Protein ? Disassembly im Verlauf der endosomalen Prozessierung

Material und Methoden Seite 30
0,3 M SDS (1,5 ml 20 % SDS-Lsg./ 100 ml)
ad 100 ml, mit konz. HCl auf pH 8,45 eingestellt
• Lösung C 20 % (w/v) Acrylamid (280 g/l)
0,735 % (w/v) N,N´- Methylenbisacrylamid (7,35 g/l)
• LösungD 95,75 (v/v) 1 M Tris/HCl pH 7,0
4 % (v/v) SDS 20 %
0,25 (v/v) TEMED (Tetramethylethylendiamin)
• Lösung E 48 % (w/v) Acrylamid
1,5 % (w/v) N,N'-Methylen-Bisacrylamid
• Glycerin
• SDS - Lösung 20 % 20 % (w/v) SDS (20 g/100 ml)
• APS - Lösung 10% 10 % (w/v) APS (1 g/10 ml)
2.3.2.2 Zusammensetzung der Gele
Die Gellösungen wurden gemäß folgender Tabelle pipettiert, wobei darauf geachtet wur-
de, dass die Lösungen gut durchmischt wurden :
Zu der jeweiligen Gellösung wurden kurz vor dem Gießen 100 µl 10 % APS - Lösung
hinzugegeben.
GEL 10 % 12 % 14 % 16 %
Lösung A (ml) 3,00 3,00 3,00 3,00
Lösung C (ml) 8,48 10,18 11,87 13,56
Glyzerin (ml) 3,00 3,00 3,00 3,00
Aqua bidest. (ml) 9,40 7,70 6,01 4,32
SDS 20 % (µl) 120 120 120 120
Tab. 3 Zusammensetzung der Gellösungen für Glycin-Gele
Zusammensetzung des Stackers für Glycin – Gele : 1 ml Lösung C, 1 ml Lösung D, 4 ml
Aqua bidest sowie 80 µl 10 % APS
Lösung Stacker 10% 16,5%
Lösung E (ml) 0,5 5,1 8,3
Lösung B (ml) 1,5 8,3 8,3
Glyzerin (ml) / 3 3
Aqua bidest. (ml) 4,0 8,6 5,3
TEMED (µl) 10 20 20
Tab. 2 Zusammensetzung der Gellösungen fürTricin- Gele