Analytik von Aminosäuren und biogenen Aminen in fermentierten ...

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2.5.2 Aufarbeitung der Proben zur Analyse mittels GC
Es wurde als interner Standard 100 μl L-Nle (10 mM) verwendet. Das weitere Vor-
gehen entspricht den Angaben im Abschnitt 2.4.2.1. Nach Aufreinigung über einem
Kationenaustauscher wurde das Eluat am Rotationsverdampfer bis zur Trockene im
Vakuum eingeengt. Der Rückstand wurde in 0,1 M HCl gelöst und in ein “Reacti-
Vial“ überführt. Anschließend wurde unter Stickstoffstrom zur Trockene eingeengt
und dann die Probe der Derivatisierung zugeführt.
2.5.3 Isolierung von freien Aminosäuren mittels Ionenaustausch-
chromatographie
Der Ionenaustausch wurde mit einem stark sauren Kationenaustauscherharz vorge-
nommen: Dowex 50W X 8, 200-400 mesh, H + -Form
Regenerierung
Der Kationenaustauscher wurde mit den jeweils fünffachen Volumina der folgenden
Spülflüssigkeiten in einem Chromatographierohr vorbereitet:
1. Bidest. Wasser
2. 2 M NaOH
3. Bidest. Wasser
4. 2 M HCl
5. Bidest. Wasser
6. Aufbewahrung in braunen Flaschen unter 0,1 M HCl
Ionenaustauschchromatographie (Durchführung)
Die Kationenaustauschersäule wurde zuerst zur Neutralisierung des Säulefüllmateri-
als mit 1 ml bidest. Wasser fünfmal gewaschen. Die aufgearbeiteten Probenlösun-
gen einschließlich der pH-Einstellung auf 2,3 wurden dann jeweils auf die Säule (5 x
1 cm Bettvolumen) gegeben. Nach fünfmaligem Waschen mit 1 ml bidest. Wasser
wurden die gebundenen Aminosäuren mit ca. 5 ml 4 M Ammoniaklösung in einen