Analytik von Aminosäuren und biogenen Aminen in fermentierten ...

1 EINLEITUNG 7
[80]. HARE und GIL-AV [81] trennten DL-AS als diastereomere Kupferkomplexe mit
einem AS-Analysator, indem sie L- oder D-Prolin und Kupfer(II)-sulfat dem Eluenten
beifügten. GÜBITZ et al. [82] nutzten die LEC mit an Kieselgel gebundenen chiralen
Selektoren (L-Pipecolinsäure und andere L-AS) zur DL-AS-Trennung. PALLA et al.
[58] trennten Dansyl-DL-AS-Derivate an einer RP-Phase durch Zusatz von
L-Phenylalaninamid und Kupfer(II)-sulfat zum Eluenten. Von anderen geeigneten
chiralen stationären Phasen seien hier Proteinphasen [83], chirale Kronenetherpha-
sen [84], Cyclodextrinphasen [85,86] und Pirkle-Phasen [87] genannt.
Bei den indirekten Methoden werden hingegen nach erfolgter Derivatisierung mit
einem chiralen Reagenz Diastereomere getrennt, die nicht mehr Spiegelbildisomer
sind und verschiedene Energieinhalte sowie unterschiedliche chemische und physi-
kalische Eigenschaften besitzen. Sie lassen sich daher an konventionellen achiralen
Phasen, die in großer Zahl zur Verfügung stehen, trennen. Bei dieser Methoden ha-
ben sich häufig Verfahren mit chiralen Varianten von in der achiralen AS-Analytik
eingesetzten Derivatisierungsreagenzien etabliert. Breite Anwendung für komplexe
Gesamttrennungen von D- und L-AS findet unter den verschiedenen Methoden die
Vorsäulenderivatisierung von AS mit OPA und chiralen Thiolen, deren systematische
Entwicklung und Varianten im folgenden Abschnitt gesondert dargestellt werden
sollen (siehe Kap. 3.1). EINARSSON et al. [73,88] gelang die Trennung von 17 Paa-
ren diastereomerer DL-AS-Derivate nach Vorsäulenderivatisierung mit (+)-1-(9-
Fluor-enyl)ethylchloroformiat (FLEC), der chiralen Modifikation von FMOC-Cl. Her-
vorragende Trennungen der diastereomeren Derivate einzelner DL-AS-Paare konn-
ten mit chiralen Varianten des Sanger-Reagenzes (1-Fluor-2,4-dinitrobenzol), wie
z.B. N 2 -(5-Fluor-2,4-dinitrophenyl)-L-alaninamid (FDNP-L-Ala-NH2) sowie FDNP-L-
Val-NH2, FDNP-L-Phe-NH2 und FDNP-L-Pro-NH2 erzielt werden [89-91]. Gleiches
gilt auch für die chiralen Isothiocyanate bzw. Isocyanate, wie 2,3,4,6-Tetra-O-acetyl-
β-D-glucopyranosylisothiocyanat (GITC) [92] 2,3,4-Tri-O-acetyl-α-D-arabinopyra-
nosylisothiocyanat (AITC) [93], (R)-α-Methylbenzylisothiocyanat [94] und 1-(1-
Naphthyl)ethylisocyanat (NEI) [95]. Alle weitere chirale Derivatisierungsreagenzien,
die flüssigchromatographische Auftrennung von komplexen DL-AS-Mischungen er-
möglichen, eignen sich zu dem Succinimido-1-phenylethylcarbamat (SIPEC) und
Succinimido-1-(α-naphthyl)ethylcarbamat (SINEC) [96], N-1-(2-Naphthylsulphonyl)-
2-pyrrolidincarbonylchlorid (NSP-Cl) [97], S-Flunoxaprofenchlorid [98] sowie ver-