Dokument 1.pdf - OPUS - Friedrich-Alexander-Universität Erlangen ...

Inhaltsverzeichnis
3.1.2. Die Auswertungen erlauben die Analyse der zu untersuchenden
Prozesse mit hoher Sensitivität......................................................... 191
3.1.3. iBeetle ist mit den vorgegebenen zeitlichen Rahmenbedingungen
realisierbar........................................................................................ 194
3.2. Der Pilotscreen illustriert die Chancen und Risiken des Hauptscreens..... 195
3.2.1. Technische Verbesserungen könnten die Effizienz des Hauptscreens
noch erhöhen.................................................................................... 195
3.2.2. Der Pilot-Screen zeigt kritische Aspekte der Screen-Durchführung auf
.....................................................................................................196
3.2.3. Der Pilot-Screen macht die Effektivität eines RNAi-Screens deutlich198
3.2.4. Der Pilot-Screen suggeriert eine hohe Zahl an Tribolium-Genen deren
Verlust zu Letalität in unterschiedlichen Stadien führt ...................... 201
3.2.5. Die Auswertung und Kategorisierung der Phänotypen ist von größter
Bedeutung für den Erfolg des Screens............................................. 203
3.2.6. iBeetle hat sehr gute Chancen, seine Ziele zu erreichen.................. 206
4. Material und Methoden..................................................................................... 209
4.1. Synthese doppelsträngiger RNA komplementär zu zufällig gewählten cDNA
Klonen ...................................................................................................... 209
4.2. Detaillierte Durchführungsanweisung zum iBeetle Screening Schema..... 210
4.2.1. Verwendete Stämme ........................................................................ 211
4.2.2. Pupale Injektion und darauf folgende Auswertungen........................ 212
4.2.3. Larvale Injektion und darauf folgende Auswertungen....................... 216
Allgemeine Diskussion............................................................................................ 221
Anhang ................................................................................................................... 225
1. Sequenzen................................................................................................... 225
2. Ergänzende Ergebnisse zu nanos/pumilio pRNAi........................................ 228
3. Zeitaufwand der iBeetle-Arbeitschritte ......................................................... 230
4. Alublöcke für larvale Injektionen .................................................................. 231
5. Zusammenfassung der Ergebnisse des iBeetle Pilot-Screens..................... 232
6. Liste der im Pilot-Screen injizierten Fragmente............................................ 233
7. Definition der im Pilot-Screen zu dokumentierenden Phänotypen ............... 239
Literatur................................................................................................................... 242