Quantitative Proteinbestimmung Ziele: − Prinzip einer ...
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BT-Lehrer-Fortbildung „2. Kasseler Labortage“ 01./02.12.08 Versuche <strong>Proteinbestimmung</strong> Biuret<br />
Stand 29.11.08 ©HL Seite 6 von 6<br />
Fotometer anstellen<br />
An jedem der drei Spektralfotometer liegt eine Kurz-Bedienungsanleitung.<br />
Machen Sie sich mit dem Fotometer vertraut und gehen Sie nach der Bedienungsanleitung(Konfigurationseinstellungen,<br />
Bestimmungsmethode) vor.<br />
• Jeweils eine Kalibrierkurve aus den zwei Messreihen erstellen und den Proteingehalt der<br />
Proben („Unbekannten“) ermitteln.<br />
• Die Ergebnisse mit der tatsächlich hergestellten Konzentration und die beiden Messreihen<br />
untereinander vergleichen.<br />
weitere Hinweise:<br />
Es gibt verschiedene Möglichkeiten Standards herzustellen, so z.B.<br />
<strong>−</strong> Arbeiten mit größeren Volumina, aus denen das Probenvolumen entnommen wird<br />
<strong>−</strong> die einzelnen Stufen durch Unterverdünnung herstellen, usw..<br />
Mit Schülergruppen empfiehlt sich, das Arbeiten mit Fotometern, die Herstellung von Verdünnungsreihen<br />
usw. mit einem Farbstoff zu üben, bevor eine <strong>Proteinbestimmung</strong> durchgeführt<br />
wird. (vgl. VA Einführung in die Fotometrie)<br />
Da meist mehr als ein Praktikum für obige VA zu veranschlagen ist:<br />
<strong>−</strong> Stammlösung und Standards aus BSA können zur Verhinderung eines mikrobiellen<br />
Abbaus eingefroren werden. Beim Auftauen gründliches Mischen nicht vergessen.<br />
<strong>−</strong> Im Kühlschrank und in verschlossenen Reaktionsgefäßen halten sich mit Biuret versetzte<br />
Proben mindestens eine Woche.<br />
_____________________________________________________________________________<br />
Anwendungsbeispiele:<br />
soll nur die Analytik an sich geübt werden, empfehlen sich Lebensmittelproben, z.B.<br />
Proteinextraktion aus eiweißreichen Pflanzensamen mit geeigneten Puffern, Vergleich mit<br />
Literaturwerten, Diskussion der Unterschiede (z.B. lösliche/nicht lösliche Speicherproteine)<br />
Proteinextraktion aus Fleisch<br />
Werden verschiedene Fischsorten als Ausgangsmaterial verwendet, kann die <strong>Proteinbestimmung</strong><br />
genutzt werden, um die Proben auf sinnvolle Konzentration in <strong>einer</strong> PAGE verdünnen<br />
zu können.<br />
soll eine <strong>Proteinbestimmung</strong> im Rahmen von Stoffwechseluntersuchungen oder/ und Biomasseproduktion<br />
eingesetzt werden, bietet sich folgendes an:<br />
im Sinne von Projekt- bzw. Lernsituation-orientiertem Unterricht bzw. selbstorganisiertem<br />
Lernen kein fertiges Versuchsprotokoll ausgeben, sondern<br />
Formulierung <strong>einer</strong> Aufgabenstellung, z.B.<br />
1. Es soll ein (oder mehrere) Aufschlussverfahren für Hefezellen optimiert/verglichen werden<br />
(Ziel könnte eine ADH-Isolierung sein)<br />
2. Die Biomasseproduktion von Hefe unter verschiedenen Bedingungen soll verfolgt werden<br />
(hier könnten aerobe und anaerobe Bedingungen verglichen und untersucht werden, ob die<br />
Trockenmassebestimmung mit der <strong>Proteinbestimmung</strong> korreliert)<br />
Informationsbeschaffung, z.B. Internet<br />
Entwicklung <strong>einer</strong> Versuchsanleitung z.B. zu 1.:<br />
Variation und Vergleich verschiedener Parameter<br />
verschiedene Aufschlusspuffer (ohne und mit Detergenz, wegen cytosolischen / membrangebundenen<br />
Proteinen, ohne/mit verschiedenen Osmolytika, ohne/mit EDTA)<br />
verschiedene Materialien (Sand – Aluminiumoxid – Glasperlen),<br />
Glassbeads unterschiedlicher Größe, Vortex-Dauer, Anteile Hefe-Puffer-Beads usw. usw.<br />
Durchführung, Messwertaufnahme<br />
Auswertung und Präsentation der Ergebnisse (Berechnungen, Schaubilder, Grafiken)