Analytik von Aminosäuren und biogenen Aminen in fermentierten ...

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2.5 Aufarbeitung der Proben zur Analyse mittels HPLC und GC
2.5.1 Aufarbeitung zur Analyse der Aminosäuren mittels HPLC
2.5.1.1 Fettfreie Proben: Sojasaucen, Sake
Zur Analyse wurde jede Probe nach dem gleichen Arbeitsschema zweimal aufgear-
beitet. Die Aufarbeitungen der fettfreien Proben sind in Abbildung 2-1 als Fließdia-
gramm dargestellt. Von den Sojasaucen wurden nach Zugabe von jeweils 100 μl
internem Standard Nva (1 mM) und Sar (1 mM) für achirale AS-Analyse sowie L-Abu
(100 mM) für chirale Analyse mit 0,01 M HCl auf 10 ml verdünnt und anschließend
bei 3500 x g für 20 min zentrifugiert. Der Überstand wurde mit 4 M HCl auf pH 2,3
eingestellt und 1 ml davon über einen mit DOWEX 50W X8-400 gefüllten Kationen-
austauscher aufgereinigt (siehe Kap. 2.5.3). Im Falle der Sake wurde nach dem sel-
ben Schema wie Sojasaucen ohne Zentrifugierung aufgearbeitet.
2.5.1.2 Fetthaltige Proben: Sojabohnen, Sojabohnenkoji, Miso,
Pepperonipasten, Fischsaucen
Etwa 1 g Probe und 30 ml 70 % Ethanol wurden 45 min gerührt und anschließend
bei 3500 x g für 20 min zentrifugiert. Der klare Überstand wurde in einen 100 ml
Schütteltrichter überführt und 3 mal mit je 30 ml n-Hexan extrahiert. Die organischen
Phasen wurden verworfen und der wäßrige Rückstand am Rotationsverdampfer bis
zur Trockene eingeengt. Der Rückstand wurde in 0,01 M HCl gelöst und erneut zen-
trifugiert. Der Überstand wurde mit 4 M HCl auf pH 2,3 eingestellt und über einem
mit DOWEX 50W X8-400 gefüllten Kationenaustauscher aufgereinigt (siehe Kap.
2.5.3). Die Aufarbeitungen der fetthaltigen Proben sind in Abbildung 2-2 als Fließ-
diagramm dargestellt.