HE-, Nissl-, Masson-Goldner- u Papanicolaou-Färbung

Hämatoxylin-Eosin-Färbung (HE-Färbung) 

Hämatoxylin – Hämalaun (17) 

Hämatoxylin ist ein farbloser Pflanzenfarbstoff, welcher durch Alkoholextraktion aus 

Blauholz gewonnen wird. Durch Oxidation wird Hämatoxylin in den Farbstoff Hämatein 

überführt. Diese Oxidierung = Dehydrierung = Reifung kann -natürlich- durch längeres stehen 

an der Raumluft oder -künstlich- durch Zugabe von Oxidierungsmitteln schneller erfolgen. 

Angewandte Oxidationsmittel sind z.B.: NaJO3, KJO3 und KClO4. 

Hämatein ist ein saurer Farbstoff und hat in saurer Lösung eine gelb-rötliche Farbe. Ohne 

zusätzliche "Beizung" des Hämateins ist eine Kernfärbung nicht durchführbar. 

Über Zugabe von Alaunen entstehen nun die unterschiedlichen Lacke - Hämatoxylin-Alaune 

= Hämalaune - wobei es Eisen-, Blei- und Chromhämatoxyline gibt. 

Das ganze ist etwas verwirrend und soll in folgender Grafik vereinfacht dargestellt werden: 

Hämalaun selbst sollte progressiv 

gefärbt werden. Das heißt das der 

Färbegrad während der Färbung 

kontrolliert, und die Färbung bei 

gewünschtem Färbeergebnis 

abgebrochen wird. Eine 

"Überfärbung" ist nur schwer 

rückgängig zu machen - z.B. durch 

ein Salzsäure-Alkohol-Gemisch. 

Während der Färbung lagern sich die positiv geladenen Komplexverbindungen des Alaun an 

die negativ geladenen Phosphatgruppen von Nucleinsäuren. 

Die eigentliche tiefblaue Färbung der Kerne wird durch Bläuen - das Einstellen des pH 

Wertes >3 - mittels Leitungswasser oder einer 0,1%igen NaHCO3-Lsg. erreicht, was auf die 

Indikatoreigenschaften der Schwermetallanteile des Alauns zurückzuführen ist. 

Eosin 

Die Hauptbedeutung des Eosins liegt in der am häufigst angewandten Übersichtsfärbung, der 

gemeinsamen Färbung mit Hämalaun - der HE-Färbung. 

Eosin wird regressiv gefärbt, es wird also erst überfärbt und anschließend differenziert. Es ist 

negativ geladen und bindet sich an die postiven Gruppen von z.B. Eiweißen mittels 

elektrostatischer Adsorbtion. Ein zu starkes überfärben ist strikt zu vermeiden, es erzeugt 

keinesfalls eine bessere Unterscheidung bei der Mikroskopie, sondern erzeugt nur schmierige 

und undeutliche Präparate. 

Eosin Y - Eosin G 

Der Name Eosin Y bzw. G oder besser gesagt das Kürzel Y bzw. G stammt von der 

gelblichen Farbe des wasserlöslichen Eosins. Gelb = G = Yellow = Y 

Eosin gehört der Fluoreszein-Gruppe an, ist gut wasserlöslich und schwach sauer. Benutzt 

wird es in 1%iger, mit Eisessig angesäuerter, wässriger Lösung. (1Tr. Eisessig auf 100ml 

1%igem Eosin in a.d.) Eosin muss nach dem Färben ausreichend in Wasser differenziert 

werden, es wird also regressiv gefärbt. Außerdem kann Eosin ansonsten bei wasserlöslichen 

Eindeckmitteln, z.B. Glyzeringelatine, sich darin lösen und einen Farbschleier erzeugen. 

Eosin S 

Neben dem wasserlöslichen Eosin gibt es noch das wasserunlösliche Eosin. Dieses Ethyleosin 

-Eosin S- wird in 70%igem EtOH gelöst und weist eine bessere Lichtbeständigkeit auf. Das 

Kürzel S weist hier auf die Alkohollöslichkeit hin, S = spritlöslich. 

Jod-Eosin 

Bei diesem Eosin sind die 4 Brommoleküle durch Jod ersetzt. Ein anderer Name für Jod- 

Eosin ist auch Erythrosin.

Erythrosin findet in der Histologie kaum Anwendung. Ein Färbebeispiel ist die CHESA 

Färbung, einer kombinierten Färbung von Keratin und Schleim. 

Zusammenfassung 

Die HE-Färbung : 

ist eine Succedanfärbung / Sukzedanfärbung - es wird nacheinander gefärbt 

basiert auf dem Prinzip der Durchtränkung und der elektrostatischen Absorbtion. 

Hämalaun wird progressiv gefärbt, beim erreichen des gewünschten Färbegrades wird die 

Färbung abgebrochen. 

Hämalaun ist positiv geladen und bindet sich an die sauren Bestandteile der DNS -> 

Kernfärbung 

Eosin wird regressiv gefärbt, es wird also erst überfärbt und anschließend differenziert. 

Eosin ist negativ geladen und bindet sich an die positiven Gewebsbestandteile (Eiweiße) - 

> Plasmafärbung 

Arbeitsvorschriften: Hämatoxylin-Eosin (HE-Färbung) 

nach:http://www.aeisner.de/index.html 

Chemikalien: (siehe Materialien und Chemikalien) 

Paraffinierte Schnitte in Küvetten mit folgenden Lösungen nacheinander einstellen: 

Xylolersatzstoff 2x 10 min 

Ethanol (Spiritus) w=96-98% 2x 2-5min 

Ethanol (Spiritus) w=70% 2-5min 

Spülen in A. dest. 

Objekte in saurem Hämatoxylin nach Ehrlich 

Saures Hämatoxylin nach Ehrlich 2-15 min 

Ist die Färbung nach dem Bläuen zu dunkel 

ausgefallen, in 0.1%iger wäßriger Salzsäure 

differenzieren (unter dem Mikroskop 

kontrollieren). Wenn die Differenzierung das 

gewünschte Ausmaß erreicht hat, den 

Objektträger möglichst schnell in 

ammoniakalisches Wasser bringen. Der 

Objektträger bleibt hierin solange, bis sich die 

Objekte blau verfärbt haben, anschließend in 

fließendem Leitungswasser auswaschen, 

oder in saurem Hämalaun nach Mayer färben 

Hämalaun Gebrauchslösung 5-10 Min., 

bis die Kerne gut gefärbt sind (unter dem 

Mikroskop kontrollieren). 

Überschüssige Farblösung vom Objektträger 

ablaufen lassen und mit Aqua dest. spülen bis 

das ablaufende Wasser farblos ist. (Objekte 

bzw. Schnitte sind weinrot) 

Ev. mit Salzsäure differenzieren siehe 

Ehrlichs Hämatoxylin (oft bessere Ergebnisse!) 

Bläuen in fließendem Leitungswasser oder 10 min 

in 0.1- 0.25%iger Natriumhydrogencarbonatlösung 

Abspülen in Aqua dest. 

Eosinlösung verdünnt mit Aqua dest. 1+10, 5-10 min. 

Sollte der Farbstoff nicht auf das Gewebe aufziehen, 

zu 100ml dieser Lösung 1 Tropfen Eisessig geben. 

Spülen in Aqua dest. 

Ethanol (Spiritus) w=70% 1- 2min spülen 



Einschlussmittel 

Ergebnis: 

Kerne blauschwarz bis violett, Plasma rosa bis rot, Knorpel dunkelblau,

Nissl-Färbung 

Eine Nissl-Färbung ist jede Färbemethode zur Darstellung von Nervenzellkernen und sog. 

Tigroid-Schollen oder Nissl-Schollen (Endoplasmatisches Retikulum der Nervenzellen). 

Besonders gut geeignet ist der basische Teerfarbstoff Kresyl(echt) violett oder Thionin 

Arbeitsvorschriften: Nisslfärbung Schnellmethode 








gepufferte Farblösung 10 Min. 

Abspülen der Schnitte in Acetatpuffer 





Ergebnis: 

Zellkerne und Nissl-Substanz violett, Nervenzellen ganz schwach blau, Rest farblos.

Papanicolaou-Färbung 

Die Färbung dient insbesondere zur Darstellung unterschiedlich alter Zellen von 

Zellabstrichen. Dies spielt insbesondere eine große Rolle in der gynäkologischen 

Zytodiagnostik. Der Pap-Test wurde 1928 von dem griechischen Arzt George Papanicolaou 

entwickelt. Er beruht auf der Beurteilung von gefärbten Zellabstrichen vom Muttermund der 

Frau und dient der Früherkennung eines Gebärmutterhalskrebses. Die Befunde werden 

insbesondere hinsichtlich der Zervix-Krebsdiagnostik in „Gruppen“ nach der Münchner 

Nomenklatur II klassifiziert. (18) 

Arbeitsvorschriften: Papanicolaou-Färbung 

Nach: http://retro.mta-labor.info/cms/fachbereiche/histo/methoden/papanicolaou.php 


Mittels Wattestäbchen wird ein Abstrich der Mundschleimhaut entnommen und auf einem 

Objektträger ausgestrichen, indem der Watteträger auf dem zuvor mit Alkohol geputzten 

Objektträger abgerollt wird (Nicht wischen!). 

Nach der Anfertigung des Ausstriches muss sofort fixiert werden, bevor eine Lufttrockung 

einsetzt. Als Fixiermittel können käufliche Sprays, wie Merckofix-Fixiertspray, oder ein 

Ether-Ethanol-Gemisch (1+1) verwendet werden. Jedoch ist auch eine Fixierung in Ethanol 

w=95% möglich. (9) 

Der Abstrich wird in Küvetten mit folgenden Lösungen nacheinander einstellen: 

Ausstriche sofort nach Entnahme in Fixierlösung 5-10min 

z.B. Ethanol w=95% 

Ethanol (Spiritus) w=80% 2x 1-2min 


A. dest. 1-2min 

Eisenhämatoxylin nach Harris 4min 


Differenzieren in Salzsäure-Alkohol ca.3sec 

Spülen und Bläuen in fließendem Leitungswasser 10 min 




Orange G 3min 



Polychromlsg. EA 50 5min 




Ergebnis: 

Junge Zellen haben blaue Kerne und dunkelblaues Plasma. 

Ältere Zellen: blaue bis rote Zellkerne und hellblaues Plasma 

(azidophile Zellen: Plasma rosa bis orangerot, basophile Zellen: Plasma grün bis grünblau) 

Bakterien: blau, Leukozyten blassrosa bis hellviolett, Erythrozyten: rotorange bis rotbraun

Masson-Goldner-Färbung 

Diese Färbung dient der differenzierten Anfärbung der Bindegewebskomponenten. 

Arbeitsvorschriften: Masson-Goldner-Färbung 








Weigert´s Eisenhämatoxylin 1-2 min. Nicht Überfärben! 

Spülen und Bläuen in fließendem Leitungswasser 10 -15min 

Masson-Goldner I 5-7 min 

= Ponceau-Säurefuchsin-Azophloxin 

Abspülen in Essigsäure, w=1% 

Masson-Goldner II 3 min 

= Differenzieren in Molybdatophosphorsäure-Orange 

oder Wolframatophosphorsäure-Orange 

bis zur völligen Entfärbung des Bindegewebes 

Abspülen in Essigsäure, w=1% 

Unter dem Mikroskop begutachten, 

Vorsicht: Das Präparat nicht trocken werden lassen! 

Masson-Goldner III 5 min 

= Gegenfärbung mit Lichtgrün (bzw. Anilinblau) 

Auswaschen in Essigsäure,w=1% max.5 min 

Von Zeit zu Zeit unter dem Mikroskop begutachten, 

Vorsicht: Das Präparat nicht trocken werden lassen! 

Ethanol (Spiritus) w=96% 2x 2 -5min 



Ergebnis: 

Kerne braunschwarz/blauschwarz, Cytoplasma schwachorange bis rot, Erythrocyten 

leuchtend rot, Bindegewebe, Kollagen und Schleim grün, Muskulatur hellrot 

Bemerkung: 

Die Färbung gelingt besonders gut nach Fixierung mit Bouin. 

Das Lichtgrün kann auch durch Anilinblau wasserlösl. ersetzt werden.

Materialien und Chemikalien: 

Hinweis: viele Färbelösungen sind lange vor Gebrauch anzusetzen und müssen „reifen“. 

Käuflich sind diese Lösungen auch bei der Firma Merck oder Chroma erhältlich. 

Acetatpuffer für Nissl-Färbung: In vorgelegten 100ml Aqua dest. werden 1.088g 

Natriumacetat (wasserfrei) oder 1.805g Natriumacetat-Trihydrat gelöst und auf 200ml 

aufgefüllt. (pH-Wert 3,8 - 4,0) oder 1 Teil 2,72% Natriumacetat + 4 Teile 1,201% Essigsäure 

ammoniakalisches Wasser : Zu 100ml Aqua dest. wird 1 Tropfen konz. Ammoniaklösung 

gegeben. 

Eisenhämatoxylin nach Weigert: 

Lösung A: 1g Hämatoxylin in 100ml 96%igem Ethanol lösen. Eventuell etwas 

erwärmen. Die Lösung sollte eine Woche reifen. 

Lösung B (Methode 1): 1.16g Eisen(III)-chlorid in 99ml Aqua dest. lösen dann 1ml 

25%ige Salzsäure zusetzen. 

Lösung B (Methode 2): 4ml 29%ige Eisen(III)-chloridlösung (=Ferrum 

sesquichloratum) und 1ml 25%ige Salzsäure zu 95ml Aqua dest. geben. 

Beide Stammlösungen sind unbegrenzt haltbar. 

Unmittelbar vor der Färbung mischt man Lösung A und B zu gleichen Teilen. Diese Lösung 

ist nur ca. 8 Tage haltbar! Regressive Färbung! 

Eisenhämatoxylin nach Harris = Papanicolaoulösung I: 1g Hämatoxylin in 10ml abs. 

Ethanol unter leichtem Erwärmen lösen, 

20g Ammonium- oder Kalialaun in 200ml Aqua dest. unter Erwärmen lösen. Die 

Hämatoxylinlösung langsam und unter ständigem Rühren in die heiße Alaunlösung einfließen 

lassen, anschließend kurz aufkochen. Das Erhitzen beenden und 0,5g Quecksilber(II)-oxid 

zugeben ( VORSICHT schäumt auf ). 

Im kalten Wasserbad rasch abkühlen und mit 1ml Eisessig versetzen, filtrieren. Regressive 

Färbung! 

Eiweißglycerin: geschlagenes Eiweiß, filtriert und Glycerin im Verhältnis 1:1, zur besseren 

Stabilität ein Körnchen Thymol zusetzen) 

Eosinlösung: 1g Eosin in 100ml Aqua dest. lösen. Haltbar 

Hämalaun (saures) nach Mayer (Stammlösung): 1g Hämatoxylin in 1000ml Aqua dest. lösen, 

dann genau 0.2g Natriumjodat und 50g reinen Kalialaun zugeben. 

Hämalaun Gebrauchslösung: Zu 100ml der Stammlösung werden 5g Chloralhydrat und 0.1g 

Zitronensäure zugefügt. Vor Gebrauch filtrieren. 

Hämatoxylin (saures) nach Ehrlich (Methode 1): 1g Hämatoxylin in 50ml 96%igem 

Isopropanol lösen (evtl. etwas erwärmen). 1.5g Kalialaun in 50ml Aqua dest. unter 

Aufkochen lösen und in die noch warme Alaunlösung 50ml reinstes Glycerin geben. Zu 

dieser Mischung wird die Hämatoxylinlösung unter ständigem Rühren zugegeben und mit 

5ml Eisessig versetzt. 

Diesen Ansatz 14 Tage unter öfterem Umschütteln in, mit einem Papierhütchen bedeckten, 

Gefäß reifen lassen. 

Hämatoxylin (saures) nach Ehrlich (Methode 2): 1g Hämatoxylin in 50ml 96%igem 

Isopropanol lösen und 50ml Aqua dest., 50ml reinstes Glycerin, 1.5g Kalialaun und 5ml 

Eisessig zufügen. Dann mit genau 0.2g Kaliumjodat versetzen, gut vermischen. Dieser Ansatz 

ist sofort gebrauchsfertig.

Kesylviolett-acetat: siehe Nissl 

Lichtgrün SF: siehe Masson-Goldner III 

Masson-Goldner I = Ponceau-Säurefuchsin-Azophloxin: 88ml 0.2%ige Essigsäure mit 7ml 

Masson-Lösung und 2ml Azophloxinlösung versetzen. 

Masson-Lösung: 0.2g Ponceau de Xylidine, 0.1g Säurefuchsin in 300ml Aqua dest. 

kurz kochen, dann 0.6ml Eisessig zugeben und filtrieren. 

Azophloxin-Lösg.: 0.5g Azophloxin werden in 100ml Aqua dest., das mit 0.2ml 

Eisessig versetzt wurde, gelöst. 

Masson-Goldner II = Molybdatophosphorsäure-Orange: 3-5g Molybdatophosphorsäure und 

2g Orange G in 100ml Aqua dest. lösen. 

Oder Wolframatophosphorsäure-Orange: 3-5g Wolframatophosphorsäure und 2g Orange G 

in 100ml Aqua dest. lösen. 

Masson-Goldner III = Lichtgrün SF: 0.1-0.2g Lichtgrün SF in 100ml Aqua dest., das mit 

0.2ml Eisessig versetzt wurde, lösen, Statt Lichtgrün kann auch Anilinblau wasserl. 

verwendet werden. 

Molybdatophosphorsäure-Orange: siehe Masson-Goldner II 

Nissl-Farblösung: In 100ml Acetatpuffer Pufferlösung werden 0.5g Kesylviolett-acetat oder 

Thionin gelöst. 

Orange G = Papanicolaoulösung II: Orange G 5g/L in 100ml Ethanol, w=96% + 

Phosphorwolframsäure 0,015g, 

Papanicolaoulösung I: siehe Eisenhämatoxylin nach Harris 

Papanicolaou II: siehe Orange G 

Papanicolaou III: siehe Polychromlsg. EA 31 oder EA 50 (zum Färben v. Vaginal-, Zervikal- 

oder Uterusabstrichen oder Polychromlsg. EA 65 (zum Färben von Sputum-, Bronchial-, 

Magen- oder Darmproben) käuflich zu erwerben bei Chroma oder Merck 

Polychromlösung EA 36: 

Lichtgrün SF, gelblich 1g/L in Ethanol, w=95%, 145ml 

+Bismarckbraun 5g/L in Ethanol, w=95%, 10ml 

+Eosin, gelbl., wasserl.und alkoholl., 5g/L in Ethanol, w=95%, 45ml 

+Phosphorwolframsäure 0,2g 

Ponceau-Säurefuchsin-Azophloxin: siehe Masson-Goldner I 

Salzsäure-Alkohol: w=0,5% in 95% Ethanol 

Thionin: siehe Nissl

HE-, Nissl-, Masson-Goldner- u Papanicolaou-Färbung

Sie wollen auch ein ePaper? Erhöhen Sie die Reichweite Ihrer Titel.

Template löschen?

Als Template speichern?