Dokument 1.pdf - OPUS - Friedrich-Alexander-Universität Erlangen ...
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I. 2. Ergebnisse<br />
2.7.3. brat-RNAi führt zu ähnlichen, aber von nos/pum RNAi abgrenz-<br />
baren Phänotypen<br />
RNAi-Experimente gegen brat wurden mit dsRNA eines 713 bp Fragment der<br />
NHL-Domäne durchgeführt.<br />
In der Folge von brat-RNAi treten kombinierte morphologische Veränderungen<br />
der larvalen Kutikula auf (Abb. 19, A, B). Kopfdefekte gehen einher mit Verkürzungen<br />
des Abdomens. Die Penetranz der RNA-Interferenz dieser Experimente ist hoch, d.h.<br />
es treten keine Wildtyp-Larven auf. Meist bleiben 4 bis 7 abdominale Segmente<br />
zurück, terminale Strukturen können fehlen (Abb. 19, A). Auch im Kopf zeigen sich<br />
Defekte. Die Antennen scheinen häufig verkürzt und die Morphologie der Mandibeln<br />
leicht gestört zu sein, wobei der Incisivi-Teil der Mandibeln reduziert ist (Abb. 19, B).<br />
Außerdem ist das labiale Segment in der Regel ganz oder teilweise deletiert (Abb.<br />
19, Pfeil in B). Hinzu kommen vereinzelte Veränderungen (vor allem Deletionen) der<br />
anderen Mundwerkzeuge (nicht gezeigt). Zusätzlich zu diesen anterioren und poste-<br />
rioren Defekten kommt es auch zu Deformationen in thorakalen Segmenten. Dort<br />
treten Deletionen einzelner Beine, Deformationen des Prätarsus und Missbildungen<br />
kompletter Beine auf (Abb. 19, bzw. nicht gezeigt).<br />
Diese in Kutikulapräparationen auftretenden brat-RNAi-Phänotypen können zum<br />
größten Teil auf frühe embryonale Prozesse zurückgeführt werden. So sind die<br />
Deletion des labialen Segments und die Defekte thorakaler Segmente schon im<br />
Expressionsmuster des Segmentpolaritätsgens wg ablesbar (Abb. 19, C, D). Aller-<br />
dings besteht zwischen der Stärke der in larvalen Stadien beobachtbaren abdomina-<br />
len Phänotypen und den Defekten der posterioren Segmentierung in Keimstreifsta-<br />
dien eine Diskrepanz. Während Larven mit nur 3 oder 4 abdominalen Segmenten<br />
auftreten, finden sich in Keimstreifen stets mindestens 7 abdominale Segmentanla-<br />
gen. Es ist also möglich, dass hier Defekte zum Teil erst während der Differenzierung<br />
der Segmente auftreten, also sekundär eine Reduktion der Segmente nach sich<br />
ziehen. Der Blick auf frühere Entwicklungsstadien macht allerdings deutlich, dass die<br />
hier beschriebenen Embryonen den RNAi-Effekt höchstwahrscheinlich nur in schwa-<br />
cher Ausprägung zeigen, da sie auf deutliich stärkere Defekte hinweisen.<br />
So verdeutlicht der Nachweis des Paar-Regel Gens eve starke Defekte in blas-<br />
todermalen Stadien (Abb. 19, E-H). Die embryonale Anlage ist deutlich verkleinert,<br />
der der Anlage der Serosa im Wildtyp entsprechende Bereich, ist in der Folge flä-<br />
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