong> Am<strong>in</strong>e<br />
mittels HPLC<br />
1 ml Probe wurde nach Zugabe <strong>von</strong> 50 μl Dhx (10 μM) als <strong>in</strong>terner Standard <strong>und</strong> 0,5<br />
ml EtOH zur Verbesserung der Prote<strong>in</strong>ausfällung mit 0,1 M HCl auf 10 ml aufgefüllt<br />
(Verdünnung 1:10). Danach wurde bei 3500 x g für 20 m<strong>in</strong> zentrifugiert <strong>und</strong> aus die-<br />
sem Überstand 20 μl für die Derivatisierung entnommen.
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