Analytik von Aminosäuren und biogenen Aminen in fermentierten ...

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2.3 Herstellung von Lösungen und Reagenzien
2.3.1 OPA/MPA-FMOC-Cl-Methode
2.3.1.1 Aminosäurestammlösungen und Standardgemische
OPA/MPA-FMOC-Cl-Methode
Zur Herstellung der Aminosäurestammlösungen wurde L-Aminosäurenlösung (Ami-
no Acid Standard H, im folgenden Standard H) von Pierce (Rockford, IL, USA) ver-
wendet (siehe Kap. 2.2.1). Zusätzlich wurden DL-Cit, DL-Orn, Tau und Gaba abge-
wogen und in Gemisch von MeOH und Kaliumboratpuffer (0,5 M, pH 10,0) (80:20,
v:v) (MKB) gelöst, so daß eine Stammlösung mit der Endkonzentration von 2,5 mM
erreicht wurde. DL-Asn, DL-Gln sowie DL-Trp wurden wegen ihrer Hydrolyse- bzw.
Säureempfindlichkeit in bidest. Wasser gelöst. Die Standardgemische wurden durch
Verdünnung der Stammlösungen mit MKB in den Konzentrationen 1, 5, 25, 50 und
200 μM hergestellt. Als interner Standard wurden Nva und Sar verwendet. Um eine
Konzentration von 1,0 mM zu erhalten, wurden 1,17 mg Nva und 0,89 mg Sar ein-
gewogen und anschließend mit MKB auf 10 ml aufgefüllt. Alle Stammlösungen und
Standardgemische wurden bei -18 ° C aufbewahrt.
2.3.1.2 Reagenzien für OPA/MPA-FMOC-Cl-Derivate
Kaliumboratpuffer (0,5 M, pH 10,0)
Zur Herstellung eines 0,5 M Kaliumboratpuffers wurden 3,0915 g Borsäure in 90 ml
bidest. Wasser gelöst. Der Ansatz wurde mit 5 M KOH auf pH 10,0 eingestellt und
anschließend mit bidest. Wasser auf 100 ml aufgefüllt.
OPA-MPA
100 mg OPA wurden in 1 ml 0,5 M Kaliumboratpuffer pH 10,0 und 9 ml MeOH ge-
löst, und anschließend 100 μl Mercaptopropionsäure zugesetzt.