Analytik von Aminosäuren und biogenen Aminen in fermentierten ...

1 EINLEITUNG 5
den großen Vorteil, daß durch Wechsel der Konfiguration dieser Selektor-AS eine
Elutionsumkehr bei den Analyt-Enantiomeren stattfindet, was der Sicherheit des
Analysenergebnisses zugute kommt. Die von FRANK et al. [54] entwickelte, unter
dem Namen Chirasil-Val bekannte Säule erlaubt die Trennung der meisten D- und
L-AS in einem chromatographischen Lauf [60-65].
AS sind aufgrund ihrer zwitterionischen Struktur nicht unzersetzt verdampfbar und
müssen durch Polaritätssenkung an den ladungstragenden Carboxyl- und Amino-
gruppen zu Verbindungen mit niedrigeren Siedepunkten derivatisiert werden [66].
Die Detektion der AS-Derivate erfolgt zumeist mittels Flammenionisationsdetektor
(FID) oder massenspektrometrisch (GC/MS; MSD) [67]. Die sich bei einer Perflu-
oracylierung der AS anbietende halogen-spezifische Detektion mittels Elektronen-
einfang Detektor (ECD) bietet kaum Vorteile gegenüber dem FID und wird deshalb
nur selten angewandt. Gleiches gilt für eine Stickstoff-spezifische Detektion (NPD)
[68,69].
1.1.2.3 Flüssigchromatographie
1.1.2.3.1 Methoden der achiralen flüssigchromatographischen Ami-
nosäureanalytik
Die “Moore-Stein-Technik“ genannte AS-Bestimmungsmethode war vor Verwendung
der HPLC-Verfahren die bedeutendste flüssigchromatographischen AS-Analysen-
methode [70]. Bei dieser Methode werden die AS mittels Ionenaustauschchromato-
graphie (IAC) getrennt und nach der Elution mit Ninhydrin umgesetzt, wobei in einer
dem Strecker-Abbau vergleichbaren Reaktionsfolge farbige Verbindungen gebildet
werden. Diese Umsetzung ist spezifisch für Amino- und Iminogruppen. Allerdings
besitzen die aus primären bzw. sekundären AS entstehenden Verbindungen sehr
unterschiedliche Absorptionsmaxima (570 bzw. 440 nm).
Um höhere Nachweisempfindlichkeiten zu erhalten wies ROTH [71] auf die Bildung
von fluoreszierenden AS-Derivaten bei Umsetzung von AS mit o-Diacetylbenzol oder
o-Phthaldialdehyd (OPA) in Gegenwart reduzierender Agentien wie KBH4 oder