Analytik von Aminosäuren und biogenen Aminen in fermentierten ...

5 DISKUSSION 144
besseren Trennung mit einer höheren Bodenzahl verwendet. Die Trennungen wur-
den mit einem binären linearen Gradienten bei einer Flußrate von 1 ml/min und einer
Säulentemperatur von 25 ° C durchgeführt. FITZNAR et al. [203] etablierten die
OPA/IBL(D)C-Methode auf der Grundlage der Publikation von BRÜCKNER et al.
[168,169] bei einem LaChrom (Merck, Hitachi) HPLC System. Dabei gelang ihnen
die Trennung von 39 AS mit IBLC bzw. 40 AS mit IBDC innerhalb einer Gesamtre-
tentionszeit von 80 min mittels eines tertiären Gradientensystems an einer konven-
tionellen RP18-Phase (Superspher RP18, 125 mm x 4 mm I.D. Partikelgröße: 4 μm).
Als einziger Unterschied in der Gesamttrennung bei beiden LaChrom Systeme wie-
sen frühere Elutionen von DL-Asp auf.
5.2.6.2 Problematik bei der Trennung einzelner D/L-AS
Erscheinung von D- bzw. L-Asp als Doppelpeak
Sowohl D- als auch L-Asp erschienen bei älteren Trennsäulen und bei niedrigerem
pH-Wert als der von Reaktionspuffer (Kaliumborat-puffer pH 10,4) als Doppelpeak.
Es handelt sich dabei möglicherweise um eine dissoziierte und eine undissoziierte
Form des D- bzw. L-Asp-Derivats. Für die Stabilisierung des pH-Wertes und um ei-
nen optimalen Reaktionsverlauf zu gewährleisten wird eine pH-Neutralisierung mit
HCl nach der Derivatisierung erforderlich.
Überschneidungen einzelner Aminosäuren
Je nach Leistung der Trennsäule wurden beim HP 1090 System einige Überschnei-
dungen einzelner AS beobachtet, die bei BRÜCKNER et al. [165,166] nicht auftra-
ten. Unter Verwendung IBLC D-Gln/L-Thr und D-Arg/D-Ala, unter Verwendung von
IBDC L-Gln/D-Thr und L-Arg/L-Ala. Die Überschneidungen der Peaks hängen mehr
oder weniger von der Leistung der Trennsäule ab, so daß sie meist durch den Ein-
satz einer neuen Trennsäule behoben werden konnten.
Beim LaChrom System wurden aufgrund ähnlicher Polaritäten von AS-Derivaten
die Überschneidungen bei Gly/L-His/D-Thr/L-Cit/D-His und L-Arg/-L-Ala unter Ver-
wendung von IBLC sowie Gly/D-His/L-Thr/D-Cit/L-His und D-Arg/D-Ala unter Ver-
wendung von IBDC beobachtet.