Protein ? Disassembly im Verlauf der endosomalen Prozessierung
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Ergebnisse Seite 79<br />
die jeweilige cDNA – Präparation intakt war, wurde stets ein Test auf Aktin<br />
durchgeführt. Die Tab. 12 gibt das Ergebnis <strong>der</strong> RT-PCR Analysen wie<strong>der</strong>. Während die<br />
PCR bei unst<strong>im</strong>ulierten und γ - Interferon st<strong>im</strong>ulierten Makrophagen starke Signale<br />
ergaben, waren diese bei den LPS st<strong>im</strong>ulierten Makrophagen stets schwächer.<br />
Ein Unterschied <strong>im</strong> Expressionsmuster <strong>der</strong> gängigen lysosomalen <strong>Protein</strong>asen konnte<br />
bei unterschiedlich st<strong>im</strong>ulierten Knochenmarks – Makrophagen nicht festgestellt<br />
werden. Sowohl die Teste auf die SH - <strong>Protein</strong>asen Kathepsin B, H, L, S sowie Legumain<br />
als auch die Teste auf die Aspartat – <strong>Protein</strong>asen Kathepsin D und E ergaben positive<br />
Resultate.<br />
Die Makrophagen expr<strong>im</strong>ieren auf mRNA – Ebene die gleiche Ausstattung an den<br />
Leitproteinasen des endo- / lysosomalen Systems. Weitere Tests auf die <strong>Protein</strong>asen<br />
Kathepsin O, W, K und U ergaben negative Resultate.<br />
3.1.6 Aufnahme von FITC-OVA durch KMM∅<br />
Die Markierung des <strong>Protein</strong>antigens mit Fluorescein bot den Vorteil, die endozytotische<br />
Aufnahme des Ovalbumins in die Zellen <strong>im</strong> Fluoreszenzmikroskop sichtbar machen zu<br />
können. Hierzu wurden Knochenmarkszellen für 11 Tage in Gegenwart von M-CSF kul-<br />
tiviert, um KMM∅ zu erhalten. Ein Teil <strong>der</strong> Knochenmarkskulturen wurde zusätzlich von<br />
Tag 8 an mit γ-Interferon st<strong>im</strong>uliert. Nach Umsetzen <strong>der</strong> Knochenmarkskulturen an Tag<br />
11 in 24 – Well Platten wurden die Zellen für 4h mit 25µg FITC-OVA/1x10 6 Zellen inku-<br />
biert. Nach Ablauf <strong>der</strong> Inkubationszeit wurden die Zellen zwe<strong>im</strong>al in PBS gewaschen<br />
und unter dem Fluoreszenz – Mikroskop untersucht.