Quantitative Proteinbestimmung Ziele: − Prinzip einer ...

BT-Lehrer-Fortbildung „2. Kasseler Labortage“ 01./02.12.08 Versuche Proteinbestimmung Biuret
Stand 29.11.08 ©HL Seite 6 von 6
Fotometer anstellen
An jedem der drei Spektralfotometer liegt eine Kurz-Bedienungsanleitung.
Machen Sie sich mit dem Fotometer vertraut und gehen Sie nach der Bedienungsanleitung(Konfigurationseinstellungen,
Bestimmungsmethode) vor.
• Jeweils eine Kalibrierkurve aus den zwei Messreihen erstellen und den Proteingehalt der
Proben („Unbekannten“) ermitteln.
• Die Ergebnisse mit der tatsächlich hergestellten Konzentration und die beiden Messreihen
untereinander vergleichen.
weitere Hinweise:
Es gibt verschiedene Möglichkeiten Standards herzustellen, so z.B.
− Arbeiten mit größeren Volumina, aus denen das Probenvolumen entnommen wird
− die einzelnen Stufen durch Unterverdünnung herstellen, usw..
Mit Schülergruppen empfiehlt sich, das Arbeiten mit Fotometern, die Herstellung von Verdünnungsreihen
usw. mit einem Farbstoff zu üben, bevor eine Proteinbestimmung durchgeführt
wird. (vgl. VA Einführung in die Fotometrie)
Da meist mehr als ein Praktikum für obige VA zu veranschlagen ist:
− Stammlösung und Standards aus BSA können zur Verhinderung eines mikrobiellen
Abbaus eingefroren werden. Beim Auftauen gründliches Mischen nicht vergessen.
− Im Kühlschrank und in verschlossenen Reaktionsgefäßen halten sich mit Biuret versetzte
Proben mindestens eine Woche.
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Anwendungsbeispiele:
soll nur die Analytik an sich geübt werden, empfehlen sich Lebensmittelproben, z.B.
Proteinextraktion aus eiweißreichen Pflanzensamen mit geeigneten Puffern, Vergleich mit
Literaturwerten, Diskussion der Unterschiede (z.B. lösliche/nicht lösliche Speicherproteine)
Proteinextraktion aus Fleisch
Werden verschiedene Fischsorten als Ausgangsmaterial verwendet, kann die Proteinbestimmung
genutzt werden, um die Proben auf sinnvolle Konzentration in einer PAGE verdünnen
zu können.
soll eine Proteinbestimmung im Rahmen von Stoffwechseluntersuchungen oder/ und Biomasseproduktion
eingesetzt werden, bietet sich folgendes an:
im Sinne von Projekt- bzw. Lernsituation-orientiertem Unterricht bzw. selbstorganisiertem
Lernen kein fertiges Versuchsprotokoll ausgeben, sondern
Formulierung einer Aufgabenstellung, z.B.
1. Es soll ein (oder mehrere) Aufschlussverfahren für Hefezellen optimiert/verglichen werden
(Ziel könnte eine ADH-Isolierung sein)
2. Die Biomasseproduktion von Hefe unter verschiedenen Bedingungen soll verfolgt werden
(hier könnten aerobe und anaerobe Bedingungen verglichen und untersucht werden, ob die
Trockenmassebestimmung mit der Proteinbestimmung korreliert)
Informationsbeschaffung, z.B. Internet
Entwicklung einer Versuchsanleitung z.B. zu 1.:
Variation und Vergleich verschiedener Parameter
verschiedene Aufschlusspuffer (ohne und mit Detergenz, wegen cytosolischen / membrangebundenen
Proteinen, ohne/mit verschiedenen Osmolytika, ohne/mit EDTA)
verschiedene Materialien (Sand – Aluminiumoxid – Glasperlen),
Glassbeads unterschiedlicher Größe, Vortex-Dauer, Anteile Hefe-Puffer-Beads usw. usw.
Durchführung, Messwertaufnahme
Auswertung und Präsentation der Ergebnisse (Berechnungen, Schaubilder, Grafiken)