Analytik von Aminosäuren und biogenen Aminen in fermentierten ...

5 DISKUSSION 145
Bei der Identifizierung und Auswertung der Peaks konnten Fehler einerseits durch
eine entsprechend angepaßte Integration minimiert werden. Zum anderen kehrt sich
die Elutionsfolge der gebildeten Isoindolderivate bei Ersatz von IBLC durch IBDC
um. Dadurch läßt sich in der Regel das Überschneidungsproblem lösen. Lediglich
die Bestimmung von Gly war bei LaChrom System nicht möglich.
Koelutionen einzelner Aminosäuren;
Beim HP System 1090 traten Koelutionen einzelner Aminosäuren auf. D-His/L-Cit,
L-Phe/L-Ile und D-Leu/D-Orn eluierten bei Verwendung von IBLC, die entsprechen-
den Enantiomeren der jeweiligen AS bei IBDC zusammen. Die Koelution von L-Phe
und L-Ile war vom Leistungszustand der Trennsäule abhängig, die Trennung wurde
durch Einsatz einer neuen Trennsäule verbessert.
Beim LaChrom System wurde die Koelution von L-Phe/L-Ile und D-Leu/D-Orn be-
obachtet.
Bei beiden Systemen konnte durch Einsatz von IBLC/IBDC-Reagenzien und eine
entsprechend angepaßte Integration alle Peaks ausgewertet werden.
5.2.6.3 Derivatisierungsvorgang
Ein Vorteil des HP 1090 Systems sind die exakt definierten Derivatisierungsbedin-
gungen, durch die die Instabilitäten von OPA-AS-Derivaten behoben werden kön-
nen. Der programmierbare Autoinjektor des HP 1090 Gerätes ermöglicht in Verbin-
dung mit dem Probengeber die vollautomatische und damit gut reproduzierbare Vor-
säulenderivatisierung. Probe- und Reagenzlösungen werden dabei durch einen
Spritzenkolben genau dosiert, in einer Kapilarschleife gemischt und nach Umsetzung
zu den entsprechenden Isoindolderivaten injiziert.
Die Derivatisierung der AS bei LaChrom System erfolgte unter Verwendung eines
programmierbaren Autosamplers. Dabei wurden Probe- und Reagenzlösungen in ein
Reaktions-Vial überführt. Nach mehrmaligen Mischen und einer Reaktionszeit von 2
min wurden 20 μl des Aliquotes der Lösung injiziert. Trotz der verlängerten Gesamt-
derivatisierungsdauer wurden keine bemerkenswerten Veränderungen bzw. Beein-
flussungen auf die Gesamttrennung der AS im Vergleich zum HP 1090 System be-